中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2011JBFZ01)
- 作品数：5 被引量：90H指数：4
- 相关作者：曾令兵高正勇孟彦肖艺张辉更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院长江水产研究所华中农业大学中国水产科学研究院淡水渔业研究中心更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项公益性行业(农业)科研专项中国水产科学研究院基本科研业务费专项基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 大鲵虹彩病毒理化及生物学特性研究被引量：30
- 2012年
- 对大鲵虹彩病毒(Giant salamander iridovirus,GSIV)的理化特性及生物学特性进行了研究。结果表明:GSIV对热处理敏感,56℃和65℃处理30 min均可彻底灭活病毒;GSIV经酸(pH3)和碱(pH10)处理,病毒滴度(TCID50)与对照组相比较分别下降了8.58、9.04个对数级,差异极显著(P<0.01);GSIV经有机溶剂氯仿、乙醚以及胰蛋白酶处理,TCID50与对照组相比较分别下降了9.33、7.83、6.49个对数级,差异极显著(P<0.01)。冻融次数对GSIV滴度的影响不显著(P>0.05)。GSIV对细胞培养物的感染性试验结果表明,GSIV可在鲤上皮瘤细胞系(Epithelioma papilloma cyprini,EPC)、斑点叉尾鮰肾脏细胞系(Channel catfish kidney,CCK)、虹鳟鱼性腺细胞系(Rainbow trout gonadal,RTG-2)等细胞中增殖,但在EPC、CCK细胞中增殖速度快,TCID50高;GSIV在EPC细胞中的最适生长温度是25℃。GSIV在EPC细胞中增殖动态试验结果表明,GSIV感染细胞6 h后TCID50开始快速上升,进入对数增长期,72 h时TCID50达到最大值,以后趋于稳定。GSIV感染EPC细胞超薄切片透射电镜观察结果显示,在EPC细胞质中可见大量虹彩病毒样颗粒,呈晶格状排列,直径约140 nm。
- 高正勇曾令兵肖汉兵张辉孟彦肖艺徐进
- 关键词：理化特性生物学特性
- 大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：28
- 2012年
- 利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒(giant salamander iridovirus,GSIV)主要衣壳蛋白(MCP)编码区长度为1 392 bp的片段,克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T-MCP。经PCR鉴定确认正确后,以10倍梯度稀释pMD19-T-MCP重组质粒,作为标准模板进行TaqMan实时荧光定量PCR扩增,制作标准曲线,建立了大鲵虹彩病毒的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。制作的标准曲线有极好的线性关系,且线性范围宽,相关系数为0.990 19。组内重复试验的CT值标准偏差为0.52%。检测结果显示,该方法对大鲵虹彩病毒的检测有高度的特异性,与锦鲤疱疹病毒、弗氏柠檬酸杆菌、嗜水气单胞菌以及鲤上皮瘤细胞基因组DNA之间均无交叉反应,特异性好,检测总DNA灵敏度为10个病毒核酸分子拷贝数,约1.1×10-3 pg/μL病毒核酸,较之常规PCR的敏感度高出约1 000倍。研究建立的大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,对大鲵虹彩病毒病的快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。
- 周勇曾令兵孟彦周群兰张辉高正勇肖艺孙建滨
- 关键词：虹彩病毒
- 患病大鲵中弗氏柠檬酸杆菌的分离与鉴定被引量：42
- 2012年
- 【目的】确定导致大鲵(Andrias davidianus)细菌性感染死亡的病原。【方法】从大鲵肝脏中分离细菌,通过Biolog微生物自动鉴定系统及分子生物学方法对纯培养的细菌进行鉴定,再用大鲵和鲫鱼分别进行人工感染试验,以确定分离菌的致病性,同时对分离到的病原菌进行药物敏感试验。【结果】从患病大鲵肝脏中分离到一株致病菌JZ01,经人工感染健康大鲵,可复制与自然发病相同的症状,且从人工感染病鲵体内再次分离到相同的病原菌。该致病菌对健康鲫鱼也有致病性。经Biolog微生物自动鉴定系统的鉴定,以及进一步的16S rDNA基因序列和系统发育分析都表明,此致病菌为弗氏柠檬酸杆菌。药物敏感性试验表明,该菌株对氨曲南、头孢三嗪、先锋噻肟等9种药物高度敏感。【结论】弗氏柠檬酸杆菌是大鲵的一种致病菌。本文在国内外首次报道了该菌对大鲵具有致病性。
- 高正勇曾令兵孟彦刘小玲张波
- 关键词：药敏试验
- 黄颡鱼MyoD基因的克隆及其表达被引量：4
- 2012年
- 采用RT-PCR和RACE(cDNA末端快速扩增)方法克隆黄颡鱼MyoD(myogenic differentiation antigen,成肌分化抗原)基因的cDNA全长序列,对其进行生物信息学和在雌雄个体组织中的表达差异分析.结果表明,黄颡鱼MyoD基因编码区由810个碱基组成,编码269个氨基酸,其中第1～89个氨基酸为Basic区,第90～141个氨基酸为bHLH结构;黄颡鱼的MyoD基因与斑点叉尾鮰的同源性最高为93%.在雌雄成体组织中的表达分析显示,雄性个体中肌肉和胃组织中的表达量极显著高于雌性个体(p<0.01),雌性个体的肾脏和鳃组织中的表达量显著高于雄性(p<0.05).通过MyoD基因在雌雄个体中表现出的组织表达差异,认为这可能是造成黄颡鱼雌雄生长差异的重要因素之一.
- 梁宏伟李忠邹桂伟刘小林
- 关键词：黄颡鱼生物信息学
- 大鲵虹彩病毒TaqManreal·timePCR检测方法的建立
- 2013年
- 利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒（Giantsalamanderiridovirus，GSIV）主要衣壳蛋白（MCP）编码区长度为1392bp的片段，克隆到pMD19-T载体上，构建重组质粒pMD19-T—MCP。经PCR鉴定确认正确后，以10倍梯度稀释pMD19-T—MCP重组质粒，作为标准模板进行TaqMan实时荧光定量PCR扩增，制作标准曲线，建立了大鲵虹彩病毒的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。制作的标准曲线有极好的线性关系，且线性范围宽，相关系数为0．99019。组内重复试验的Ct值标准偏差为0．52％。检测结果显示，该方法对大鲵虹彩病毒的检测有高度的特异性，与锦鲤疱疹病毒、弗氏柠檬酸杆菌、嗜水气单胞菌以及鲤鱼上皮瘤细胞基因组DNA之间均无交叉反应，特异性好，检测总DNA灵敏度为10个病毒核酸分子拷贝数，约1．1×10^-3g／μL病毒核酸，较之常规PCR的敏感度高出约1000倍。本研究建立的大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强，对大鲵虹彩病毒病的快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。
- 周勇曾令兵孟彦周群兰张辉高正勇肖艺孙建滨
- 关键词：虹彩病毒
