国家自然科学基金(30672558)
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 相关作者：陈代杰朱丽魏维李航阮林高更多>>
- 相关机构：上海医药工业研究院药物研发中心中国药科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 糖基转移酶定向进化研究进展被引量：4
- 2009年
- 糖基转移酶在改造含糖活性化合物以获得结构多样性过程中起着重要作用,定向进化不仅能够提高其对底物的宽泛性,同时也能够提高其催化活性。定向进化的成功与否取决于突变体库的多样性及筛选方法的可靠性和效率。本文简要综述了糖基转移酶随机突变方法及高通量筛选正突变体的策略,包括基于细胞的筛选法、基于荧光受体高通量筛选和pH值指示计高通量筛选。
- 吴佳茜王旻陈代杰朱丽
- 关键词：糖基转移酶定向进化高通量筛选
- 东方拟无枝酸菌中vcm14基因的敲除对万古霉素合成的影响被引量：2
- 2009年
- PCR-targeting是一种用于敲除或阻断放线菌染色体上某一基因的快速高效的方法。本研究利用该方法在大肠埃希菌中构建破坏粘粒cLYLH17(Δvcm14::apr),通过结合转移首次敲除东方拟无枝酸菌HCCB10007中万古霉素生物合成基因簇中推测的haloperoxidase基因——vcm14,得到一株双交换阻断突变株A.orientalis dvcm14(Δvcm14::apr)。该菌不产生万古霉素及其类似物,证实vcm14基因的编码蛋白不是haloperoxidase,且该蛋白不参与万古霉素的卤化反应,可能是万古霉素生物合成途径中的一个关键酶。本研究为阐明万古霉素生物合成途径中的卤化过程提供了有益线索。
- 李航魏维阮林高李秋爽陈代杰罗敏玉
- 关键词：万古霉素基因敲除HALOPEROXIDASE
- 东方拟无枝酸菌基因工程菌产新糖肽类化合物的发酵条件优化被引量：4
- 2010年
- 目的对产新糖肽类化合物的基因工程菌东方拟无枝酸菌HCCB10167的发酵条件进行优化。方法考察了该工程菌的遗传稳定性,对发酵的主要影响因子接种量、初始pH值、温度、摇瓶装量、转速等进行了单因素试验,确定了最佳培养条件,并用均匀设计试验对其发酵培养基进行了优化。结果该工程菌遗传稳定,优化后的产量较起始条件提高1.8倍。结论工程菌保持了万古霉素类抗生素的生产能力,具有规模化生产的潜能。
- 魏维黄鹤阮林高杨晟戈梅陈代杰
- 关键词：基因工程菌发酵优化
- bgtfA在东方拟无枝酸菌中异源表达及其产物鉴定被引量：1
- 2013年
- 在万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)中异源表达Balhimycin产生菌来源的糖基转移酶基因bgtfA,从而在工程菌发酵液中获得杂合万古霉素,以探索糖基转移酶BgtfA能否作为一个独立的元件在异源宿主中发挥催化作用。首先将bgtfA基因克隆至载体质粒pULVK2AE,构建重组质粒pLYEBA2AE,然后采用电转化方法将质粒导入东方拟无枝酸菌,用HPLC和LC-MS检测、验证工程菌发酵液中是否存在BgtfA的催化产物。成功地在东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)异源表达bgtfA基因,经HPLC和LC-MS检测分析,在工程菌的发酵液中获得预期的BgtfA催化产物,杂合万古霉素LYV07ww01。这表明BgtfA有一定的底物宽泛性,不仅能够催化表万古糖胺与balhimycin苷元的连接,还能催化万古糖胺连接至万古苷元。
- 李彦美许激扬徐莉魏维陈代杰戈梅
- 关键词：糖基转移酶异源表达糖肽类抗生素
- 东方拟无枝酸菌发酵液小组分的分离鉴定
- 2009年
- 本文首次从万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌的发酵液中分离纯化出三个微量组分LYV09lx01、LYV09lx02、LYV09lx03。考察了摇瓶装量的影响,确定了适合LYV09lx01、LYV09lx02富集的摇瓶发酵条件。LYV09lx03则通过万古霉素水解来富集提取。经筛选获得一种具有特异性吸附作用的弱极性大孔吸附树脂AB-8,结合中压液相色谱及高效液相色谱技术进一步纯化鉴定得到一新结构的异黄酮苷。
- 刘效稳李秋爽阮林高韩威陈代杰戈梅
- 关键词：发酵水解液异黄酮
- 糖肽类抗生素N-甲基无糖万古霉素的分离、纯化和结构鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的利用含N-甲基转移酶的粗酶液对无糖万古霉素进行催化,从得到的反应液中分离、纯化N-甲基无糖万古霉素,并进行结构鉴定。方法利用大孔树脂吸附、中压反相制备色谱等方法进行分离纯化。利用光谱分析,进行结构解析。结果分离到一个糖肽类化合物N-甲基无糖万古霉素。结论经鉴定N-甲基无糖万古霉素为新结构化合物。
- 郭兆霞阮林高李航朱丽陈代杰
- 关键词：N-甲基转移酶糖肽类抗生素
