“重大新药创制”科技重大专项(2011ZX09102-001-28)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- ^99mTc标记的抗CEA小分子嵌合抗体的体内分布与肿瘤显像
- 2013年
- [目的]采用99mTc标记抗人CEA小分子嵌合抗体Rch24 F(ab’)2,研究其在荷人结肠癌裸鼠体内的生物学分布及放射免疫显像的特征与应用价值。[方法]采用SnCl2直接还原法标记抗体,快速薄层层析法(ITLC)测定抗体的标记效率、放化纯度和体外稳定性,ELISA检测标记抗体的免疫比活性。荷人结肠癌裸鼠尾静脉注射99mTc-Rch24 F(ab’)2后,研究标记抗体在裸鼠体内的生物学分布,并进行肿瘤显像。[结果]99mTc-Rch24 F(ab’)2的标记率为90%,放化纯度>95%。99mTc-Rch24 F(ab’)2的放射比活为840MBq/mg,免疫比活性为65.7%。标记抗体24h时放射性脱落小于5%。荷瘤裸鼠注射99mTc-Rch24 F(ab’)23h后即可观察到肿瘤影像,5~24h均可获得清晰的肿瘤影像,标记抗体在体内呈肿瘤靶向性分布,12h时肿瘤的摄取和多数脏器T/NT比值均达到最高水平。[结论]99mTc-Rch24 F(ab’)2在体内靶向分布于结肠癌肿瘤组织,具有较高的T/NT比值并可在肿瘤局部滞留,注射99mTc-Rch24 F(ab’)25h后肿瘤成像满意。99mTc-Rch24 F(ab’)2在临床肿瘤的放射免疫分子显像诊断中具有良好的应用前景。
- 孙立新赵泽国遇珑刘军韩璐璐杨治华孙力超冉宇靓
- 关键词：放射免疫显像
- 抗CEA F(ab')_2抗体在CHO细胞中的表达、纯化及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:构建抗人癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)小分子嵌合抗体Rch24 F(ab')2真核高效表达载体并在中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary Cell,CHO)中实现高产量表达,对Rch24 F(ab')2的生物学活性进行鉴定。方法:采用DNA重组技术构建Rch24 F(ab')2真核高效表达载体,转染CHO-dhfr-细胞,通过提高MTX浓度进行基因扩增表达,夹心ELISA法测定抗体产量,筛选高表达细胞株,采用亲和纯化的方法从细胞培养上清中纯化Rch24 F(ab')2;采用SDS-PAGE鉴定分子量,采用Western blot、直接ELISA和细胞免疫荧光鉴定所表达的Rch24 F(ab')2的人源性和抗原结合活性。结果:成功构建了抗人CEA小分子嵌合抗体Rch24 F(ab')2的真核高效表达载体,MTX加压扩增表达后筛选获得高产克隆5C4,其抗体产量为32.3μg/ml;结果显示所分泌的主要为正确组装的Rch24 F(ab')2分子,分子量约110kD;West-ern blot、直接ELISA、细胞免疫荧光结果证明所表达的Rch24 F(ab')2含人抗体的恒定区,并特异地与肿瘤细胞表达的CEA结合。结论:成功地在真核细胞CHO中高效表达了具有良好的生物学活性的抗人CEA小分子嵌合抗体Rch24 F(ab')2。
- 孙立新赵泽国遇珑杨治华孙力超冉宇靓
- 关键词：CEACHO
