广东省自然科学基金(5004272)
- 作品数：7 被引量：33H指数：3
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- 抗菌肽cecropin B和兔NP-1融合基因转化鱼腥草的研究被引量：11
- 2010年
- 目的:将抗菌肽cecropin B和兔NP-1(CN)融合基因转入鱼腥草,培育鱼腥草基因工程新品种。方法:设计并合成抗菌肽融合基因CN,构建重组质粒pBI121-CN,并转入农杆菌LBA4404,以农杆菌介导法转化鱼腥草外植体,将卡那霉素筛选获得的再生抗性植株以快速筛选PCR法进一步筛选阳性植株,再提取基因组DNA进行PCR-Southern鉴定,RT-PCR分析目的基因在鱼腥草中的表达,以大肠杆菌K12抑菌圈实验和立枯丝核菌感染实验分析转基因鱼腥草抗菌能力。结果:抗菌肽基因已整合到转基因鱼腥草基因组中并表达,表现出抗菌能力增强的性状。结论:以抗菌肽融合基因CN转化鱼腥草,初步获得抗菌活性提高的转基因植株。
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- 关键词：鱼腥草抗菌肽农杆菌
- 农杆菌介导鱼腥草遗传转化的主要影响因素
- 2010年
- 目的:研究鱼腥草遗传转化的影响因素,以提高转化效率,获得转基因植株。方法:通过分析GUS报告基因的瞬时表达和外植体愈伤分化情况比较菌株质粒组合、菌液浓度、侵染时间、预培养时间、共培养时间、抗生素种类和浓度等因素对转化的影响,应用PCR和Southern blot技术鉴定转基因植株基因组中的外源基因。结果:菌液浓度A600为0.3、26℃侵染15min条件下侵染,添加乙酰丁香酮有利于转化,适宜的预培养时间和共培养时间与菌株/质粒组合有关,农杆菌LBA4404/pBI121优于EHA105/pCAMBIA1305.2组合。经条件优化,转化外植体的GUS染色阳性率在60%～80%之间,经鉴定外源基因已整合到转基因鱼腥草基因组中。结论:通过影响因素的优化研究,获得了鱼腥草转基因植株,为培育鱼腥草基因工程新品种奠定了基础。
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- 关键词：鱼腥草农杆菌影响因素
- 转基因技术在药用植物中的应用被引量：5
- 2009年
- 药用植物是我国中药宝库的重要组成部分,应用植物转基因技术提高植株抗病性,优化中药植物种质资源,培育药效成分量高的新型转基因药材,或以基因工程细胞生产药用价值高、来源有限的中药活性成分,对中药现代化和可持续性发展具有重要意义。结合转基因植物的历史发展与植物转基因技术现状,论述了基因工程技术在传统中药材中的应用和发展前景。
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- 关键词：药用植物中药基因技术
- 转基因中药前期安全性评价技术探讨被引量：2
- 2013年
- 转基因技术既可赋予中药植株有利的预期效应,也可产生不利的非预期效应。应用分子生物学技术、依据实质等同性原则对转基因中药进行基因组功能及代谢终产物的分析,可初步检查非预期效应,获得具有一定预见性的前期评价结果,为进一步的药理学、毒理学评价提供参考信息。本文探讨转基因植物相关评价技术在转基因中药中的应用。
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- 关键词：安全性评价组学技术实质等同性
- 药用植物细胞悬浮培养的影响因素被引量：14
- 2011年
- 中药现代化已成趋势,对药用植物的用量及质量要求不断提升,药用植物细胞悬浮培养为获取更多的中药资源开辟了新途径。如何建立起良好的细胞悬浮培养体系是药用植物细胞悬浮培养的关键。从愈伤组织、培养基、激素、有机附加物、培养条件等几个方面论述了药用植物细胞悬浮培养的影响因素。
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- 关键词：药用植物悬浮细胞影响因素
- 农杆菌介导的抗菌肽基因转化阳春砂愈伤组织的研究被引量：2
- 2012年
- 目的确定遗传转化条件,将抗菌肽CN基因转入阳春砂愈伤组织。方法以阳春砂愈伤组织为受体材料,以农杆菌EHA105/pCAMBIA1305.2-CN工程细胞介导抗菌肽CN基因转化阳春砂,设计正交实验,通过分析gus报告基因的瞬时表达比较转化影响因素,并对目的基因CN进行PCR检测。结果农杆菌浓度、侵染时间、共培养温度、共培养时间及乙酰丁香酮浓度对转化率的影响有显著差异性。阳春砂愈伤组织遗传转化的最佳条件组合是:农杆菌浓度为OD600=0.5,侵染时间10 min,共培养温度24℃,共培养时间4 d,共培养培养基添加乙酰丁香酮200μmol.L-1。gus基因瞬时表达呈阳性的愈伤组织DNA经目的基因CN的PCR检测可见清晰的目的条带。结论建立了农杆菌介导的阳春砂愈伤组织的转化条件,目的基因CN已转入阳春砂愈伤组织。
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- 关键词：农杆菌抗菌肽影响因素
- 阳春砂愈伤组织诱导的多因子正交试验研究被引量：3
- 2011年
- 【目的】优化阳春砂愈伤组织诱导方法,以提高愈伤组织诱导率。【方法】采用正交设计法,观察以未成熟及成熟种子为外植体,以及培养基中添加的不同植物生长物质对阳春砂愈伤组织诱导的影响。【结果】最佳培养基为MS+二氯苯氧乙酸(2,4-D)(0.5 mg/L)+6-苄基腺嘌呤(6-BA)(2 mg/L)+AgNO3(6 mg/L)+酸水解酪蛋白(1 mg/L),植物生长物质中2,4-D对阳春砂愈伤组织的形成影响最关键,未成熟的阳春砂种子是最佳外植体,愈伤组织诱导率最高达到65.41%。【结论】植物生长物质中2,4-D对阳春砂愈伤组织的形成不可或缺,成熟程度低的阳春砂种子更适宜作为愈伤组织诱导的外植体。
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- 关键词：愈伤组织正交试验
