国家自然科学基金(30670812)
- 作品数：6 被引量：27H指数：4
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- mCD99L2基因沉默对小鼠B淋巴瘤细胞A20生物学特性的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探究mCD99L2基因沉默对小鼠B淋巴瘤细胞系A20细胞生物学特性的影响。方法采用MTT法和流式细胞仪检测mCD99L2基因沉默前后干扰组A20-LV-mCD99L2和未干扰组A20细胞的增殖率和细胞周期;Transwell法测定两组细胞的体外侵袭能力;采用裸鼠与BALB/c鼠皮下成瘤实验观察比较两组细胞在体内的成瘤时间和成瘤率。结果MTT法显示干扰组A20-LV-mCD99L2增殖率为(0.61±0.12),低于未干扰组增殖率(0.75±0.20),差异有统计学意义(P=0.000);干扰组A20-LV-mCD99L2处于G2期的细胞比例为(10.58±4.97),高于未干扰组(3.33±1.31),差异有统计学意义(P=0.009);Transwell法显示干扰组A20-LV-mCD99L2运动能力较未干扰组下降。裸鼠皮下成瘤时间干扰组(13.33±4.63)d长于未干扰组(9.50±2.90)d,成瘤率均为100%;BALB/c鼠皮下成瘤时间干扰组(10d)长于未干扰组(7.0±0.82)d,成瘤率干扰组为14.3%,显著低于未干扰组(100%),差异有统计学意义(P=0.000)。结论mCD99L2基因沉默可抑制小鼠B淋巴瘤细胞系A20细胞的生物学行为,降低其在体外的增殖能力和运动能力,显著降低其在BALB/c鼠体内的成瘤率。
- 陈小艳刘芳沈丽佳李慧灵张弓黄作平王辛赵彤
- 关键词：基因沉默
- LMP1基因重组慢病毒载体的构建及体外表达被引量：4
- 2009年
- 目的构建EB病毒潜伏膜蛋白I(LMP1)基因重组慢病毒载体,并检测其在体外的表达。方法采用DNA重组技术,将LMP1基因克隆到带绿色荧光蛋白的慢病毒表达载体质粒pCDF中,筛选阳性克隆,经限制性酶切、PCR扩增和DNA测序鉴定重组载体。以脂质体介导法将慢病毒包装系统的包装质粒pFIV-34N、包膜质粒pVSV-G和带目的基因的质粒pCDF-LMP1共同转染到包装细胞293FT细胞内包装病毒,荧光显微镜观察包装细胞报告基因的表达情况,收集病毒上清,浓缩鉴定,测定重组病毒的滴度。将重组慢病毒转染小鼠B淋巴瘤细胞系A20,RT-PCR和Western blotting检测LMP1的表达。结果重组慢病毒表达载体质粒经限制性酶切和DNA测序分析证实LMP1基因准确克隆入pCDF的多克隆位点,LMP1序列与GenBank中的数据完全一致。荧光显微镜下观察可见293FT细胞的细胞浆与细胞膜有大量的绿色荧光,重组慢病毒浓缩后滴度为107Tu/ml,慢病毒转染A20细胞的效率>90%。RT-PCR和Western blotting检测A20细胞内有LMP1的表达。结论成功构建了LMP1基因重组慢病毒表达载体,慢病毒可高效转染A20细胞,为后期研究EBV致瘤基因LMP1在淋巴瘤发病机制中的作用奠定基础。
- 陈小艳张弓刘芳李慧灵方唯意江庆萍赵彤
- 关键词：潜伏膜蛋白1基因重组慢病毒载体
- mCD99L2基因沉默对小鼠B淋巴瘤细胞系A20细胞转化为H/RS样细胞的影响被引量：12
- 2007年
- 目的探究mCD99L2基因沉默对小鼠B淋巴瘤细胞系A20细胞转化为H/RS样细胞的影响。方法重组SiRNA表达质粒LV-mCD99L2,体外转染内源性mCD99L2表达阳性的A20细胞,筛选出稳定表达LV质粒的细胞株并扩增培养;采用免疫荧光技术和流式细胞仪检测转化前后两组细胞鼠源CD30表达;透射电镜观察转化后细胞超微结构的形态特点;细胞计数方法动态观测培养细胞干扰组A20-LV-mCD99L2和未经干扰组A20细胞的H/RS样细胞(直径≥25μm)转型率,以人霍奇金淋巴瘤细胞系L428作为对照;采用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果获得了稳定表达LV质粒的单克隆细胞株A20-LV-mCD99L2;免疫荧光标记显示转化细胞CD30(+);流式细胞仪检测A20-LV-mCD99L2细胞CD30阳性率为54.4%;透射电镜观察转化后细胞核增大,可见单核、双核及多核,核仁明显的H/RS样细胞;干扰组H/RS样细胞的转型率明显高于未经干扰组(P<0.01)。两组处于S期的细胞无明显差异,两组细胞均未见凋亡峰。结论mCD99L2基因沉默可诱导小鼠B淋巴瘤细胞系A20细胞转化为H/RS样细胞。
- 何滢沈丽佳李祖国谢卫兵谢思明刘芳刘腾飞蒋会勇赵彤
- 关键词：肿瘤细胞转化H/RS细胞
- 霍奇金淋巴瘤背景淋巴细胞免疫表型与组织学类型关系及其意义被引量：5
- 2009年
- 本研究探讨霍奇金淋巴瘤(Hodgkin′s Lymphoma,HL)组织中的淋巴细胞表型与组织学类型的关系及其意义。应用即用型快速免疫组织化学MaxVisionTM法和计算机图像分析软件IPP6.0对经甲醛固定石蜡包埋的37例HL病理标本进行背景细胞蛋白表达的检测。选用的抗体有抗CD3/CD45RO、抗CD20/CD79a、抗CD4、抗CD8、抗GrB和抗TIA-1。结果表明:37例HL中结节性淋巴细胞为主型(NLPHL)4例,经典型(CHL)33例,其中淋巴细胞丰富型(LRHL)13例,结节硬化型(NSHL)14例,混合细胞型(MCHL)6例,在T/B细胞比值分析时另增加的10例会诊切片中1例NLPHL,4例NSHL,5例LRHL。图像定量分析结果显示:NLPHL中T/B细胞比值为0.28±0.07,CHL中T/B细胞比值为4.34±2.45,差异有统计学意义(p=0.001),T/B比值在CHL中表现为LRHL、NSHL、MCHL之间无显著性差异(p值均大于0.05);CD4+/CD8+细胞比值在NLPHL中为4.55±1.28,CHL中为4.10±1.50,(p=0.574),CHL中CD4+/CD8+细胞比值表现为MCHL>NSHL>LRHL(p=0.037);多重比较结果显示,LRHL与MCHL和NSHL之间有统计学差异(p=0.010和0.028);GrB+/TIA-1+比值在NLPHL中为0.71±0.57,CHL中比值为0.74±0.39,两型之间没有统计学差异(p=0.868),CHL中GrB+/TIA-1+细胞比值表现为MCHL、NSHL、LRHL之间无显著性差异(p值均大于0.05)。结论:HL背景细胞的免疫表型可以反映宿主肿瘤微环境,从T、B细胞的分布可以得出NLPHL与CHL的微环境是不同的。NLPHL表现出来其独特的生物学特点,CHL各亚型具有独特特点:T/B细胞比值在CHL中为LRHL>NSHL>MCHL;CD4+/CD8+与GrB+/TIA-1+细胞比值表现一致,均为MCHL>NSHL>LRHL。结合CHL亚型预后关系LRHL>NSHL>MCHL推理得出:T/B,CD4+/CD8+,GrB+/TIA-1+的细胞比值与CHL组织学类型预后分别呈现正相关和负相关关系。
- 张艳黎相照温宗华陈小艳张弓王辛吴自勍赵彤
- 关键词：霍奇金淋巴瘤淋巴细胞免疫表型组织学类型
- 播散性鼠B细胞淋巴瘤动物模型的建立被引量：8
- 2008年
- 目的在具有免疫能力的BALB／c小鼠上构建播散性B淋巴瘤动物模型。方法经尾静脉注射鼠源性B细胞淋巴瘤细胞株A20于同源BALB／c小鼠，0～3个月间观察动物成瘤情况；取动物脏器行石蜡包埋、病理切片、HE染色；流式细胞仪检测其CD19的表达。结果尾静脉注射2×10^6、2×10^7细胞于14只BALB／c小鼠，成瘤时间分别为76．8±12．0天和26.1±7．9天；总体成瘤率分别为71.4％（5／7）和100％（7／7）；在肝脏、脾脏、淋巴结、肠、肠系膜、下肢、颈部、子宫和臀部等多脏器成瘤；流式检测瘤组织细胞mCD19表达强阳性。结论运用尾静脉注射方法构建了内脏器官广泛发生的播散性B淋巴瘤BALB／c小鼠动物模型，为进一步进行B淋巴瘤相关研究提供了实验依据。
- 刘芳张弓陈小艳李慧灵张彦王怡心黄作平褚红娟王辛赵彤
- 关键词：BALB/C小鼠动物模型
- mic2/CD_(99)基因克隆和测序
- 2009年
- 目的构建mic2/CD99基因表达载体。方法通过PCR及双酶切方法,从Jurkat细胞基因组RNA中获得mic2/CD99全长基因编码序列,克隆到pcDNA3.1(+)质粒载体上,构建包含mic2/CD99全长基因载体,并从分子水平检测及验证。结果经PCR方法扩增出大小为585bp片段,序列测定其编码序列正确,酶切鉴定亚克隆序列正确。结论成功构建了mic2/CD99全长基因载体,为后续研究打下基础。
- 黄作平何莹周新华李锋韩西群张艳温宗华赵彤
