江苏省自然科学基金(BK2012621)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- G蛋白耦联受体49在胰腺癌组织中的表达及其临床意义
- 2017年
- 目的探讨G蛋白耦联受体49（GPR49）在胰腺癌组织中表达的临床意义及其生物学作用。方法采用组织芯片和免疫组织化学染色技术比较77例胰腺癌患者癌组织和癌旁组织中GPR49的表达，并分析其在不同病理分级和临床分期患者癌组织中的表达水平。以GPR49阳性胰腺癌细胞株CFPAC-1为细胞模型，GPR49的配体R-脊椎蛋白1进行体外刺激，采用细胞计数方法分析其对CFPAC-1细胞的促增殖作用，并采用流式细胞术分析R-脊椎蛋白1对CFPAC-1细胞表达细胞膜CD44水平的影响。将R-脊椎蛋白1孵育后的CFPAD1细胞皮下接种于裸鼠，观察小鼠成瘤时间和肿瘤大小。统计学分析分别采用t检验和单因素方差分析。结果77份胰腺癌组织中普遍表达GPR49。胰腺癌组织中GPR49的免疫组织化学染色综合评分为（9．0±2．4）分，高于癌旁组织的（5．7±2．4）分，差异有统计学意义（t=8．995，P〈0．01）。GPR49的表达与患者肿瘤大小、病理分级、淋巴结转移、临床分期等无明显相关性（P均〉0．05）。体外实验表明，R-脊椎蛋白1可促进CFPAC-1细胞增殖，上调CFPAC-1表达CD44。体内实验表明，R-脊椎蛋白1刺激组小鼠在接种CFPAC-1细胞后30d的肿瘤体积为（606．0±188．0）mm3，大于PBS刺激组的（364．2±83．7）mm3，差异有统计学意义（t=2．616，P=0．031）。结论GPR49普遍表达于胰腺癌细胞，R-脊椎蛋白1／GPR49途径对胰腺癌细胞具有促增殖作用，提示其可能是干预胰腺癌生长的潜在靶点。
- 田辛辛李锐陶敏居颂光
- 关键词：胰腺肿瘤CD44
- 人LGR5基因克隆及其基因转染细胞株的构建
- 2013年
- 目的克隆人LGR5分子并构建其稳定表达的基因转染细胞株.方法提取人宫颈癌细胞株HeLa细胞总RNA,通过RT-PCR克隆获得人LGR5全长cDNA,将人LGR5全长cDNA重组入逆转录病毒载体pEGZ-term,通过293T细胞的包装获得具有感染力的完整重组病毒载体,收集培养上清感染L929细胞,筛选构建稳定表达人LGR5分子的基因转染细胞株.结果成功克隆人LGR5全长cDNA和构建pEGZ/LGR5逆转录病毒表达载体,成功获得稳定表达人LGR5的基因转染细胞株L/LGR5.结论成功克隆了人LGR5基因并构建了稳定表达LGR5分子的基因转染细胞株,为进一步研究LGR5分子的生物学功能奠定了基础.
- 邓云陆婷葛彦居颂文居颂光
- 关键词：LGR5克隆基因转染细胞株
- RSPO1基因转染间充质干细胞株的构建及其促进肠隐窝的生存和增殖作用研究
- 2018年
- 目的构建表达RSPO1的间充质干细胞株,并检测其在肠上皮生存和更新中作用。方法将表达人RSPO1的重组表达载体p EGZ-TermR/RSPO1及辅助病毒p HIT456和p HIT60共转染293T细胞,收取上清后感染小鼠细胞系C3H10 T1/2,而后经G418抗性筛选、细胞内细胞因子染色和流式细胞术鉴定获得稳定表达RSPO1基因的细胞株;通过体外肠隐窝培养体系,观察其对小鼠肠隐窝的生存和增殖的影响。结果成功建立了稳定表达RSPO1的间充质干细胞株,体外肠隐窝培养实验证实该细胞株可维持肠隐窝存活并促进其增殖。结论成功建立了稳定表达RSPO1的基因转染细胞株,为探讨修复肠上皮策略提供了有力工具。
- 王萃陆婷居颂文居颂光
- 关键词：肠上皮WNT途径
- Rspo1基因转染间充质干细胞株的构建及生物学活性鉴定
- 2013年
- 目的：构建稳定表达Rspo1的基因转染间充质干细胞株。方法将人Rspo1全长cDNA重组入逆转录病毒载体pEGZ-Term，通过与辅助病毒载体共转染293T细胞，包装为具有感染力的完整重组病毒载体，收集培养上清感染间充质干细胞C3H10 T1/2细胞株，筛选获得G418抗性的基因转染细胞，通过RT-PCR与流式细胞术检测感染后C3H10 T1/2细胞Rspo1分子的表达，并采用细胞计数法观察其上清对SW480结肠癌细胞增殖能力的影响。结果成功构建pEGZ-Term/Rspo1逆转录病毒表达载体，获得了稳定表达人Rspo1的基因转染细胞株C3H10/Rspo1，该细胞株上清能促进SW480结肠癌细胞增殖。结论建立了稳定表达Rspo1的基因转染间充质干细胞株，为进一步利用Rspo1和间充质干细胞靶向作用于肠道干细胞救治肠上皮损伤的研究奠定了基础。
- 陆婷葛彦邓云陈伟宋莉曹莎莎居颂文居颂光
- 关键词：间充质干细胞基因转染细胞
- 人PD-L1基因转染细胞株的构建及其对活化的Jurkat细胞增殖和凋亡的影响被引量：3
- 2015年
- 目的:构建稳定表达人PD-L1分子的基因转染细胞株,观察其对活化的Jurkat细胞增殖和凋亡的影响。方法:将编码人PD-L1分子的全长c DNA重组入反转录病毒表达载体p EGZ-Term-R,将重组载体p EGZ-Term-R/PD-L1和辅助病毒载体用脂质体法共转染293T细胞,包装具有感染能力的完整病毒;收集含有完整重组反转录病毒的293T细胞培养上清,感染L929细胞,筛选并获得G418抗性的基因转染细胞。采用流式细胞术检测表达PDL1的基因转染细胞,命名为L929/PD-L1。采用PHA活化T细胞系来源的细胞株Jurkat,并将其与丝裂霉素预处理的L929/PD-L1细胞共培养,用细胞计数法观察L929/PD-L1细胞株对活化的Jurkat细胞增殖能力的影响,并检测其凋亡情况。结果:成功获得了稳定表达人PD-L1基因的转染细胞株L929/PD-L1。PHA可诱导Jurkat细胞活化并表达PD-1分子;L929/PD-L1与PHA刺激后的Jurkat细胞共培养,可抑制Jurkat细胞增殖,促进其凋亡。结论:成功构建了稳定表达人PD-L1的细胞株,PD-L1分子抑制活化的Jurkat细胞增殖,促进其凋亡。
- 宋莉葛彦曹莎莎徐永芳潘建忠谢炜居颂文居颂光
- 关键词：PD-L1基因转染细胞株JURKAT细胞
