国家自然科学基金(30800465) 作品数:5 被引量:14 H指数:2 相关作者: 韩雅玲 闫承慧 张效林 康建 李杰 更多>> 相关机构: 沈阳军区总医院 中国科学院 辽宁中医药大学附属医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 辽宁省自然科学基金 辽宁省科技厅科技攻关项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 自动化与计算机技术 更多>>
人脐静脉内皮细胞单层通透性改变的效应因子 被引量:2 2011年 背景:外源性刺激引起血管屏障功能损伤的分子机制是血管病理生理学尚未阐明的热点问题之一。目的:探讨炎症递质脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞单层通透性改变的效应分子,寻找有效治疗靶点。方法:应用脂多糖刺激并观察人脐静脉内皮细胞骨架蛋白F-actin和细胞单层通透性的改变。应用荧光免疫组化和Westernblot方法检测脂多糖刺激前后细胞中RhoA和SRF等信号分子的改变。并通过阻断实验证实RhoA-SRF信号通路的作用。结果与结论:100μg/L脂多糖刺激6h可引起人脐静脉内皮细胞中F-actin快速重构并形成大量应力纤维,细胞单层通透性明显增强。细胞中活化RhoA的表达明显增加,SRF发生明显的入核转位现象。应用特异性分子抑制剂Y27632抑制RhoA的活化后,细胞中F-actin重构现象消失,细胞单层通透性增加也受到明显抑制,SRF蛋白发生明显的出现转位。而应用LatrunculinB抑制脂多糖刺激的人脐静脉内皮细胞中F-actin应力纤维形成,对抗通透性增加,但RhoA活化未受到干扰,SRF入核现象则受到抑制。提示RhoA-SRF通路的活化介导了脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞中F-actin重构和内皮单层通透性增加,特异性抑制F-actin也可以阻断脂多糖引起的血管内皮单层通透性增加,同时反馈抑制SRF的入核活化现象。 闫承慧 于海波 张效林 康建 韩雅玲关键词:人脐静脉内皮细胞 通透性 细胞骨架蛋白 RHOA ERK 动脉内皮细胞中TIE2启动CREG真核表达质粒pTIE2-CREG-EGFP-N1的表达 2011年 背景:血管内皮发生的分子机制是细胞及基因替代治疗的首要前提。目的:构建一种通过血管内皮细胞特异蛋白TIE2启动子来启动表达的E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)融合的真核表达质粒。方法:根据GenBank中公布的TIE2基因的启动子序列,人工合成TIE2启动子DNA序列,经AseⅠ和NheⅠ双酶切后,亚克隆入表达质粒pEGFP-N1中构建pTIE2-EGFP-N1。同时,用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pcDNA3.1myc-His/hCREG质粒得到CREG基因,亚克隆入质粒pTIE2-EGFP-N1中构建pTIE2-CREG-EGFP-N1,酶切鉴定。应用脂质体法将该质粒转染至体外培养的小鼠动脉内皮细胞,荧光显微镜下观察EGFP的表达;Western blot检测CREG蛋白的表达。结果与结论:经酶切鉴定证实实验构建的pTIE2-CREG-EGFP-N1质粒正确;体外转染48h,荧光显微镜下可见EGFP的表达,Western blot检测到CREG蛋白的表达。说明实验成功构建了pTIE2-CREG-EGFP-N1重组质粒,其可携带目的基因在小鼠动脉内皮细胞中有效表达。 李杰 闫承慧 张效林 梁振阳 冯雪瑶 白净 韩雅玲关键词:TIE2 E1A激活基因阻遏子 黄芪水提取物对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块部位基质金属蛋白酶-9表达及斑块形成的影响 被引量:10 2012年 目的探讨黄芪水提取物对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠主动脉粥样硬化斑块部位基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达及斑块形成的影响。方法将48只8周龄雄性ApoE^-/-小鼠给予高脂饮食喂养,小鼠20周龄时根据随机表按照完全随机法分为4组各12只,即对照组、阿托伐他汀组、黄芪水提取物低剂量组及黄芪水提取物高剂量组。对照组给予生理盐水0.2ml/d,阿托伐他汀组给予阿托伐他汀10mg·b^-1·d^-1,黄芪水提取物低剂量给予黄芪水提取物1.25g·kg^-1·d^-1、黄芪水提取物高剂量给予黄芪水提取物5g·kg^-1·d^-1灌胃。予给药12周末处死各组小鼠。应用ELISA法测定血清氧化低密度脂蛋白(oxLDL)含量;HE染色、油红O染色观察小鼠主动脉粥样斑块内脂质的形成;用免疫荧光、免疫组化染色法检测观察粥样斑块部位巨噬细胞浸润水平及MMP-9表达。结果黄芪水提取物明显降低ApoE^-/-小鼠,其中黄芪水提取物高剂量组血清oxLDL含量明显低于对照组[(5.2±6.1)μg/ml比(15.8±5.4)μg/ml,P〈0.01];与对照组比较,黄芪水提取物高剂量组ApoE^-/-小鼠动脉粥样斑块面积明显减小(17.24%±4.22%比49.87%±9.37%,P〈0.01),动脉管壁斑块弥漫程度较轻(P〈0.01)。黄芪水提取物高剂量组斑块中Mac3表达低于对照组(P〈0.01);黄芪水提取物高剂量组与对照组主动脉斑块中MMP-9阳性表达面积平均吸光度值(MA)分别为0.0154±0.0014与0.0263±0.0065(P〈0.01)。结论黄芪水提取物能够抑制ApoE^-/-小鼠动脉MMP-9表达,延缓动脉粥样硬化斑块形成。其机制可能是通过降低ApoE^-/-小鼠血清oxLDL水平,抑制巨噬细胞的浸润、迁移及分泌MMP.9,从而抑制斑块形成。 游洋 段岩 张效林 康建 闫承慧 张秀莉 丰加涛 韩雅玲关键词:动脉粥样硬化 基质金属蛋白酶9 载脂蛋白E类 E1A激活基因阻遏子蛋白过表达可抑制人血管平滑肌细胞的迁移 被引量:1 2011年 背景:成熟动脉中膜血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)分化稳态的丧失是血管老化的一个重要原因。目的:观察E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)抑制人血管平滑肌细胞迁移的分子机制。方法:应用已建立的稳定转染CREG过表达细胞hVSMCs-CREG和CREG表达沉默的hVSMCs-siCREG细胞株通过刮伤实验和Transwell小室细胞移行实验检测细胞迁移能力,通过Western blot检测转染前后细胞中CREG蛋白、基质金属蛋白酶和JNK表达及活化情况,应用JNK和基质金属蛋白酶9抑制剂阻断研究分析上述信号分子表达变化在细胞迁移中的作用。结果与结论:Western blot结果证实,CREG蛋白表达在hVSMCs-CREG组中增加(P<0.05),而在hVSMCs-siCREG组中减少(P<0.05)。刮伤实验和Transwell实验分析结果证实hVSMCs-CREG组细胞较正常对照组细胞迁移能力受抑。相反,hVSMCs-siCREG组细胞迁移能力显著增加(P<0.05)。Western blot和明胶酶谱分析证实hVSMCs-siCREG组细胞中MMP9活性明显增加(P<0.05),同时JNK蛋白活化。进一步应用JNK抑制剂阻断研究证实,CREG蛋白表达抑制引起的血管平滑肌细胞迁移能力增加与细胞中基质金属蛋白酶9活性均受到剂量依赖性抑制。结果证实,CREG蛋白表达可抑制JNK-基质金属蛋白酶9信号通路的活化,以此抑制体外培养的人血管平滑肌细胞迁移。 闫承慧 栾波 李杰 张效林 韩雅玲关键词:阻遏蛋白 E1A激活基因阻遏子 血管平滑肌细胞 迁移 Comparison of drug-eluting stents with bare metal stents implantation for the treatment of acute ST-elevation myocardial infarction: 2-year clinical outcomes from single-center registry 被引量:1 2011年 背景某更大的规模,使随机化的研究为尖锐心肌的梗塞(AMI ) 的处理在赤裸的金属 stents (BMS ) 上表明了 drug-eluting stents (DES ) 的优势。这研究试图调查 DES 的影响,与 BMS 比较,在在有圣举起心肌的梗塞(STEMI ) 的病人的 2 年的临床的结果上从 2002 年 1 月的 .Methods 到 2008 年 12 月,在沈阳北医院里与冠的 stenting 对待的 1301 个连续 STEMI 病人的一个总数是有希望地登记了。病人们收到了 BMS (n=868 ) 或在梗塞的 DES (n=435 ) 培植根据医生的谨慎联系了动脉。倾向分数分析被执行,二很好匹配的亚群被选择(BMS, n=288;DES, n=288 ) 评估 2 年的临床的结果。主要结果是主要不利心脏的事件(向)的出现,它是被定义一所有原因死亡合成,心肌的梗塞( MI ),或目标容器 revascularization ( TVR ) .Results 幸存抢救分析证明2年的累积危险不在关于 TVR 的二个组之间是显著地不同的(2.8%对3.1%,木头等级 P=0.780 ), stent 血栓(1.7%对4.2%,木头等级 P=0.079 )并且向(8%对10.8%,木头等级 P=0.236 )。Multivariate 分析证明 DES 是 MI 的一个独立保护的因素(HR:0.211, 95% CI:0.049 ~ 0.908 ) 并且 stent 血栓(HR:0.327, 95% CI:0.107 ~ 0.994 ).Conclusion DES 在每日的实践为 STEMI 的处理 BMS 与类似的 2 年的临床的结果被联系到那些。 LI Yi HAN Ya-ling ZHANG Quan-yu GUAN Shao-yi WANG Xiao-zeng JING Quan-min MA Ying-yan WANG Geng WANG Bin DENG Jie关键词:金属支架 冠状动脉支架