国家自然科学基金(30070776) 作品数:6 被引量:12 H指数:2 相关作者: 李青峰 谢峰 叶伊琳 刘凯 赵林森 更多>> 相关机构: 上海第二医科大学附属第九人民医院 上海交通大学医学院附属第九人民医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
新西兰大白兔和SD大鼠NRCF中神经生长因子的同源性检测 被引量:1 2005年 目的:了解新西兰大白兔和SD大鼠神经再生条件液(NRCF)中神经生长因子的同源性。方法:分别提取兔N R C F,兔和鼠神经的上清液、沉淀液,稀释至一定的比例,以兔抗鼠NGF为一抗,羊抗兔IgG抗体为二抗,进行Elisa检测,检测抗原抗体反应。结果:来自新西兰大白兔和SD大鼠的神经组织原液和上清液及沉淀液皆能与兔抗鼠NGF发生抗原抗体反应,反应的强度依次排序为:兔NRCF>兔神经沉淀液>兔神经上清液>鼠神经沉淀液>鼠神经上清液。结论:表明了新西兰大白兔和SD大鼠NRCF中神经生长调节因子具有很高的同源性。 叶伊琳 李青峰关键词:神经生长因子 周围神经 神经导管修复周围神经损伤的临床应用 被引量:8 2004年 目的应用神经导管桥接缝合法,提高周围神经损伤修复疗效。方法应用可降解几丁糖-生物膜导管,使用套入桥接缝合法,代替以往的端端缝合法修复神经损伤,术后随访了解神经功能恢复情况。结果12例,其中8例感觉神经损伤,2例运动神经受损,2例长段神经移植。随访为6~20个月,8例感觉恢复S3或S3+,1例运动恢复M3,1例M4。2例电击伤患者感觉功能恢复为S2。结论应用神经导管套入缝合法能有效修复周围神经损伤。 谢峰 李青峰 顾彬 刘凯关键词:几丁糖 生物膜 神经导管 周围神经损伤 几丁糖—聚乳酸复合生物材料神经导管的预构 被引量:3 2005年 目的:神经导管修复周围神经损伤,作为一种新的周围神经损伤修复方法显示出广阔的应用前景。本实验将几丁糖、聚乳酸两种材料结合,试图研制出一种理化性质、生物相容性俱佳的神经导管材料。材料和方法:第一部分:几丁糖—聚乳酸复合生物材料的研制及其物理性能测试。将2%几丁糖与0.5%聚乳酸以不同的比例化合反应后制成导管。力学实验检测不同比例制成导管的强度和韧性,根据实验结果选择最佳比例,并进一步测定该复合材料的其它物理性能。第二部分:几丁糖—聚乳酸复合生物材料的生物相容性检测。用细胞增殖度实验评价新材料的细胞毒性。用最大剂量法豚鼠致敏实验测试新材料致敏性。结果:2%几丁糖与0.5%聚乳酸以5:1(体积比)比例混合反应制成的新材料,其各项物理性能符合制备神经导管要求。在细胞毒性实验中,复合材料浸提液培养2天后及5天后,细胞相对增殖度(RGR)为83.67%,96.41%。致敏实验显示新复合材料浸提液致敏率为0级。实验证明新复合材料无细胞毒性、无致敏性。结论:几丁糖、聚乳酸通过适当比例结合制作的复合生物材料具有良的物理性能及生物相容性,符合制备神经导管的理化要求。 谢峰 李青峰 赵林森关键词:聚乳酸 几丁糖 甲钴胺对皮肤移植后神经再支配的影响 被引量:2 2005年 目的:为改善植皮后感觉功能恢复,研究猪皮肤移植后神经纤维再生及甲钴胺对其再生的促进作用。方法:实验于2003-09/2004-04在上海第二医科大学动物房完成。选择8头白色小猪,随机分为两组,于背部分别给予不同厚度皮片移植,一组术后注射甲钴胺,一组术后不给任何处理。术后2,4,8周取材,切取所植皮肤,切片进行嗜银染色,观察神经再生的情况。显微镜下对神经纤维数量进行计数并进行统计学检验,两组结果进行比较。结果:使用甲钴胺组的神经密度同未使用组做团体t检验,2周时差异有显著性意义(t=2.85;P=0.013);4,8周差异均无显著性意义(t=1.015,1.16;P=0.33,0.27)。中厚皮片同刃厚皮片相比2,4周差异无显著性意义(t=1.19,1.21;P=0.25,0.24),8周时差异有显著性意义(t=2.26;P=0.04)。结论:甲钴胺对皮肤移植后神经再支配有促进作用,尤以植皮后早期较为明显。中厚皮片的神经再生优于刃厚皮片。 谢峰 李青峰关键词:皮肤移植 维生素B12 神经再生条件液中相对分子质量为22万的蛋白提取与鉴定 2007年 目的了解神经再生条件液(never regeneration conditioned fluid,NRCF)中蛋白质成分组成及相对分子质量为220×103的蛋白带中是否存在一类新的尚未知的神经活性因子。方法新西兰大白兔25只,体重1.8~2.5kg,取坐骨神经建立神经再生室模型。术后1周采集NRCF,采用凝胶过滤法分离NRCF中蛋白质,主要分离相对分子质量为220×10^3的蛋白带,应用自然聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-polyacrylamide gel electrophoresis,Native-PAGE)法检测其相对分子质量。并对取得的相对分子质量为220×10^3(a峰)和(20~40)×10^3(c峰)的蛋白带,分别应用已知的神经活性因子抗体:抗神经生长因子(nerve growth factor,NGF)抗体、抗胶质细胞源性神经营养因子(glial cell-derived neurotrophic factor,GDNF)抗体、抗脑源神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)抗体、抗神经营养素3(neurotrophin 3,NT-3)抗体、抗NT-4抗体、抗睫状神经营养因子(ciliang neurotrophic factor,CNTF)抗体,采用Western blot免疫印迹法和ELISA检测,观察抗原抗体反应。结果经凝胶过滤法分离的NRCF蛋白质,多集中在相对分子质量为(20~40)×10^3和220×10^3。相对分子质量为(20~40)×10^3蛋白带中神经营养因子与抗NGF、抗BDNF、抗NT-3、抗CNTF等抗体反应,相对分子质量为220×10^3的蛋白带所含神经营养因子仅与抗NT-4抗体反应。结论NRCF中相对分子质量为220×10^3的蛋白带仅与抗NT-4抗体反应,且生物活性远强于NT-4,该蛋白带中可能存在一类新的神经活性因子。 叶伊琳 郑丹宁 李青峰关键词:神经营养因子 蛋白提取 重组逆转录病毒pLNCX2-GDNF转染许旺细胞及其表达 被引量:1 2003年 目的 利用基因转染技术将胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)基因转入许旺细胞 (SC)以提高其分泌该因子的水平。 方法 应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法合成GDNFcDNA片段 ,以逆转录病毒pLNCX2为载体导入许旺细胞内 ,并运用RT PCR、免疫细胞化学染色、ELISA及运动神经元联合培养法检测外源性基因在mRNA和蛋白水平的表达及其产物的活性。 结果 RT PCR检测结果示GDNF SCs表达GDNFmRNA的水平明显优于SCs ;免疫细胞化学检测发现CDNF SCs抗GDNF蛋白染色呈强阳性 ,正常SCs呈弱阳性 ;ELISA法检测结果示转染后 4周CDNF SCs分泌GDNF蛋白的水平升至正常SCs的 5 1倍 ;运动神经元联合培养法结果显示GDNF SCs分泌的外源性基因产物具有生物学活性。 结论 GDNF基因转染SC在mRNA和蛋白水平表达GDNF明显优于正常SCs ,外源性基因表达产物具有神经生物学活性。 平萍 李青峰 张涤生关键词:胶质细胞源性神经营养因子 许旺细胞 基因转染技术 逆转录病毒