国家高技术研究发展计划(2006AA02A253)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：杨光吴娜许涛刘玉高亚萍更多>>
- 相关机构：军事医学科学院大理学院复旦大学上海医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 金黄色葡萄球菌Efb蛋白的表达、纯化及功能抗体的制备被引量：3
- 2009年
- 目的:利用大肠杆菌重组表达金黄色葡萄球菌外分泌蛋白Efb(extracellular fibrinogen-binding protein,细胞外纤维蛋白原结合蛋白),检测其生物学活性,并制备其功能性抗体,以探讨Efb蛋白在金葡菌感染中的生物学意义。方法:以金黄色葡萄球菌NCTC-8325菌株基因组为模板,PCR扩增efb基因,构建重组表达载体pET28a-Efb,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,通过Ni柱亲和纯化获得Efb;通过补体激活试验及竞争ELISA的方法检测Efb蛋白的生物学活性,免疫动物制备抗体。结果:获得了纯度较高的重组Efb蛋白,重组蛋白能够有效抑制CH50以及AH50,并且制备了Efb的功能性多克隆抗体。结论:Efb蛋白能够抑制补体激活的经典途径及替代途径,其特异性抗体能够阻断对于补体激活经典途径的抑制作用。
- 张鑫高亚萍董洁刘玉吴娜邵宁生杨光
- 关键词：葡萄球菌金黄色EFB抗体
- 人血红素加氧酶-1的原核表达、纯化及其中和抗体的制备被引量：1
- 2010年
- 目的确定人血红素加氧酶-1（human heme oxygenase-1，hHO-1）在大肠埃希菌中的表达条件与纯化方法，利用纯化的蛋白制备具有中和活性的hHO—1多克隆抗体。方法将hHO-1原核表达质粒pMW172／hHO-1转人大肠埃希菌菌株BL21，通过改变摇床转速、诱导剂IPTG浓度和培养时间确定hHO-1蛋白的最佳可溶性表达条件；利用超声破碎、高速离心、分级盐析、分子筛层析等方法纯化hHO-1蛋白，建立体外HO-1活性测定方法检测hHO-1蛋白的活性；利用纯化的hHO-1活性蛋白作为抗原免疫新西兰兔，制备多克隆抗体；利用ELISA方法和Western印迹技术分别测定抗体的效价和特异性，通过HO-1活性测定检测抗体的中和活性。结果确定hHO-1最佳可溶性表达条件为：37℃、200r／min培养3h后，0．1 mmoL／LIPTG诱导培养4h。超声破碎菌体，上清经30％～40％盐析纯化及分子筛层析纯化，获得活性hHO-1蛋白，收得率为30．3％，纯化倍数为2．83倍，纯度为90％。制备的抗hHO-1的兔血清效价达到10^6，并能中和掉46％hHO-1的催化活性。结论为hHO-1蛋白的表达和纯化以及多克隆抗体制备确立了可行的技术方案；获得了高纯度活性hHO-1蛋白及hHO-1多克隆抗体，为HO-1功能、结构研究，以及相关疾病研究奠定了基础。
- 魏旭冉杨军刘庆军王波周虹
- 关键词：血红素加氧酶原核表达可溶性表达纯化中和抗体
- 葡萄球菌呼吸相关双组分系统SrrAB研究进展被引量：3
- 2012年
- 葡萄球菌呼吸相关双组分系统SrrAB能感应外界O2浓度,并将信号传至胞内,调控下游基因的转录,以应对外界环境的变化。有研究表明,金黄色葡萄球菌SrrAB在有氧条件下促进毒力因子的表达,抑制生物膜的形成;在厌氧条件下抑制毒力因子的表达,促进生物膜的形成。另外,在有氧及厌氧条件下,金黄色葡萄球菌SrrAB调控生长代谢的途径也不一致。表皮葡萄球菌中也存在类似的双组分系统SrrAB,且与金黄色葡萄球菌SrrAB具有较高同源性,但目前尚不清楚两者在生长代谢及毒力调控方面的异同。结合课题组研究工作,简要综述葡萄球菌SrrAB的调控机制,着重比较其在有氧及厌氧条件下的调控差异,这对临床诊治葡萄球菌引起的感染具有一定的借鉴意义。
- 武有聪许涛刘华勇韩海燕吴旸白丽瞿涤
- 关键词：葡萄球菌
