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膳食中高n-6/n-3多不饱和脂肪酸比值对小鼠精子浓度及活度的影响被引量：4: 2014年; 目的近年来男性精子数量、质量呈下降趋势。文中研究小鼠膳食中高n-6/n-3多不饱和脂肪酸比值对其精子浓度及活度的影响。方法健康的B6小鼠20只,随机数表法分成对照组(基础饲料)和实验组(基础饲料+10%花生四烯酸),每组10只。喂食8周后,取各组小鼠附睾尾检测小鼠精子浓度及活度的变化,观察小鼠附睾组织显微结构的改变。结果实验组小鼠血清中α-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、二十二碳五烯酸、亚油酸含量均较对照组明显下降(P<0.01),而花生四烯酸和n-6/n-3 PUFAs明显升高(P<0.01)。实验组精子浓度(7×106个/mL)较对照组(80×106个/mL)显著下降,实验组精子活度(27%)较对照组(86%)显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)。附睾组织管腔中精子数目明显减少。结论膳食中高n-6/n-3多不饱和脂肪酸比值对精子数量、质量具有显著损伤作用。; 刘珊珊李晓曦林艳于鹏丽张欣赵子建; 关键词：小鼠精子花生四烯酸

甲状腺激素阴茎神经电生理诱发早泄的作用机制被引量：3: 2017年; 目的甲状腺激素功能改变影响男性性功能的具体生理机制尚不明确。文中旨在探讨甲状腺激素通过影响阴茎神经电生理而诱发早泄的作用。方法回顾性分析2015年10月至2016年12月于南京总医院男科门诊就诊,并诊断为继发性早泄患者52例(早泄组),同期来院进行体检的24名健康男性作为对照组。所有被纳入者经过男科体检及甲状腺激素检验。此外,继发性早泄患者经过阴茎交感皮肤反应(PSSR)检查,根据PSSR潜伏期长短,将早泄组分为PSSR正常组及异常组。结果早泄组总四碘甲状腺原氨酸(TT4)水平显著高于对照组,差异有统计学意义[(92.68±11.56)nmol/L vs(102.81±18.37)nmol/L,P=0.018)];与PSSR正常组相比,异常组的TT4及游离四碘甲状腺原氨酸(FT4)水平均显著增高,分别为[(95.72±12.42)nmol/L vs(113.28±20.89)nmol/L,P<0.01]和[(10.81±1.63)nmol/L vs(12.02±0.88)nmol/L,P=0.003]。FT4与PSSR潜伏期呈负相关(r=-0.363,P=0.008),与PEDT呈正相关(r=0.455,P=0.001)。结论继发性早泄患者异常的PSSR可能与甲状腺激素的水平升高相关;调节伴有异常PSSR的继发性早泄患者的甲状腺激素水平有利于改善其早泄症状。; 黎银明靖俊洪志伟丁华龙姚兵; 关键词：甲状腺激素

脂代谢紊乱与精子发生障碍的分子关联研究——肥胖和脂代谢紊乱致精子发生障碍的基础及临床干预研究被引量：1: 2018年; 该项目是基于对中国的不孕不育人群迅速上升的重大问题开展立项研究的。自上世纪80年代以来，我国不孕不育的人群大幅上升，目前已经达到12．5％，和其他发达国家的不孕不育率已经接近或持平。如此庞大的不孕不育人群不但增加了个人以及社会的医疗负担，对和谐社会的建立以及家庭的幸福都非常不利。; 关键词：精子发生代谢紊乱预研肥胖分子

肝癌HepG2和Hep3B细胞系SNF5表达及定位被引量：1: 2018年; 目的染色质重塑因子SNF5在肝细胞肝癌中的生物学功能仍有待深入研究,本研究检测SNF5在HepG2和Hep3B肝癌细胞系中的表达及亚细胞定位,并构建Flag-SNF5真核表达质粒。方法提取HepG2和Hep3B两种肝癌细胞系的总蛋白,蛋白质印迹法检测SNF5内源性表达;应用共聚焦激光扫描显微镜观察Hep3B细胞SNF5蛋白定位;提取HepG2总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增SNF5全长编码序列,亚克隆至含有Flag标签的真核表达载体中;将构建的重组质粒测序并转染到Hep3B细胞中,提取细胞蛋白进行蛋白质印迹检测,验证其表达情况;使用免疫沉淀的方法纯化Flag-SNF5融合蛋白。结果在HepG2及Hep3B两种肝癌细胞系中,均检测到了SNF5蛋白的内源性表达。在Hep3B细胞中,SNF5主要定位于细胞核。将SNF5蛋白全长编码区成功克隆到pcDNA3-Flag载体中。重组质粒转染入Hep3B细胞后,检测到融合蛋白Flag-SNF5的表达,相对分子质量约为39×103,并对Flag-SNF5融合蛋白进行了纯化。结论 SNF5蛋白在HepG2及Hep3B两种肝癌细胞系中均有表达,且在Hep3B细胞中主要定位于细胞核。成功地构建了Flag-SNF5的真核表达质粒,验证了重组质粒的表达,并纯化了该融合蛋白。; 尹中波霍云龙王春玉赵越; 关键词：肝细胞癌重组质粒蛋白质印迹法

Mu2蛋白亚细胞结构定位及其相互作用蛋白的筛选: 2016年; 目的:采用果蝇S2细胞表达FLAG-Mu2蛋白,观察其亚细胞结构定位并纯化鉴定FLAG-Mu2质粒蛋白复合物,为Mu2蛋白的研究提供依据。方法:FLAG-Mu2转染果蝇S2细胞后表达FLAG-Mu2融合蛋白,共聚焦激光扫描显微镜下观察FLAG-Mu2蛋白的亚细胞定位,并通过核浆分离蛋白提取实验观察细胞核提取物中FLAG-Mu2蛋白的表达情况;采用免疫沉淀技术沉淀FLAG-Mu2复合物,并对其进行纯化及质谱测序以确定蛋白复合物的组分。结果:共聚焦激光显微镜下观察,FLAG-Mu2蛋白主要表达于细胞核中。核浆分离蛋白提取检测,融合蛋白相对分子质量约为140 000,主要存在于细胞核提取物中。纯化FLAG-Mu2蛋白复合物并进行蛋白质质谱分析,FLAG-Mu2复合物中可能含有pif1A、CG31782、mip120、CG31690和G protein-sa60A。结论:FLAG-Mu2蛋白在果蝇S2细胞中主要定位于细胞核,FLAG-Mu2蛋白复合物中有5种可能的蛋白组分。; 霍云龙王春玉赵越; 关键词：融合蛋白

膳食中高n-6/n-3多不饱和脂肪酸比值对小鼠肠道菌群的影响被引量：8: 2015年; 目的:探讨小鼠膳食中高n-6/n-3多不饱和脂肪酸比值对肠道菌群的影响。方法:随机选取健康的30只C57/B6小鼠分为对照组(基础饲料)、花生四烯酸组(基础饲料+10%花生四烯酸)、鱼油组(基础饲料+10%鱼油)。喂食16周,16周后提取小鼠肠道菌群宏基因组DNA,采用Roche 454测序技术对肠道菌群16Sr RNA基因V3-V5区域进行测序,对菌群的组成结构以及含量的变化进行分析。结果:花生四烯酸组小鼠体内厚壁菌门的含量达到(55.3±5.26)%,与对照组小鼠体内厚壁菌门的含量(30.23±8.75)%相比显著性升高(P<0.05)。并且花生四烯酸组小鼠体内变形菌门的含量(3±0.762)%与对照组(1.5±0.265)%相比也显著性上升(P<0.05)。结论:膳食中高n-6/n-3多不饱和脂肪酸比值会造成小鼠体内肠道菌群组成结构的失衡,导致厚壁菌门以及变形菌门的含量上升。; 张欣向荣李晓曦林艳刘珊珊巩思嘉潘金顺赵子建; 关键词：肠道菌群花生四烯酸

n-6/n-3多不饱和脂肪酸营养失衡对小鼠精子发生的影响被引量：3: 2017年; 目的:探讨n-6/n-3多不饱和脂肪酸营养失衡对小鼠精子发生的影响。方法:健康的30只C57/B6雄鼠随机分为对照组(CON)、高脂组(HF)、花生四烯酸组(HF+AA)。喂食16周,做合笼实验并记录致孕率,通过精子动力分析仪检测小鼠精子活力和数量的变化,用Elisa试剂盒测血清中睾酮和甘油三酯水平。通过病理组织染色观察小鼠睾丸组织的形态学变化。利用Realtime-PCR的方法检测小鼠睾丸中Dazl基因表达水平的变化。结果:高脂组、花生四烯酸组与对照组相比精子活力[(16±0.01;12.33±2.83 vs72.2±12.73)%,P<0.001],精子数量[(7.5±1.13;6±0.14 vs 13.87±0.35)million/m L,P<0.001],致孕率[(28.57;14.29 vs 78.57)%,P<0.001]及血清睾酮含量[(0.35±0.14;0.27±0.07 vs 3.51±0.7)ng/m L,P<0.001]均显著性降低。高脂组、花生四烯酸组与对照组相比,血清中甘油三酯的含量显著增高[(0.74±0.04;0.74±0.04 vs 0.45±0.04)mmol/L,P<0.001]。病理组织染色观察到花生四烯酸组小鼠睾丸组织出现了明显异形,曲细精管内部的初级精母细胞明显缺失,管腔中从初级精母细胞到精子的发生过程出现了变异,精子的数量也显著性下降。参与精子生成过程中的减数分裂前的有丝分裂增殖期、精原细胞的发育等过程的Dazl基因在高脂组和花生四烯酸组小鼠睾丸中的表达量与对照组相比显著降低(0.87±0.05;0.65±0.03 vs 1.07±0.04,P<0.05)。; 丁宁张欣刘姗姗林艳李晓曦李芳红赵子建; 关键词：精子活力精子发生障碍多不饱和脂肪酸

西地那非衍生物SDN447对大鼠前列腺增生的影响被引量：2: 2016年; 目的:研究西地那非衍生物SDN447,即3-(6,7-二氢-1-甲基-7-氧代-3-丙基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)-N-(正丁氧羰基)苯磺酰胺的药代动力学特征以及对去势后丙酸睾酮诱导大鼠前列腺增生模型的影响。方法:SD雄性大鼠灌胃给药,液相色谱-串联质谱分析给药后0.2、0.5、1、1.5、2、4、6和8 h大鼠血浆中SDN447浓度,用Winnonlin6.3软件计算药代动力学参数。SD雄性大鼠去势后皮下注射丙酸睾酮(5 mg·kg-1·d-1)构建前列腺增生模型,灌胃给药。40 d后,检测大鼠前列腺湿重、前列腺指数,观察前列腺组织形态学变化。结果:药代动力学结果表明,SDN447相较于西地那非半衰期延长。与模型组比较,SDN447给药组大鼠前列腺湿重和前列腺指数明显降低(P<0.05)。HE染色结果表明,SDN447给药组大鼠前列腺腺上皮乳头和细胞层数较模型组减少。结论:SDN447比西地那非半衰期延长,可以显著抑制大鼠前列腺增生。; 徐溜溜林艳李晓曦赵正刚赵子建; 关键词：良性前列腺增生药代动力学 PI3K/AKT

高脂饮食对雄性小鼠生殖功能和睾丸内氧化低密度脂蛋白变化的影响被引量：9: 2016年; 目的脂代谢紊乱可导致雄性不育,但其影响精子发生及睾丸微环境的机制尚不明确。文中旨在探讨高脂饮食对雄性小鼠生殖功能以及睾丸内氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)表达变化的影响。方法 16只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机数字表法分为正常饮食组和高脂饮食组,每组8只。分别给予标准饲料与高脂饲料维持饮食干预连续喂养16周。检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)以及睾酮水平;取附睾尾测定精子数量和活力,HE染色观察睾丸结构变化,免疫组织化学分析小鼠睾丸组织中Ox-LDL的免疫定位和表达变化。结果与正常饮食组相比,高脂饮食组小鼠体重显著增加(P<0.05),血清TG差异无统计学意义(P>0.05),高脂饮食组较正常饮食组血清TC升高[(2.31±0.33)mmol/L vs(6.54±0.31)mmol/L,P<0.01],血清Ox-LDL升高[(0.32±0.03)mg/L vs(0.44±0.06)mg/L,P<0.01],血清睾酮降低[(3.64±0.43)mg/L vs(0.40±0.14)mg/L,P<0.01],小鼠精子浓度降低[(9.95±0.75)106/m L vs(5.66±1.51)106/m L,P<0.01]和精子活动率降低[(54.69±17.84)%vs(32.48±5.80)%,P<0.01]。HE染色显示高脂饮食组较正常饮食组睾丸间质细胞、睾丸生精细胞与腔内精子数量明显减少,同时免疫组织化学显示Ox-LDL定位于睾丸间质细胞周围且表达明显升高(P<0.01)。结论睾丸局部微环境中,Ox-LDL升高可能抑制了Leydig细胞的睾酮合成,进而影响了睾丸生精功能。; 靖俊丁宁丁晓萌彭龙平胡学春赵子建姚兵; 关键词：高脂饮食 OX-LDL

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国家重点基础研究发展计划(2013CB945200)

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