宁夏回族自治区自然科学基金(NZ11211)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
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- 重组细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶的表达、复性及鉴定
- 2014年
- 目的通过原核表达细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶(EgmMDH),获取高纯度的可溶性的重组细粒棘球蚴线粒体苹果酸脱氢酶(rEgmMDH)。方法从细粒棘球蚴(中国大陆株)中获得基因mdh并克隆到原核表达载体pET28a;通过IPTG诱导表达线粒体苹果酸脱氢酶(mMDH),进而采用亲和层析的方法纯化该包涵体目的蛋白并复性,获得可溶性目的蛋白rEgmMDH;利用细粒棘球蚴(中国大陆株)攻击感染家兔后获得血清;分别采用抗原头蚴兔血清和抗His-Tag鼠单克隆抗体对可溶性rEgmMDH进行Western blot鉴定。结果①成功构建原核表达载体pET28a-mMDH/BL21;②通过亲和层析及复性,获得高纯度可溶性目的蛋白rEgmMDH;③Western blot结果表明,抗原头蚴兔血清和抗His-Tag鼠单克隆抗体可分别特异性鉴定该复性可溶性rEgmMDH。结论通过本研究获得高纯度可溶性rEgmMDH,为进一步研究其在细粒棘球蚴感染宿主过程中的作用奠定基础。
- 王玉姣王浩赵嘉庆何鑫王程铖王强赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴蛋白纯化WESTERN
- 细粒棘球蚴重组铁蛋白和重组线粒体苹果酸脱氢酶免疫差异的初步观察被引量：3
- 2012年
- 目的比较细粒棘球蚴重组铁蛋白(rEgferritin)和重组线粒体苹果酸脱氢酶(rEgmMDH)对感染细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)小鼠的免疫差异。方法 30只雌性ICR小鼠随机分为3组(rEgferritin免疫组、rEgmMDH免疫组和对照组)。将rEgferritin、rEgmMDH和PBS与佐剂乳化后,分别于背部皮下多点注射免疫小鼠,每次注射100μl/只(含抗原10μg),共免疫3次,每次间隔2周。末次免疫后2周,3组小鼠分别于腹腔注射0.1 ml原头节悬液(约1 500个)进行攻击感染,22周后剖杀,无菌取脾组织,并记录包囊数量和直径,评价免疫保护力。用流式细胞仪检测脾组织中CD4+T细胞和CD8+T细胞,计算两者比例。结果 rEgferritin免疫组30%(3/10)小鼠有包囊,包囊总数为5个;rEgmMDH免疫组小鼠均有包囊,包囊总数为118个;对照组9只小鼠中7只有包囊,包囊总数为35个。rEgferritin免疫组小鼠获得了84.7%的免疫保护力,而rEgmMDH组无免疫保护力。小鼠脾淋巴细胞CD4+亚群百分比,rEgferritin免疫组[(57.50±7.02)%]显著高于对照组[(43.60±6.09)%](P<0.05)。小鼠脾淋巴细胞CD8+亚群百分比,rEgferritin免疫组[(25.66±6.18)%]和rEgmMDH免疫组[(19.23±5.40)%]与对照组[(21.80±6.12)%]比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。小鼠脾淋巴细胞CD4+/CD8+亚群比值,rEgferritin免疫组和rEgmMDH免疫组与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)结论 rEgferritin能抑制细粒棘球蚴的生长,而rEgmMDH促进了细粒棘球蚴的生长。
- 刘丽华赵嘉庆蒋波陈长义王元王娅娜王洁王淑静赵巍
- 关键词：细粒棘球绦虫免疫保护
- 枸杞多糖对细粒棘球蚴小鼠T淋巴细胞亚群的影响被引量：4
- 2012年
- 目的研究枸杞多糖(Lycium Barbarum Polysaccharides,LBPs)对细粒棘球蚴小鼠脾脏T细胞亚群的影响,初步探讨LBP对细粒棘球蚴感染后机体免疫功能变化的影响。方法枸杞多糖溶液皮下给药3次,每次间隔2周,于第3次给药后2周,用细粒棘球蚴原头蚴攻击感染BALB/c小鼠,使用流式细胞仪动态检测给药前后、感染前后不同时间点小鼠脾脏IFN-γ+CD3+T细胞、IL-4+CD3+T细胞占总T细胞的比例以及CD4+/CD8+T细胞的比值变化。结果与给药前比较,枸杞多糖给药后7周,小鼠脾脏分泌IFN-γ的T细胞比例增加,分泌IL-4的T细胞比例减少,CD4+/CD8+的比例明显增加;与感染对照组相比,枸杞多糖能使细粒棘球蚴感染小鼠脾脏分泌IFN-γ的T细胞比例增加(感染后2、15周);分泌IL-4的T细胞比例减少(感染后2、10周),CD4+/CD8+的比例先升高(2、10周),后降低(15、20周)。结论枸杞多糖有正向免疫调节作用,通过促进细粒棘球蚴感染小鼠脾脏T淋巴细胞向Th1的分化,抑制Th2的分化,发挥抗细粒棘球蚴的作用。
- 刘丽华王元王娅娜赵巍赵嘉庆
- 关键词：枸杞多糖细粒棘球蚴流式细胞仪T淋巴细胞
