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秀丽线虫物理低氧损伤模型的建立与应用: 2011年; 目的:利用秀丽线虫研发合适的低氧损伤模型,以更好地揭示低氧生理和低氧病理的分子机制。方法:通过对秀丽线虫进行不同时间的低氧处理,系统观察线虫的死亡率、运动功能、细胞形态及相关蛋白表达水平的变化,分析低氧对线虫的损伤情况。结果:氧浓度为0.2%的物理性低氧可引起秀丽线虫多种细胞形态发生变化,进而导致线虫死亡,且死亡率随低氧时间延长而持续增加,同时低氧诱导因子(HIF-1)的表达显著上调。进一步通过神经元特异性转基因(绿色荧光蛋白)株系观察到低氧可引起神经元特征性损伤。结论:成功建立有效、简便易行的线虫物理低氧损伤模型,可用于低氧病理和低氧应答分子机制研究。; 任长虹张继业石锦平蒋斌赵娜刘虎岐张成岗; 关键词：秀丽线虫

泛素连接酶Smurf1与接头蛋白TRAF1相互作用并介导其泛素化降解被引量：1: 2010年; 目的研究泛素连接酶Smurf1与接头蛋白TRAF1之间的相互作用,并检测TRAF1蛋白水平是否受Smurf1调控。方法在HEK293T细胞中共表达TRAF1与Smurf1,通过免疫共沉淀测定二者结合,并检测与Smurf1共表达时TRAF1蛋白水平变化,最后用AP-1报告基因测定TRAF1功能是否受Smurf1调控。结果 TRAF1可以特异性地与Smurf1相互作用,其在细胞内的蛋白水平可以被Smurf1所降低,而且TRAF1在AP-1报告基因中的抑制功能可以被Smurf1逆转。结论 TRAF1与Smurf1相互作用导致TRAF1在细胞内的蛋白水平降低而且在AP-1通路中的抑制作用减弱。; 奚慎立卢克峰张令强贺福初; 关键词：TRAF1 蛋白质相互作用蛋白质降解免疫沉淀法

多重PCR在质粒拷贝数检测中的应用被引量：4: 2011年; 聚合酶链式反应(PCR)作为常规分子克隆技术已在分子生物学的各个领域得到广泛应用。然而,多重PCR技术应用于质粒拷贝数检测的研究尚未见报道。为深入探索多重PCR在质粒拷贝数测定中的应用,首先利用构建的多重PCR引物设计及评估体系分别针对细菌基因组DNA和质粒载体DNA序列设计多重PCR引物;然后以转化有不同质粒载体的大肠杆菌菌液为模板进行多重PCR反应;最后利用凝胶成像仪采集图像后进行积分光密度分析以获得质粒的相对拷贝数。结果显示通过多重PCR得到的质粒相对拷贝数与Real-time PCR和Southern blot的检测结果基本一致,说明多重PCR可用于质粒拷贝数的定性检测。利用多重PCR技术建立了一种便捷的质粒拷贝数检测方法,为在宿主细胞中快速确定克隆载体或表达载体的相对含量提供了参考。; 李媛任长虹吴永红叶巧石锦平屈武斌郑晓飞刘虎岐张成岗; 关键词：质粒拷贝数多重PCR 菌液实时定量PCR SOUTHERN BLOT

微管结合蛋白NuSAP的组织表达谱分析被引量：10: 2010年; 目的探讨微管结合蛋白NuSAP的组织分布特征。方法利用组织斑点杂交和Northern杂交分析NuSAP在多种组织中的分布情况,RT-PCR分析NuSAP在多种肿瘤细胞系中的mRNA水平,Western印迹分析NuSAP在多种肿瘤细胞系中的蛋白水平。结果 NuSAP的组织表达谱分析表明该基因在胸腺、胎肝、骨髓中高表达,提示NuSAP在造血免疫中可能发挥重要功能;在多数肿瘤细胞中均可检测到NuSAP的表达,为分析该基因的功能提供了线索。结论本研究揭示了NuSAP是一种组织特异性的微管结合蛋白,可能在造血/免疫组织中发挥重要功能,研究结果对肿瘤、免疫等疾病的防治具有一定的科学意义。; 谢萍李璐张令强贺福初; 关键词：微管结合蛋白组织表达谱 RT-PCR

通过RNAi敲低CKIP-1表达、促进骨形成进行骨质疏松治疗: 目的寻找促进骨形成治疗骨质疏松的新策略。方法鉴定调控骨形成及成骨细胞活性的基因,通过RNAi技术干扰相关基因表达,达到促进骨形成、增强骨量的目的。同时,研发一套特异性靶向成骨细胞的siRNA递送系统,实现组织特异性递...; 张令强; 关键词：骨质疏松骨形成 RNA干扰

扩容性血液稀释对缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用: 2011年; 【目的】探讨扩容性血液稀释对缺血再灌注大鼠脑损伤的影响。【方法】以健康成年雄性SD大鼠为试验动物,制备缺血再灌注脑损伤模型。于脑缺血2 h后,以生理盐水为血液稀释剂,在再灌注时通过尾静脉注射生理盐水对模型大鼠进行扩容性血液稀释,生理盐水注射剂量分别为0.5,1.0,2.0 mL/只,于再灌注6,9,12,24 h时取大鼠脑样本,制备切片,用2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)染色,然后以图像分析方法计算TTC染色面积和脑梗死体积。【结果】生理盐水血液稀释对缺血再灌注大鼠脑损伤具有保护作用,随着生理盐水注射剂量的增加,SD大鼠脑梗死体积呈降低的趋势,注射2.0 mL生理盐水组脑梗死体积显著低于对照组。【结论】扩容性血液稀释能显著降低大鼠缺血再灌注模型脑梗死面积,对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。; 朱瑞萌刘虎岐张成岗; 关键词：血液稀释脑缺血再灌注脑梗死

DNA解链温度(Tm)不同预测方法的比较被引量：4: 2011年; 目的寻找最优的DNA解链温度(Tm)预测方法。方法使用12种Tm值预测方法计算来自文献中348个实测数据的Tm值,将每种方法预测值与实验标准值的差值进行四分位法作图,并计算各方法残差平方和的自然对数,排序后比较12种预测方法的优劣。结果使用最邻近法并结合SantaLucia 1998热力学参数表和Schildkraut1965盐浓度校正公式所预测的Tm值最接近实测数据。结论最邻近法是最准确的Tm值预测方法,而且当PCR引物的GC含量越接近于50%时,其预测准确率越高。; 张艳春屈武斌卢一鸣周扬张成岗; 关键词：引物探针热力学

不均一性核糖核蛋白(hnRNP)在中枢神经系统中的作用被引量：3: 2010年; 不均一性核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNP)是一类可参与mRNA前体剪接、mRNA转运和降解等多种功能的RNA结合蛋白。目前发现hnRNP家族蛋白也参与了神经细胞、神经胶质细胞的生长调控过程,并且与多种中枢神经系统疾病的发生发展密切相关。该文对hnRNP的结构、功能及其在中枢神经系统中的作用进行综述,旨在为理解神经系统疾病的分子机制提供新线索。; 刘一沉任长虹王航雁张成岗; 关键词：神经细胞神经胶质细胞中枢神经系统神经系统疾病

利用GSP逆转录结合巢式PCR技术鉴定剪接变体的新方法及其在小鼠TrkC基因变体发现中的应用: 2011年; 目的利用基因特异性引物(gene specific primer,GSP)逆转录结合巢式PCR(nPCR)技术,建立鉴定剪接变体的新方法。方法以小鼠TrkC基因为例,参考其已知变体1和变体2的序列分别设计GSP和nPCR引物,以逆转录产物为模板进行nPCR反应,扩增产物采用1.5%琼脂糖凝胶分离并回收具有递减趋势的DNA片段,利用T/A克隆技术亚克隆到载体pMD19-T进行直接测序,并与小鼠RefSeq数据库进行比对。结果利用GSP逆转录结合nPCR技术不仅可鉴定出TrkC基因的已知剪接变体,而且还能够筛选到TrkC基因的新剪接变体并命名为变体3,与变体1相比属于盒式外显子剪接模式,缺失了变体1的520～2188位共1669 bp。结论利用GSP结合nPCR技术建立了一种鉴定剪接变体的方法,为新剪接变体的挖掘与功能研究以及理解异常剪接相关疾病的机制研究提供了重要参考。; 张艳春严瑞芬吴永红张成岗; 关键词：巢式PCR 神经营养因子3 基因组

使用“夹心TTC染色法”可显著提高脑缺血模型中梗死灶的检测效率被引量：6: 2011年; 目的优化红四氮唑(TTC)染色法,以提高对脑缺血模型中梗死灶的位置及面积的精确判定程度。方法采用线栓法建立Balb/c小鼠的大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血5h后断头取脑,利用"夹心TTC染色法"对梗死灶进行判定。结果传统TTC染色仅有单侧脑片染色效果较好而另侧染色效果很差,相比之下,"夹心TTC染色法"染出的脑片整体颜色鲜红、均一,两侧染色程度均十分良好,能够明确判定出梗死灶。结论优化后的"TTC夹心染色法"适合于梗死灶位置以及面积的精确判定,可显著提高脑缺血模型中梗死灶的检测效率。; 蒋斌张成岗; 关键词：脑缺血模型梗死灶

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国家科技重大专项(2009ZX09503-002)

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