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结核分枝杆菌MPT64抗原对巨噬细胞凋亡的抑制作用被引量：4: 2013年; 目的探讨结核分枝杆菌MPT64抗原对RAW264.7巨噬细胞的影响及相关机制。方法将MPT64基因在大肠杆菌中表达、纯化,获得的纯化蛋白用于后续实验。将用佛波醇酯(PMA)分化的RAW264.7巨噬细胞分为对照组、卡介菌纯蛋白衍生物(BCGPPD)诱导组、BCG-PPD+MPT64共同作用组,分别给予相应的处理。孵育16 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用ELISA试剂盒检测培养细胞上清的细胞因子TNF-α及IL-10水平。结果 BCG-PPD可以诱导RAW264.7巨噬细胞凋亡,BCG-PPD+MPT64组的细胞凋亡水平低于BCG-PPD组(P<0.05)。细胞因子上清检测结果表明,与对照组相比,BCG-PPD作用组的TNF-α水平升高(P<0.01),而IL-10水平无明显变化;与BCG-PPD组相比,BCG-PPD+MPT64共同孵育组的IL-10水平升高(P<0.01),而TNF-α水平无明显变化。结论 MPT64抗原可能是一种毒力因子,能够抑制BCG-PPD诱导的巨噬细胞凋亡,该作用可能是通过提高IL-10水平来实现的。; 王庆敏雷呈祥肖安刘秋红; 关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞细胞凋亡

泛素-结核抗原融合基因DNA疫苗诱导的小鼠细胞免疫应答: 2010年; 目的构建结核杆菌Ag85A抗原DNA疫苗（pA）和泛素基因与Ag85A抗原基因融合的DNA疫苗（pUA）,观察疫苗在小鼠中的免疫应答.方法将构建的DNA疫苗pA和pUA分别肌肉注射免疫BALB/c雌性小鼠,检测小鼠的血清抗体（IgG、IgG1、IgG2a）、细胞因子（IFN-γ、IL-4）和细胞毒性T淋巴细胞反应,比较融合基因DNA疫苗和单基因DNA疫苗诱导的免疫应答的强度.结果 pA组小鼠血清IgG水平高于pUA组（P＜0.01）,但IgG2a/IgG1比值（4.16±0.20）低于pUA组（7.88±0.30）（P＜0.01）.与pA组比较,pUA组小鼠IFN-γ分泌水平增高（P＜0.01）,IL-4分泌水平下降（P＜0.01）;pUA组的CTL活性高于pA组.结论融合的DNA疫苗pUA诱生的抗原特异的体液免疫应答不及单基因DNA疫苗pA,但其能诱导更强的细胞免疫应答.提示泛素-Ag85A融合基因DNA疫苗对于防治结核病比单基因DNA疫苗更为有效.; 王庆敏刘曙光王晓花; 关键词：结核分支杆菌 DNA疫苗泛素免疫应答

结核分枝杆菌MPT64抗原对淋巴细胞的作用: 2016年; 目的分析结核分枝杆菌MPT64抗原对EL4淋巴细胞瘤的影响及相关机制。方法将EL4淋巴细胞分为3组,分别为阴性对照组、MPT64低剂量组(10μg/ml)、MPT64高剂量组(15μg/ml)。孵育16 h后;AnnexinV-FITC染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测培养细胞上清的细胞因子水平,用实时定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和Western blot检测凋亡基因Fas、FasL的表达水平。结果 MPT64可以诱导EL4淋巴细胞凋亡,并呈浓度依赖性。与阴性对照组相比,白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)和转化生长因子β(transformation growth factor beta,TGF-β)分泌水平明显升高,而干扰素γ(interferon gamma,IFN-γ)的分泌水平未见明显变化。在MPT64诱导淋巴细胞凋亡的过程中,Fas基因表达升高。结论MPT64抗原能够诱导EL-4淋巴细胞凋亡,这种促凋亡作用可能与IL-4和TGF-β分泌水平的升高、Fas基因的表达升高相关。MPT64抗原可能是一种毒力因子,在结核分枝杆菌感染机体的过程中,可能通过促进淋巴细胞凋亡参与机体与结核分枝杆菌的相互作用。; 王庆敏唐瑛刘淑鹏; 关键词：结核分枝杆菌凋亡

ESAT6蛋白与结核菌素纯蛋白衍生物联合ELISA法诊断结核病的研究被引量：1: 2016年; 目的探讨早期分泌性抗原靶6(early secretory antigenic target-6,ESAT-6)、结核菌素纯蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)联合进行血清学诊断结核病的效果。方法 ESAT6基因被插入到原核表达载体pGEX-5T中,与谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)融合进行表达。表达的GST-ESAT6融合蛋白经亲和层析和分子筛进行纯化。针对64例结核患者血清和40例健康人血清,进行了ESAT6、PPD抗体反应性实验,评估二者血清学诊断的敏感性和特异性。结果融合表达的ESAT6蛋白保持天然的免疫原性,在Western blot实验中,可以被结核病人血清所识别。PPD抗体诊断敏感性是84.4%,特异性是65%。ESAT6抗体诊断敏感性是68.75%,特异性是95%。ESAT6、PPD-酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)联合诊断,敏感性是93.4%,特异性是95%。结论 ESAT6、PPD抗体联合判断可以提高结核病诊断的准确性。; 王庆敏唐瑛肖安; 关键词：结核分支杆菌结核菌素纯蛋白衍生物血清学诊断

结核分枝杆菌MPT64抗原对巨噬细胞的影响及其与Toll样受体-2的相关性被引量：2: 2014年; 目的观察结核分枝杆菌MPT64抗原对RAW264.7巨噬细胞凋亡及Toll样受体-2(toll-like receptor 2,TLR-2)表达的影响。方法将佛波肉荳蔻醋酸(phorbol myristoyl acetate,PMA)分化的RAW264.7巨噬细胞分为阴性对照组、卡介菌纯蛋白衍化物(purified protein derivative of BCG,BCG-PPD)诱导组、PPD+MPT64共同作用组,孵育16 h后,Annexin V-FITC染色,用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)和Western blot检测细胞凋亡、细胞膜及细胞内TLR-2的表达情况。结果 BCG-PPD可以诱导RAW264.7巨噬细胞凋亡,PPD+MPT64作用组的细胞凋亡水平明显低于BCG-PPD组,随着MPT64蛋白浓度的逐渐增高,凋亡水平逐渐降低。FCM和Western blot技术检测结果表明,BCG-PPD组的TLR-2表达水平明显高于阴性对照组,在诱导16 h达到高峰。而在PPD+MPT64组,细胞膜及细胞内的TLR-2水平均明显低于BCG-PPD组。结论 MPT64抗原能够抑制PPD诱导的巨噬细胞凋亡,可能通过调节TLR-2的表达水平来实现。MPT64抗原可能是一种毒力因子,在结核分枝杆菌感染机体的过程中,通过抑制巨噬细胞凋亡参与宿主与结核分枝杆菌的相互作用。; 王庆敏刘淑鹏唐瑛武文斌张术刘秋红姚永杰; 关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞凋亡

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