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一株氯苯降解菌的分离鉴定被引量：3: 2009年; 氯苯是重要的化工原料,长期使用对环境造成了严重的危害.为了研究生物方法修复自然环境的可行性,采集化工厂排污口的污泥,利用富集驯化等方式,分离到一株能够降解氯苯的菌株KD131.通过分析该菌株的16SrRNA基因序列,并结合BIOLOG微生物鉴定系统的测定结果,确定KD131为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus),同时构建了系统进化树.利用气相色谱方法,对分离菌株KD131降解氯苯的能力进行了初步分析,24h内氯苯分解率达60.8%.进一步研究发现,KD131对苯和邻二氯苯也具有一定的降解能力.; 杨洪江卢彦珍张朝正; 关键词：氯苯生物降解 RRNA BIOLOG

鲍曼不动杆菌烈性噬菌体的分离与纯化被引量：8: 2010年; 利用柱层析方法,纯化鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)烈性噬菌体AB1。首先采用聚乙二醇6000沉淀方法,初步分离裂解液中的噬菌体,噬菌体纯度由6.1×1010 pfu/mg提高到37×1010 pfu/mg,噬菌体回收率为58.8%,蛋白质去除率为90.6%;噬菌体粗提样品经Sepharose 4B凝胶过滤层析柱进一步纯化,纯度提高到73×1010 pfu/mg,噬菌体回收率为95.7%,蛋白质去除率为48.1%;收集的噬菌体样品最后经DEAE-52阴离子交换层析柱处理,噬菌体纯度为40×1010 pfu/mg,回收率为50.8%,蛋白去除率15.6%。内毒素分析结果显示,Sepharose 4B凝胶过滤层析纯化的噬菌体样品中,内毒素含量为443.8 EU/mg,而DEAE-52阴离子交换层析纯化的噬菌体样品中,内毒素含量为544.4 EU/mg。实验结果显示,PEG沉淀方法与Sepharose 4B凝胶过滤方法能够有效地提高噬菌体纯度,而DEAE-52阴离子交换层析则不能提高噬菌体的纯度,也无法有效地去除样品中的内毒素。; 梁莉杨洪江金鑫; 关键词：噬菌体聚乙二醇6000 凝胶过滤

氯苯降解菌的筛选鉴定及降解特性研究被引量：10: 2009年; 本文采集化工厂排污口的污泥样品,在含有氯苯为唯一碳源的基本培养基中,先后分离筛选出7株能够降解氯苯的微生物菌株。通过对分离菌株的16SrRNA基因序列进行分析,发现其中5株细菌分别属于放线菌目的考克氏菌属(KD139)、红球菌属(KD140和KD142)和节杆菌属(KD230和KD232),1株细菌属于杆菌目的芽胞杆菌d属(KD178),另外1株细菌属于黄色单孢菌目的寡食单胞菌属(KD237);同时我们构建了系统进化树,确定分离菌株的相对进化地位。本文还利用气相色谱方法,对分离菌株降解氯苯的能力进行了初步分析,其中寡食单胞菌KD237降解氯苯能力最高,24h内氯苯分解率达60.78%。; 杨洪江卢彦珍; 关键词：氯苯生物降解 RRNA基因

蓟运河(宁河县段)水质状况的初步分析被引量：8: 2010年; 蓟运河是流经京津冀地区的重要水系之一,近年来污染状况严重,并且缺乏系统的环境监测数据。采集蓟运河宁河县段河水水样,按照国家规定的河流评价标准,对其中的主要项目进行了分析。检测结果显示:粪大肠菌群数达到9.4×104L-1;化学需氧量COD为83.52 mg/L;总氮含量为14.05 mg/L;总磷含量为0.59 mg/L。经与《地表水环境质量标准》GB/T3838-2002比较,粪大肠菌群、COD、总氮和总磷这4项指标分别是劣V类限值的2.4、2.1、7.0和1.5倍,初步判断蓟运河宁河县段的河水水质为劣V类。; 郎会花杨洪江宋妍; 关键词：蓟运河水质分析

农杆菌介导转化黑曲霉分生孢子及产孢缺陷突变子T-DNA插入位点分析被引量：3: 2011年; 【目的】利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)T-DNA系统,建立转化黑曲霉(Aspergillus niger)分生孢子的方法,构建T-DNA插入突变子文库,为黑曲霉基因组功能注释研究打下基础。【方法】采用携带二元质粒载体pCAMBIA1301的农杆菌EHA105,诱导转化黑曲霉分生孢子,筛选具有潮霉素抗性的突变子。分析抗性稳定突变子菌株的表型,采用反向PCR方法分析T-DNA插入位点相邻位置的序列,并推测突变基因可能具有的功能。【结果】实验获得具有稳定潮霉素抗性转化子193株,转化率为5.6×102转化子/108分生孢子。部分转化子表型出现较为明显改变,其中一株不能产孢,对其T-DNA插入位点序列分析比对结果显示,突变基因属于超级转运家族(major facilitator superfamily,MFS)。【结论】本研究建立的农杆菌转化黑曲霉分生孢子平台,结合T-DNA插入突变位点分析,可以为黑曲霉基因组功能注释研究提供一种简便有效的途径。; 黄文杨洪江秦慧彬; 关键词：农杆菌介导转化 T-DNA 反向PCR

黑曲霉纤维素酶突变子T-DNA插入位点的遗传分析及性质鉴定: 2011年; 采用羧甲基纤维素钠筛选培养基,对黑曲霉(Aspergillus niger)T-DNA突变子文库进行筛选,分离到一株纤维素酶分泌水平较低的菌株AN-108,为野生型菌株的83.3%。进一步测定该突变子固体发酵的纤维素酶活力,与野生型菌株相比没有明显差别,推测与固体发酵培养基中含有的天然糖类有关。在添加不同糖类的CMC-Na平板上培养该突变子,菌落周围均出现较明显的水解圈,结果显示糖类可能作为诱导物克服突变带来的影响。为了确定突变子AN-108中何种基因被阻断,采用反向PCR方法分析了T-DNA插入位点的序列,获得序列经过比对分析发现,该序列与黑曲霉An14g03730同源程度达90%,编码富含脯氨酸蛋白(proline-rich protein,PRP)。; 黄文杨洪江秦慧彬; 关键词：黑曲霉反向PCR

强启动子glaA介导cbhB基因在黑曲霉中的表达被引量：1: 2010年; 黑曲霉纤维素酶三类不同酶系中,纤维二糖水解酶基因表达处于很低水平,导致纤维素酶总体活力水平不高。为构建黑曲霉纤维素酶高产菌株,采用基因工程方法,全基因合成拼接黑曲霉高表达葡萄糖淀粉酶基因glaA的强启动子片段与纤维二糖水解酶基因cbhB编码区片段,然后将杂合基因克隆到二元载体pCAMBIA1301上,重组质粒通过农杆菌介导转化黑曲霉分生孢子,携带杂合基因的T-DNA片段插入到黑曲霉转化子的染色体上,共筛选到48个具有潮霉素抗性的转化子。纤维素酶活力水平测定结果显示,转化子A3-9的CMC酶活力最高,为野生型黑曲霉菌株的1.31倍;转化子B1-7与A3-6的滤纸酶活力最高,为野生型黑曲霉菌株2.51倍。另外,初步分析了杂合基因在黑曲霉中的表达所需的诱导条件。; 秦慧彬杨洪江黄文李玲艳; 关键词：黑曲霉杂合基因

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天津市自然科学基金(08JCYBJC26600)