中国中医科学院自主选题项目(ZZ2013002)
- 作品数：12 被引量：63H指数：6
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- 人参三七川芎提取物对复制性衰老血管平滑肌细胞SM22α蛋白的影响被引量：5
- 2016年
- 目的:观察人参三七川芎提取物对复制性衰老血管平滑肌细胞及其骨架蛋白相关蛋白平滑肌22α(SM22α)的影响。方法:以人主动脉平滑肌细胞作为研究对象,复制性衰老9代细胞作为衰老模型,实验分为青年组(5代细胞),模型组(9代细胞),人参三七川芎提取物低、中、高(100,200,400 mg·L-1)剂量组及白藜芦醇组(10μmol·L-1),药物干预时间为48 h。采用β-半乳糖苷酶特异染色法计算蓝染细胞比率,流式细胞技术分析细胞周期,免疫荧光染色观察细胞SM22α形态的改变,实时荧光定量-聚合酶链式反应(q PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测SM22α的mRNA及蛋白表达情况。结果:与青年组比较,模型组细胞体积增大,形态不规则,G0/G1期数量增多,S期数量减少,且β-半乳糖苷酶染色蓝染数量减少(P<0.01),符合衰老模型特点,且SM22α染色模糊暗淡,边缘不显,荧光强度明显减弱,SM22αmRNA及蛋白表达均下降(P<0.01)。与模型组比较,药物干预后,可以有效的增加β-半乳糖苷酶染色蓝染细胞数量,减少G0/G1期的细胞数量,同时增加S期的细胞数量,增强SM22α荧光染色强度,使得SM22αmRNA及蛋白表达均增加,并具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:复制性衰老的血管平滑肌细胞可以作为衰老研究的模型;骨架蛋白相关蛋白SM22α的形态、基因表达和蛋白表达在细胞衰老过程中改变明显,其可能与骨架蛋白一同参与了平滑肌细胞衰老的进程;人参三七川芎提取物一定程度上延缓了血管平滑肌细胞的老化,且对于SM22α有明显干预作用,并可能通过此作用及对骨架蛋白的作用一同延缓血管老化的进程。
- 修成奎雷燕王强景晓杨姜明
- 关键词：衰老血管老化细胞骨架
- 人参三七川芎醇提物对衰老人心脏微血管内皮细胞自噬的影响被引量：11
- 2017年
- 目的观察人参三七川芎醇提物延缓内皮细胞衰老的可能作用机制。方法实验分为衰老细胞组、自噬模型组、白藜芦醇组、人参三七川芎醇提物组,除衰老细胞组外,其余各组的衰老人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)通过饥饿方法建立自噬模型。白藜芦醇组用10μmol/L白藜芦醇溶液培养,人参三七川芎醇提物组用100 mg/L人参三七川芎提取物溶液培养48 h。采用电子显微镜观察细胞中自噬小体的形态学改变,western blot法检测自噬蛋白Beclin1、LC3B表达情况。结果与自噬模型组比较,人参三七川芎醇提物组和白藜芦醇组细胞质中出现较多的独立双层及多层膜结构的自噬体。与自噬模型组比较,人参三七川芎醇提物组和白藜芦醇组Beclin1、LC3B蛋白表达明显增多(P<0.01),且白藜芦醇组Beclin1、LC3B蛋白的表达明显多于人参三七川芎醇提物组(P<0.01)。结论人参三七川芎醇提物可促进衰老内皮细胞自噬体的产生及自噬蛋白的表达,这可能是其延缓内皮衰老的重要机制之一。
- 王强修成奎杨静雷燕
- 关键词：衰老人参心脏微血管内皮细胞
- 白藜芦醇延缓心肌微血管内皮细胞衰老的作用机制被引量：7
- 2018年
- 目的：探讨白藜芦醇延缓人心脏微血管内皮细胞衰老的作用,从细胞骨架角度分析其作用机制。方法：通过热休克蛋白27（HSP27）shRNA细胞系的建立,将组别为8代复制性衰老模型组（衰老组）,白藜芦醇组（10μmol·L-1）,空载质粒（Mock）组,HSP27shRNA组,HSP27shRNA＋白藜芦醇组（10μmol·L-1）。运用β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老,细胞计数（cell counting kit-8,CCK-8）检测细胞增殖能力,激光免疫共聚焦显微镜观察纤维状肌动蛋白（F-actin）和球型蛋白单体（G-actin）的形态学改变,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测F-actin蛋白的表达情况。结果：与衰老组比较,白藜芦醇组β-半乳糖苷酶染色比例下降（P〈0.01）,细胞增殖能力增加（P〈0.01）,F-actin线条较为完整的分布于细胞边缘,G-actin圆润饱满的分布于细胞中央,蛋白表达减少（P〈0.01）;热休克蛋白27（heat shock protein 27,HSP27）沉默后,与Mock组比较,HSP27shRNA组及HSP27shRNA＋白藜芦醇组β-半乳糖苷酶染色比例增加（P〈0.01）,细胞增殖能力下降（P〈0.01）,F-actin外周致密带边缘变得毛糙不规整,崩解消散,细胞的形状不能清晰的呈现;G-actin表现为边缘变模糊呈絮状向外延伸,而细胞中央区域染色离散,形态不规则,F/G-actin的平均光密度值下降（P〈0.01）,蛋白表达减少（P〈0.01）。结论：白藜芦醇能够延缓内皮衰老,促进增殖,其中HSP27下调F-actin的表达可能是白藜芦醇延缓内皮衰老的重要机制所在。
- 王强修成奎雷燕杨静
- 关键词：白藜芦醇纤维状肌动蛋白
- 应用Abrio偏光影像技术探讨益气活血中药对衰老大鼠胸主动脉纤维结构的干预作用被引量：3
- 2018年
- 目的利用Abrio偏光影像技术定量观察大鼠胸主动脉的纤维结构,探讨增龄引起的胸主动脉纤维结构的改变及益气活血中药的干预作用。方法建立自然衰老大鼠模型,将衰老大鼠分为5组:衰老组、益气活血中药人参三七川芎提取物(中药)高[1493.4 mg/(kg·d)]、中[746.7 mg/(kg·d)]、低[373.4mg/(kg·d)]剂量组,氯沙坦阳性对照(氯沙坦)组,另设一青年对照组,每组7只大鼠。中药干预15周后,制作胸主动脉石蜡切片,未染色条件下利用Abrio液晶偏光影像系统对纤维的排列方向进行定性和定量分析。对胸主动脉行苦味酸天狼猩红染色,使胶原纤维独立成像,Abrio下观察胶原纤维,并对胶原纤维双折光的强度进行定性和定量分析。结果与青年组比较,衰老组胸主动脉管壁增厚,伪彩和矢量标注示纤维的排列方向发生紊乱,双折射信号方位角的变异程度增加(P<0.01),光程差增大(P<0.01)。与衰老组比较,中药高、中、低剂量组及氯沙坦组胸主动脉管壁变薄,伪彩和矢量标注示纤维排列方向更整齐。中药高、中、低剂量组纤维双折光信号方位角的变异程度较衰老模型组减小(P<0.01),氯沙坦组纤维双折光信号方位角的变异程度与衰老组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。中药高、中、低剂量组及氯沙坦组胶原纤维的光程差均较衰老组减小(P<0.01)。结论 Abrio较传统的偏振光技术更适用于血管纤维结构的研究,其能更加客观、清晰地反映血管纤维的形态结构;益气活血中药可以改善增龄引起的胸主动脉管壁重构,抑制胶原纤维增生,减轻纤维排列紊乱的现象,延缓血管的老化。
- 陈睿王毅王毅
- 关键词：血管老化益气活血中药
- 利用偏光影像技术定量观察大鼠胸主动脉中纤维结构被引量：3
- 2014年
- 目的:本实验选取大鼠胸主动脉为研究对象,探讨定量偏光影像技术对双折光性物质的成像特点与适用研究领域。方法:采用Abrio液晶偏光影像系统在未经染色条件下对青年和衰老大鼠胸主动脉纤维结构进行观察,然后对主动脉切片进行苦味酸天狼猩红染色,对比Abrio和传统偏振光技术成像的差别。结果:较传统偏振光显微镜不同,Abrio可以对纤维双折射的方位角和光程差进行定量分析。在未经染色的条件下,Abrio可对大鼠胸主动脉中具有双折光性的纤维结构清晰成像,而传统偏光显微镜在未经染色条件下不能给出有意义的信息。经苦味酸天狼猩红染色后,对比传统偏振光技术,Abrio使成像不受纤维排列方向和人为因素的影响,较为完整地反映主动脉中纤维的结构及分布情况。结论:Abrio液晶偏光影像技术能够实现对样本双折光的强弱及方向的定性和定量分析,在未经染色的条件下给出微观结构信息,适合于心血管疾病的检测与评估,可拓展应用面宽,将在未来生物医药领域中体现更大的价值。
- 陈睿陈辉雷燕马淑骅王毅
- 关键词：双折射偏振光纤维
- 人参三七川芎提取物对复制性衰老内皮细胞微丝形态学的影响被引量：7
- 2015年
- 目的探讨人参三七川芎提取物延缓内皮衰老的可能作用机制。方法通过细胞体外传代,将人心脏微血管内皮细胞（HCMEC）培养至第8代方法建立内皮细胞复制性衰老模型,结合β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色、CCK-8检测细胞增殖能力、流式细胞仪分析细胞周期方法进行衰老细胞鉴定。96孔板按照6×103~8×103/孔接种细胞,分为青年组、衰老组、白藜芦醇组和中药低、中、高剂量组,每组3个复孔。青年组为5代青年细胞,其余各组为8代复制性衰老细胞,白藜芦醇组加浓度为10μmol/L白藜芦醇溶液100μl,中药低、中、高剂量组分别加浓度为50、100、200 mg/L的人参三七川芎提取物100μl。观察各组24 h、48 h、72 h后纤维状肌动蛋白（F-actin）、单体肌动蛋白（G-actin）的形态学改变。结果衰老组细胞SA-β-gal染色阳性明显高于青年组（P〈0.01）;衰老组较青年组细胞表现为G0/G1期细胞比例上升,S期和G2/M期细胞比例下降,细胞增殖能力降低（P〈0.01）。衰老组F-actin出现断裂、应力纤维,G-actin表现为向细胞周边区域伸展移位,而细胞中央区域染色变弱;白藜芦醇组和中药低、中、高剂量组可以维持复制性衰老HCMEC微丝的结构,减少G-actin向F-actin的转变,减少应力纤维的形成,并且干预效果随着干预时间延长表现更加明显。结论人参三七川芎提取物能够保持复制性衰老HCMEC微丝的正常形态,这可能是其延缓内皮衰老的重要机制。
- 王强雷燕欧阳竞锋修成奎高永红赵明镜王毅
- 关键词：人参川芎细胞衰老纤维状肌动蛋白
- 人参三七川芎提取物对复制性衰老血管平滑肌细胞骨架蛋白微丝的影响被引量：9
- 2016年
- 观察人参三七川芎提取物对复制性衰老血管平滑肌细胞骨架蛋白微丝F-actin和G-actin的影响。以人主动脉平滑肌细胞(HASMC)作为研究对象,复制性衰老9代细胞作为衰老模型,实验分为青年组(5代细胞)、模型组(9代细胞)、中药低剂量组(100 mg·L-1)、中药中剂量组(200 mg·L-1)、中药高剂量组(400 mg·L-1)及白藜芦醇组(10μmol·L-1),药物干预时间为48 h。应用β-半乳糖苷酶特异染色法计算蓝染细胞比率,CCK-8检测细胞增殖能力,流式细胞技术分析细胞周期,免疫荧光染色观察细胞F-actin和G-actin形态的改变,Western blot检测F-actin蛋白的表达情况。与模型组相比,中药各给药组及白藜芦醇组可以有效的降低β-半乳糖苷酶染色蓝染细胞数量,提高细胞的增殖能力,减少G0/G1期的细胞数量,同时增加S期的细胞数量,减少F-actin蛋白的表达量及应力纤维的形成,且药物干预效果明显,具有统计学意义。复制性衰老的血管平滑肌细胞可以作为衰老研究的模型,细胞骨架微丝蛋白G-actin和F-actin形态及蛋白表达在细胞衰老过程中改变明显,人参三七川芎提取物对细胞G-actin和F-actin有明显干预作用,其可能间接通过此作用延缓了血管老化的进程。
- 修成奎雷燕王强景晓杨
- 关键词：衰老血管老化细胞骨架
- 自然衰老大鼠血管老化中细胞骨架的改变及人参三七川芎提取物的干预作用被引量：7
- 2017年
- 目的观察人参三七川芎提取物对自然衰老大鼠胸主动脉及骨架蛋白的影响。方法 50只SD雄性大鼠(8~9月龄)按体重随机分为模型组、中药低、中、高剂量组及白藜芦醇组,每组各10只,模型组大鼠正常饲养至21月龄;各给药组大鼠分别从18月龄开始药物干预,中药低、中、高剂量组给药剂量分别为576、1 152、2 305 mg/kg,白藜芦醇组给药剂量为50 mg/kg,模型组按体重给予等体积的纯净水,每日1次,连续灌胃3个月;同时以10只SD雄性大鼠(3月龄)作为青年对照组(青年组)。应用HE染色观察胸主动脉血管形态的改变,β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)特异染色法计算蓝染组织比率,免疫荧光染色观察骨架蛋白F-actin形态的改变,Western blot法检测骨架蛋白F-actin和SM22α表达情况。结果与青年组比较,模型组血管内膜损伤且不光滑,中膜明显增生且排列紊乱,弹力板扭曲、断裂、结构不完整,外膜增生明显,SA-β-gal染色组织蓝染比率明显增加(P<0.01),F-actin荧光强度及蛋白表达明显增多(P<0.01),而SM22α蛋白表达明显减少(P<0.01)。药物干预后,各给药组血管壁内皮轻度受损,弹力膜结构较完整,中膜及外膜厚度明显降低(P<0.01);SA-β-gal染色中药中剂量及白藜芦醇组蓝染比率减少(P<0.05),而中药低、高剂量蓝染比率改变无统计学意义(P>0.05);各给药组F-actin荧光强度明显降低(P<0.01);蛋白表达方面,中药中、高剂量组及白藜芦醇组F-actin蛋白表达减少(P<0.01),而中药低剂量组改变则无统计学意义(P>0.05),各给药组SM22α蛋白表达增加(P<0.01)。结论细胞骨架微丝蛋白F-actin形态及蛋白表达在衰老过程中改变明显,其相关蛋白SM22α蛋白表达亦改变明显,可能共同参与了血管老化的进程;人参三七川芎提取物可以一定程度上延缓血管老化,且对于血管F-actin和SM22α蛋白有明显干预作用,可能间接通过此作用延缓了血管老化的进程。
- 修成奎雷燕王强景晓杨姜明
- 关键词：衰老血管老化细胞骨架
- 端粒、端粒酶与血管老化的关系被引量：6
- 2015年
- 研究伴随增龄而出现的血管老化问题已成为防治心血管疾病的新靶点。血管老化作为一种退行性疾病,其病理改变主要涉及内皮细胞和平滑肌细胞的衰老。端粒学说是被广泛讨论的衰老假说之一,端粒长度的缩短被认为是细胞衰老的开始;端粒酶作为一种特殊的核糖核蛋白复合体,能够有效维持端粒的长度以延缓衰老,进而推测端粒、端粒酶可能通过细胞衰老的形式与血管老化发生密切的联系。
- 景晓杨雷燕王强修成奎
- 关键词：血管老化端粒端粒酶衰老
- 人参三七川芎提取物对衰老大鼠免疫器官及行为学的影响被引量：7
- 2015年
- 目的：观察人参三七川芎提取物对老龄大鼠免疫器官功能及行为学的影响。方法：选取100只SD大鼠,饲养至18~19月龄,建立自然衰老大鼠模型。按体重水平分层后将成模大鼠随机分为5组,分别为衰老模型组、人参三七川芎中药低、中、高剂量组（2 305.64,1 152.82,576.41 mg·kg^-1）和白藜芦醇组（50 mg·kg^-1）,另设2月龄SD大鼠做为青年对照组。干预3个月后,进行旷场实验,记录大鼠跨越方格总数和总行径距离,检测大鼠血清活性氧族（reactive oxygen species,ROS）含量,胸腺系数和脾脏系数。结果：与青年组大鼠比较,自然衰老组大鼠跨格总数减少（P〈0.01）,总行径距离减少（P〈0.05）,血清ROS含量增高（P〈0.01）,胸腺系数和脾脏指数下降（均P〈0.01）。与衰老模型组比较,中药各组和白藜芦醇组大鼠的跨格次数和总行径距离均有增加（P〈0.05）;血清活性氧族（ROS）含量降低（P〈0.05）;中药高剂量组和白藜芦醇组可以增高大鼠的胸腺系数和脾脏系数（均P〈0.01）,中药中剂量组可以增高大鼠的胸腺系数（P〈0.05）。结论：人参三七川芎提取物可以改善自然衰老大鼠精神迟缓状态,增强其空间探索性,同时能够提高免疫器官功能和降低血清活性氧含量。
- 景晓杨雷燕修成奎
- 关键词：衰老免疫行为学活性氧
