国家生猪现代产业技术体系建设项目(2009-2010)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：刘霭莎胡文锋江冠尧陈真伟黎立更多>>
- 相关机构：华南农业大学更多>>
- 发文基金：国家生猪现代产业技术体系建设项目广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 猪脂联素球状结构域gAd蛋白在重组乳酸乳球菌中表达条件的优化
- 2013年
- 为获得含猪脂联素球状结构域gAd基因的重组乳酸乳球菌的高效表达,对其表达条件和培养基配方进行了优化。首先采用单因素分析法确定重组乳球菌最佳诱导剂浓度、诱导时间点(OD600)和诱导后培养温度,以及培养基中的乳糖浓度、氮源浓度、Na2HPO4浓度和MgSO4浓度对表达量的影响;之后通过正交试验,确定重组乳酸乳球菌的最佳表达条件。结果显示,其最佳诱导剂nisin浓度为30ng/mL、诱导的时间点是OD600≈0.4、诱导后培养温度为25℃;最佳培养基配方是:乳糖添加量为7%、大豆蛋白胨为2.7%、酵母膏为1.3%、Na2HPO4浓度为0.25%、MgSO4浓度为0.02%。优化后,脂联素的表达量为29.4%的总蛋白含量。
- 杨虹坤刘霭莎胡文锋李岩吴同山王进军
- 关键词：脂联素乳酸乳球菌正交试验
- 猪脂联素球状结构域gAd基因在乳酸乳球菌中的表达被引量：4
- 2012年
- 本研究旨在克隆猪脂联素球状结构域gAd基因,构建重组质粒并将其转化至乳酸乳球菌NZ9000中进行表达,并在体外对重组猪脂联素球状结构域进行生物学活性分析。提取猪脂肪组织总RNA,扩增得到脂联素基因全长并测序,设计引物引入酶切位点和His-tag,把gAd亚克隆到表达载体pNZ8048,将重组质粒转化乳酸乳球菌NZ9000中诱导表达。通过Ni 2+亲和层析柱对重组蛋白纯化后再Western blotting检测。然后,将gAd蛋白注射到高糖饲喂的小鼠体内鉴定生物学活性。结果表明成功获得了gAd基因并在乳酸乳球菌NZ9000中表达,表达产物相对分子质量约17ku。经纯化后用Western blotting检验具有反应原性,动物试验证明制备的gAd蛋白能显著降低小鼠的血糖水平。本研究为利用外源重组脂联素球状结构域调节猪的脂肪代谢打下了良好的基础。
- 刘霭莎李岩胡文锋吴同山李加琪陈真伟江冠尧黎立
- 关键词：脂联素乳酸乳球菌
