国家自然科学基金(30670941)
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 相关作者：诸琦曹海霞章永平姚玮艳黄佳更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院复旦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- EEF1A2基因对胰腺癌细胞生长和增殖的影响被引量：2
- 2008年
- 目的探讨EEF1A2转基因对胰腺癌细胞SW1990生长和增殖的作用。方法应用腺病毒载体将EEFIA2基因转染人胰腺癌细胞SW1990，采用MTY法检测细胞的增殖，软琼脂克隆形成试验检测细胞的生长，应用流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果带EEFIA2的腺病毒感染SW1990细胞后，EEF1A2mRNA表达增加，72h的A750值为1．2996±0．2091，培养6d的细胞数为81250±1767，14d的克隆形成率为82％，均较空载体腺病毒组和PBS组显著增加（P〈0．05）；G．期细胞比例为28．5％，S期细胞比例为60．9％，前者较空载体腺病毒组和PBS组显著减少，后者较空载体腺病毒组和PBS组显著增加（P〈0．05）。结论EEF1A2基因可以显著促进人胰腺癌细胞SW1990的生长和增殖。
- 曹海霞诸琦丁健青张愫姚玮艳钱爱华周琳章永平
- 关键词：胰腺肿瘤细胞增殖
- EEF1A2嵌合型重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的:克隆人类真核翻译延长因子1A2(EEF1A2)基因全长,构建其重组腺病毒载体。方法:应用RT-PCR方法从人胰腺癌组织中扩增人EEF1A2基因全长,经T-A克隆后,亚克隆到腺病毒穿梭质粒pDC316,构建穿梭质粒pDC316-EEF1A2。利用同源重组的方法将腺病毒骨架质粒pBHG35和穿梭质粒pDC316-EEF1A2共转染293细胞,获得腺病毒重组质粒Ad5/F35-EEF1A2,经过在293细胞中包装和扩增之后,获得高滴度的腺病毒重组质粒Ad5/F35-EEF1A2。PCR、WesternBlot检测EEF1A2基因的表达。结果:用RT-PCR方法,从人胰腺癌组织中扩增出1400bp的cDNA片段,经测序证实为人EEF1A2基因。构建及包装出高滴度的重组腺病毒载体Ad5/F35-EEF1A2。结论:成功地克隆了人EEF1A2基因全长,并构建其表达的重组腺病毒载体,为进一步研究人EEF1A2基因在相关疾病中的作用奠定了基础。
- 曹海霞诸琦章永平黄佳张愫姚玮艳
- 关键词：腺病毒科腺病毒载体基因克隆
- 真核翻译延长因子1A2对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长和血管形成作用的研究被引量：2
- 2008年
- 背景:人类真核翻译延伸因子1A2(EEF1A2)是一种管家基因,可能作为一种新的潜在癌基因,参与肿瘤的发生、发展。目的:探讨EEF1A2对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长和血管形成的作用。方法:以聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因片段,应用基因重组技术构建Ad5/F35-EEF1A2重组腺病毒载体。15只裸鼠建立人胰腺癌移植瘤模型,随机分为对照组、绿色荧光蛋白(GFP)组和EEF1A2组,分别注射PBS0.1ml、Ad5/F35-GFP0.1ml(1×108PFU)和Ad5/F35-EEF1A20.1ml(1×108PFU)。测定各组肿瘤体积和质量,应用免疫组化方法检测各组增殖细胞核抗原(PCNA)和CD31的表达。结果:成功构建了表达EEF1A2的重组腺病毒载体。与对照组和GFP组相比,EEF1A2组裸鼠肿瘤体积和质量显著增加(P<0.05),PCNA和CD31表达显著增高(P<0.05)。结论:EEF1A2可显著促进人胰腺癌裸鼠移植瘤生长,细胞增殖和肿瘤血管形成可能是其重要作用机制。
- 曹海霞诸琦姚玮艳章永平黄佳贲其稳高亚博王华枫
- 关键词：胰腺肿瘤血管形成
- 人类真核延伸因子1A2对胰腺癌细胞侵袭、转移能力的影响被引量：3
- 2008年
- 目的探讨外源性人类真核延伸因子（EEF）1A2基因导入人胰腺癌SW1990细胞株后，细胞侵袭转移能力的改变。方法应用腺病毒载体将EEFlA2基因导入人胰腺癌SW1990细胞中，采用划痕实验、Transwell小室、细胞粘附实验检测转染前后细胞运动、侵袭、转移及粘附能力的改变。结果Ad5／F35-EEF1A2转染后继续培养48h的SW1990细胞，可见预期大小的特异性条带。实验组24h后细胞迁移率为（74．43±2．12）％，与阴性对照组和空白对照组比较差异有统计学意义[（44．08±5．92）％和（48．09±3．54）％，P〈0．05]。实验组48h后穿膜细胞数为（65．42±8．24）个，与阴性对照组和空白对照组相比差异有统计学意义[（20．10±5．82）个和（23．25±5．23）个，P〈0．05]。实验组48h后穿膜细胞数为（61．30士5．68）个，与阴性对照组和空白对照组相比差异有统计学意义[（32．04±3．60）个和（32．33±2．51）个，P〈0．05]，且对Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅳ型胶原、纤维结合蛋白、粘蛋白的粘附力增强（P〈0．05）。结论腺病毒介导的EEF1A2高表达能明显增强胰腺癌SW1990细胞的运动、侵袭、转移及粘附能力。提示EEF1A2可能通过改变胰腺癌细胞的生物学特性影响胰腺癌的发生发展。
- 诸琦曹海霞黄佳丁健青张愫李百文姚玮艳章永平
- 关键词：胰腺肿瘤细胞株肿瘤
- 超声内镜引导不同型号细针穿刺胰腺占位病灶的前瞻随机对照研究被引量：5
- 2012年
- 目的通过分析EUS-FNA获得的细胞量及细胞学诊断结果，比较3种不同型号穿刺针在胰腺实性占位诊断中的差异。方法纳入2010年12月至2011年5月期间两家医院胰腺实质性占位病灶长轴直径大于2cm并进行EUS-FNA的病例。根据穿刺途径将患者分为经胃壁穿刺组（19G或22G或25G）和经十二指肠壁穿刺组（22G或25G），分别按事先设置的随机表随机选择穿刺针型号进行EUS-FNA。穿刺过程中，固定穿刺次数、吸引负压、穿刺针在病灶内移动次数和移动距离，穿刺内容物送液基细胞学检查，由同一位细胞学医生制片及诊断对EUS-FNA获得的细胞量及细胞学诊断结果进行比较。结果研究共纳入病例52例，经胃壁穿刺组42例，经十二指肠壁穿刺组10例。所有病例均成功完成穿刺操作并未出现与EUS-FNA操作相关的并发症。两个穿刺组中不同型号穿刺针所获得的细胞总量、细胞学诊断之间的差异均无统计学意义（P〉0．05）。但在两组中25G穿刺针的诊断敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确率均稍高。结论EUS-FNA在胰腺实质性占位中具有较高的诊断价值，尽管25G穿刺针对胰腺病灶的诊断略显优势，但3种不同型号的穿刺针获得的细胞量及细胞学诊断并无显著差异。
- 钟良诸琦龚婷婷金忱郝思介叶廷军孙蕴伟谭继宏夏璐赵东幸
- 关键词：内窥镜超声检查针吸胰腺
- 靶向封闭EEF1A2对胰腺癌细胞凋亡的作用及其机制研究被引量：2
- 2010年
- 目的 观察靶向封闭EEF1A2基因对胰腺癌细胞株凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 体外转录制备2对EEF1A2 siRNA,应用脂质体技术转染胰腺癌细胞株BxPC-3,半定量RT-PCR、蛋白质印迹法检测转染前后EEF1A2基因表达的变化.运用膜联蛋白V/碘化丙啶法检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测细胞中caspase-3、caspase-8、caspase-9、聚二磷酸腺苷核糖多聚酶（PARP）细胞色素C和Bid等凋亡相关蛋白表达变化.结果 2对EEF1A2 siRNA均能有效降低BxPC-3细胞中EEF1A2的表达,其中第2对siRNA静默效果更佳,EEF1A2在mRNA和蛋白质水平的表达抑制率均达75%左右.抑制BxPC-3细胞中EEF1A2的表达后,细胞的早期凋亡率为15.28%±3.65%,显著高于阴性对照组的10.11%±3.05%和空白组的9.41%±4.14%,同时伴随出现caspase-3、caspase-8、caspase-9、PARP和Bid的蛋白活化增强和细胞色素C表达增加.结论 抑制EEF1A2表达能明显诱导胰腺癌细胞BxPC-3的凋亡,而死亡受体途径和线粒体途径的激活可能均参与凋亡的发生.
- 黄佳诸琦曹海霞章永平
- 关键词：胰腺肿瘤小分子干扰RNA凋亡
