福建省教育厅科技项目(2007F5070)
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
- 相关作者：洪文荣朱宝泉朱碧银张国华严绍德更多>>
- 相关机构：福州大学上海医药工业研究院常州方圆制药有限公司更多>>
- 发文基金：福建省教育厅科技项目国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 黑暗链霉菌aprF-G基因功能的研究被引量：1
- 2012年
- 以研究黑暗链霉菌Tt-49中生物合成基因aprF-G生理功能为目标,利用接合转移法,将同源重组质粒pFD10导入黑暗链霉菌Tt-49,最终获得同源双交换菌株Tt-49G53,并对其生理特性进行考察。结果显示:其生长速度明显比亲株慢,产抗水平比亲株低100倍,仅为13U/mL。采用薄层层析法对其代谢产物进行分析,未检测到安普霉素。
- 朱碧银洪文荣李辉
- 关键词：黑暗链霉菌基因重组
- 依纽小单孢菌接合转移体系的构建被引量：2
- 2011年
- 以依纽小单孢菌HP变种基因组DNA为模板,扩增位于西索米星3',4'-双脱羟基酶基因sisI上下游序列的两端同源交换臂,在两臂之间添加抗性筛选标记ermE基因,并在该基因上游加入组成型强启动子ermE*,以强化筛选标记。将该外源DNA序列插入到质粒pKC1139,构建重组质粒pFD57。转化大肠杆菌ET12567后,经接合转移导入依纽小单孢菌中,经抗性筛选得到两株阳性菌株,命名为HP-I-1和HP-I-2。经PCR验证和测序,结果表明,重组质粒已整合到染色体DNA上。依纽小单孢菌接合转移体系的构建达到了预期目的,并实现了对该体系的优化。
- 张国华洪文荣沈剑锋樊伟明
- 关键词：DNA重组分子遗传学
- 黑暗链霉菌DNA同源重组系统的构建被引量：11
- 2011年
- 以黑暗链霉菌Tt-49基因组为模板,利用PCR方法,扩增安普霉素生物合成关键基因aprF-G的上、下游序列,作为同源交换臂,并将红霉素抗性基因筛选标记及其启动子插入两交换臂之间,以温敏型质粒pKC1139为基础,构建用于阻断黑暗链霉菌Tt-49安普霉素生物合成的重组质粒pFD8。该质粒通过E.coli ET12567/pUZ8002去甲基化修饰后,经接合转移进入黑暗链霉菌Tt-49,利用红霉素抗性筛选得到3株阳性转化子,分别命名为Tt-49 AG1、Tt-49 AG2和Tt-49 AG3。通过PCR鉴定,证明pFD8已插入黑暗链霉菌Tt-49基因组的目标位点。以亲株作对照,对3株工程菌进行红霉素抗性能力考察,发现3株工程菌的抗红霉素能力均高达1 000μg/mL以上。
- 朱碧银洪文荣严绍德朱宝泉林玉双封成军
- 关键词：黑暗链霉菌同源重组安普霉素
- 小单孢菌3',4'-双脱羟基酶基因功能的研究被引量：3
- 2011年
- 根据文献查阅、同源比对及进化树分析,推测绛红色小单孢菌中gntI和伊纽小单孢菌sisI为3',4'-双脱羟基酶基因。通过克隆得到gntI和sisI,随后将其构建到pET30a表达载体,并在E.coli BL21实现异源表达。利用生物信息学对该蛋白亲水性图谱、空间结构及活性域进行分析、预测。基于同源建模得到三级结构,推测其二级结构以α-螺旋为主,肽段40～60,100～120处可能为该酶活性中心。此研究为该酶进一步功能研究和应用奠定了基础。
- 张国华洪文荣饶以群樊伟明朱宝泉
- 关键词：小单孢菌生物信息学
