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双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素-2 mRNA的表达被引量：5: 2003年; 目的　检测双歧杆菌对人肠腺上皮细胞β-防御素 - 2 (h BD- 2 )基因的激活作用及其活性组分。方法　应用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法和 Northern杂交检测 HT- 2 9细胞 h BD- 2 m RNA的表达 ;采用超声破碎细胞、超速离心、蛋白萃取等方法分离双歧杆菌胞壁蛋白质成分。结果　 RT- PCR和 Northern杂交分析显示 ,在正常培养条件下 HT- 2 9细胞无可见的 h BD- 2 m RNA表达信号 ,但在双歧杆菌菌体、细胞壁和胞壁蛋白刺激下均检测出显著的 h BD- 2 m RNA表达。结论　双歧杆菌能诱导人肠腺上皮细胞 h BD- 2基因的表达。; 王国兴冯云汪宇辉黄宁吴琦王伯瑶; 关键词：Β-防御素-2 基因表达

抗菌肽的基因表达调控研究进展被引量：5: 2001年; 抗菌肽在宿主抵抗病原微生物感染中起重要作用 ,是天然免疫的重要介质。果蝇抗菌肽受imd基因编码物质通路和TollNF κB通路的调控。人α 防御素主要在中性粒细胞、帕内特 (Paneth )细胞分化过程合成并贮存于胞浆颗粒中 ,于感染时释放。β 防御素主要由上皮细胞生成。LPS、TNF α、IL 1β等炎症介质可诱导人β 防御素hBD 2基因的表达 ,但hBD 1基因对这些刺激因子却不起反应。hBD 2的诱导性表达与其基因调控序列中κB元件有关。; 祝秉东黄宁王伯瑶; 关键词：抗菌肽防御素基因表达调控

人抗菌肽HBD-2的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 2005年; 制备人β-防御素2(HBD-2)多克隆抗体,以用于HBD-2蛋白水平表达的检测。提取人肠腺上皮细胞株Caco-2总RNA,设计引物,应用RT-PCR从其总RNA中扩增HBD-2成熟肽cDNA片段,以pGEX-1λT为载体,构建原核表达质粒pGEX-1λT-HBD-2。大肠杆菌裂解物经亲合层析纯化后获得分子量约30kDa的融合蛋白,将此融合蛋白免疫新西兰兔,并用正辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,ELISA法显示抗血清对HBD-2的效价为1∶12800,Western印迹显示抗血清可识别HBD-2。本实验结果证明应用重组融合小肽代替白蛋白或甲状腺-肽偶联免疫可获得其高效价的识别HBD-2的多克隆抗体,为今后从蛋白质水平研究HBD-2基因的诱导表达,包括组织分布和基因表达调控等研究打下了基础。; 王国兴冯云吴琦阎蓉华李洵王伯瑶黄宁; 关键词：HBD-2 原核表达多克隆抗体 Β-防御素2 天然免疫

炎症信号受体Toll基因在人肺腺上皮细胞和血管内皮细胞的表达被引量：1: 2001年; 目的　研究炎症信号受体 Toll m RNA在人单核吞噬细胞系 (THP- 1)、脐静脉血管内皮细胞(UVECs)和肺腺上皮细胞系 (SPC- A- 1)的表达情况。方法　分别设计人 TL R2 和 TL R4两对特异引物 ,从 THP- 1、UVECs和 SPC- A- 1提取总 RNA,采用一步法 RT- PCR和地高辛标记的 Northern杂交技术检测 TL R2 和 TL R4在 3种细胞的表达。结果　 RT- PCR和 Northern杂交显示 ,3种细胞均表达 TL R4受体 ,但仅 THP- 1和人 U VECs表达 TL R2 受体。结论　本实验结果表明除单核吞噬细胞外 ,大血管内皮细胞和肺腺上皮细胞亦表达 Toll受体基因 ,提示在炎症反应中 Toll信号受体可能介导这些细胞效应分子基因转录激活的信号传导。; 梁峰黄宁王伯瑶; 关键词：炎症 TOLL受体血管内皮细胞

克雷伯氏肺炎杆菌内毒素诱导小鼠β-防御素-4基因表达及其信号传递被引量：3: 2001年; 目的　探讨用克雷伯氏肺炎杆菌内毒素 (L PS)对小鼠 β-防御素表达的影响及其相关的信号传导通路。方法　分别给予 C3H /He J和 C3H /He N小鼠腹腔注射 L PS (4mg/kg) ,于不同时间点采取气管、肺、肾等组织 ,提取总 RNA。用 RT- PCR检测各组织β-防御素 - 3和 /或β-防御素 - 4m RNA的表达 ,并对扩增出的 c DNA片段进行测序 ;同步用 Western blot法检测该两系小鼠肺脏 I-κBα磷酸化情况 (p- I-κBα)和 I-κBα的含量。结果　 1经L PS处理 2 4小时后的 C3H/He N小鼠 ,其肺脏表达 β-防御素 - 4m RNA 而 C3H/He J小鼠未见表达 ;2与未给予L PS处理小鼠比较 ,经 L PS处理 4小时后 ,C3H/He N小鼠肺组织 p- I- κBα含量明显增高 ;L PS处理后 8小时 ,p- I-κBα以及 I- κBα含量均呈减少趋势 ;至第 2 4小时 ,p- I- κBα和 I- κBα含量均明显减少。而 C3H/He J小鼠肺组织 p- I-κBα及 I- κBα含量均未见相应变化。结论　克雷伯氏肺炎杆菌内毒素能诱导 C3H/He N小鼠肺 β-防御素 - 4的表达 ;其诱导表达作用与 Toll受体蛋白 - 4介导的; 蔡绍晖杜军陈新年黄宁王伯瑶长谷川高明王莉马秀杨北市清幸长濑文彦Takaiki Hasegawa; 关键词：Β-防御素 NF-KB

层流切应力刺激对人脐静脉血管内皮细胞Toll样受体表达的影响: 目的本研究检测低切应力层流刺激对人脐静脉血管内皮细胞TLR-2和TLR-4基因表达的影响。方法无菌条件下取健康产妇分娩的新鲜脐带,用0．1％胶原酶消化,分离脐静脉血管内皮细胞,然后培养于M199完全培养液,内皮细胞长满培...; 梁峰胡大一王伯瑶黄宁吴琦; 文献传递

卡介苗增强人β-防御素-1基因在肺腺上皮细胞表达的分子调节机制: 2003年; 目的　研究人 β-防御素 - 1(h BD- 1)基因启动子结构及卡介苗胞壁蛋白增强其 m RNA在肺腺上皮细胞 (SPC- A- 1)中表达的转录调控机制。方法　 h BD- 1基因 5′-端上游序列被连接入无启动子的 p EGFP- 1质粒和p CAT basic质粒 ,构建了系列 5′-端缺失的 p EGFP h BD- 1及 p CAT h BD- 1报告质粒。p EGFP h BD- 1质粒转染细胞后用荧光倒置显微镜观察绿色荧光表达强度。 p CAT h BD- 1报告质粒和 p SV- β- Galactosidase control质粒 (内对照 )共转染 SPC- A- 1细胞后 ,给予卡介苗胞壁蛋白活性组分刺激 ,用 EL ISA检测 CAT和 β- Gal浓度。结果　 h BD-1基因上游 - 314段有较强的启动子活性 ,- 6 9段则启动活性减弱 ;BCG刺激后 ,即使上游序列缩短至 - 6 9位点时 ,报告基因 CAT相对表达量仍明显增高。该区域有一同源性极高的 C/ EBPβ(CCAAT/ Enhancer- binding proteinβ)结合元件。结论　 h BD- 1基因上游 - 314 bp段具有较完整的启动子活性 ,其中含有 C/ EBPβ结合位点的 - 6 9/ +5 4 bp序列介导卡介苗对 h BD-; 祝秉东黄宁吴琦王伯瑶; 关键词：转录调控卡介苗 MRNA

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国家自然科学基金(39970293)