上海市科学技术委员会资助项目(054319938)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 相关作者：王怡波张霞张元军林建波彭艳更多>>
- 相关机构：第二军医大学药物有限公司上海交通大学更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人F1F0-ATP合成酶β亚基的原核表达、纯化及抗体制备被引量：3
- 2008年
- 目的:原核表达、纯化人F1F0-ATP合成酶β亚基(hATP5B)并制备其多克隆抗体。方法:以人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)总RNA为模板,通过RT-PCR扩增hATP5B成熟肽编码序列,克隆入原核表达载体pET28a(+),转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)并诱导表达,表达产物用Ni2+螯合层析纯化,纯化产物用透析复性,产物用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。复性产物免疫家兔,制备多克隆抗体;多抗的效价用间接ELISA法检测,并用Western blot和细胞免疫荧光分析多抗的特异性和抗原结合性。结果:测序证实获得hATP5B成熟肽编码序列。SDS-PAGE鉴定表明,表达、纯化、复性产物的相对分子质量(Mr)均约55000,与理论值相符。灰度扫描分析重组hATP5B(recombinant hATP5B,rhATP5B)的表达量占菌体蛋白总量的36.8%,纯化产物纯度达98.3%,复性产物纯度达99.2%。Western blot反应阳性。多抗的平均抗体效价为1∶640000,可特异识别HUVEC中的天然抗原。结论:原核表达的hATP5B具有良好的免疫原性,其免疫家兔后获得的多抗具有高效价和特异性。hATP5B的原核高效表达和其抗体制备为进一步研究hATP5B的功能奠定了实验基础。
- 俞丽丽张元军张霞王怡波林建波倪健彭艳
- 关键词：原核表达多克隆抗体
