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HPV16E6基因原核表达载体的构建及表达: 2010年; 构建HPV16E6基因原核表达载体并进行表达。根据GenBank中的人乳头瘤病毒(HPV)序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有HPV全长基因片段重组质粒为模板,经PCR扩增出321 bp的DNA片段。将所得片段与pGEX-KG载体连接,转化JM109大肠杆菌,筛选阳性克隆,其扩增片段测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pGEX-KG-HPV16E6已构建成功。提取pGEX-KG-HPV16E6质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE、Western blot鉴定。结果在大肠杆菌中获得HPV16E6基因融合表达,主要以包涵体形式存在;融合蛋白的分子量为38 kD;以IPTG终浓度为1 mmol/L,诱导4 h后融合蛋白产量最高。表达的蛋白能与抗HPV16E6抗体发生特异性反应。HPV16E6基因在大肠杆菌中获得高效表达,为HPV16E6疫苗的研制奠定了基础。; 彭方毅姜海蓉彭方亮赵卫兵林治华陈远翔陈胜珍; 关键词：HPV16E6 原核表达 GST融合蛋白疫苗

基于氨基酸性质的EB病毒抗原MHC-Ⅰ类分子限制性表位的定量构效关系建模被引量：2: 2013年; 目的建立EB病毒(EBV)抗原表位的理论计算模型并用于其定量预测,为肿瘤免疫的多肽疫苗设计提供理论基础。方法从表位数据库中收集33条EBV抗原表位,使用逐步回归(STR)方法筛选2个对平衡解离常数(KD)贡献较大的结构参数用于表位的结构表征,最后用多元线性回归(MLR)方法建立结构参数与KD的定量构效关系(QSAR)模型。结果该模型具有较好的稳定性(R2=0.637,Q2=0.581)与预测能力(R2test=0.501)。结论此方法可确定表位中各个氨基酸的物理性质对于平衡解离常数的贡献,为表位设计与改造提供直接线索;STR和MLR相结合建模方法具有物化意义明确、易于解释及操作简便易行等优点。; 韩英子王远强胡勇纪永军路亚阔蓝君罗鸿林治华; 关键词：EB病毒表位构效关系

Molecular Modeling Studies of Vascular Endothelial Growth Factor Receptor Tyrosine Kinase Inhibitors Combining Molecular Docking and 3D-QSAR Methods被引量：8: 2013年; The vascular endothelial growth factor （VEGF） and its receptor tyrosine kinases VEGFR-2 or kinase insertdomain receptor （KDR） have emerged as attractive targets for the design of novel anticancer agents. In the present work, molecular docking method combined with three dimensional quantitative structure-activity relationships （comparative molecular field analysis （CoMFA） and comparative molecular similarity indice analysis （CoMSIA）） to analyze the possible interactions between KDR and those derivatives which acted as selective inhibitors. The CoMFA and CoMSIA models gave a cross-validated coefficient Q2 of 0.713 and 0.549, non-cross-validated R2 values of 0.974 and 0.878, and predicted R2 values of 0.966 and 0.823, respectively. The 3D contour maps generated by the CoMFA and CoMSIA models were used to identify the key structural requirements responsible for the biological activity. The information obtained from 3D-QSAR and docking studies were very helpful to design novel selective inhibitors of KDR with desired activity and good chemical property.; 路亚阔王娟胡勇林勇林治华; 关键词：COMFA COMSIA

气管内喷雾注入博莱霉素诱导大鼠肺纤维化模型的建立及其评价被引量：1: 2017年; 目的建立大鼠肺纤维化模型,并对其进行评价。方法经气管内喷雾注入博莱霉素(Bleomycin,BLM)致大鼠肺纤维化,于第1、2、3、4周处死大鼠,观察大鼠给药后日常状况和体重变化,测定羟脯氨酸(L-hydroxyproline-trans-4-hydroxy-L-proline,HYP)含量、肺重,计算肺系数,取肺组织制备病理切片,进行HE、Masson染色后,评价肺组织形态学变化。结果给药4周后,模型组大鼠肺部产生了明显肺纤维化症状,肺系数及HYP含量均明显高于对照组,肺泡间隔增厚,纤维化区可见大量蓝色胶原纤维沉积。结论大鼠气管内喷雾注入BLM可成功制备肺纤维化模型,且纤维化分布较均匀。; 彭方毅周欢吴静姜海蓉; 关键词：博莱霉素纤维化

HPV L1和16/18 DNA在喉癌组织中的表达被引量：1: 2010年; 目的检测HPVL1和16/18DNA在喉癌组织中的表达,探讨HPV在喉癌发生中的作用。方法用PCR检测123例喉癌组织及123例喉粘膜上皮组织中HPVL1和16/18DNA。结果在123例喉癌标本中,HPV-L1阳性率为76.42%;HPV-16E6阳性率为54.47%;HPV-16E7阳性率为58.54%;HPV-18E6阳性率为42.28%;HPV-18E7阳性率为48.78%.123例喉粘膜PCR结果表明:低危型HPV的阳性率与喉癌相近;高危型HPV的阳性率虽远远低于喉癌,但随着组织病变程度加重阳性率逐渐升高;HPV-L1的阳性率高于HPV-16E6、E7,随着组织病变程度加重,HPV-L1的检出率逐渐增高。结论 HPV-16感染是重庆地区喉癌的重要发病因素;HPV-16感染后E6/E7片段的保留并持续表达与喉组织的癌变进程密切相关;HPV-16感染会增强喉上皮病变的风险,而HPV-18有协同作用;L1片段适合用于检测HPV感染。; 彭方毅姜海蓉林治华彭方亮赵卫兵李代蓉; 关键词：HPV PCR 喉癌

慢性乙型肝炎患者发生HBsAg血清学清除后的长期临床观察被引量：2: 2015年; 目的观察慢性乙型肝炎（CHB）患者发生HBsAg血清学清除后长期临床特点和预后。方法采用回顾性分析84例CHB患者发生HBsAg血清学清除后长期的血清学、病毒学、生化指标的变化,肝炎相关性并发症发生情况（抗病毒治疗组53例,未抗病毒治疗组31例）。通过Kaplan-Meier法分析两组血清中再次出现HBsAg和HBV DNA累计阳性率,及抗-HBs累计阳性率,并对相关危险/暴露因素进行Logistic回归分析。结果共84例发生HBsAg清除和（或）转换的患者,在随访中位时间24（6～60）个月时,部分患者血清中再次发现HBsAg阳性,治疗组累计HBsAg阳性率为17%,未抗病毒治疗6.2%（P=0.093）。抗-HBs累计阳性率分别为60.4%和87.1%,两组间差异有统计学意义（P=0.024）,Logistic回归分析发现,年龄是抗-HBs产生的重要因素（OR=0.925,P=0.006）,59例患者血清通过COBAS TaqMan48检测,发现18例患者血清中HBV DNA阳性。在随访结束时,治疗组有1例患者在肝硬化基础上进展为肝癌（HCC）,自发组有3例患者进展为肝硬化。结论 CHB患者经抗病毒治疗或自发性的发生HBsAg血清学清除,绝大多数患者能够获得持久的HBsAg和HBV DNA的清除,并出现高滴度的抗-HBs,但仍有部分患者血清中再次出现HBsAg,HBV DNA阳性,甚至进展为肝硬化或HCC。; 王丽徐诚陶诗奇王宇明; 关键词：慢性乙型肝炎表面抗原 HBV

SLC10A1基因变异与HBV母婴传播易感性的相关性研究被引量：2: 2016年; 目的：在群体水平探讨乙型肝炎病毒（ HBV）功能性受体SLC10A1基因c．800G＞A变异和c．356＋1098C＞T变异对HBV母婴传播易感性的影响。方法连续收集2011年5月至2015年7月西南医院感染科收治的未经核苷（酸）类药物干预的HBV e抗原（ HBeAg）阳性且HBV高病毒载量母亲所生子代306例，其中包括感染组247例（疫苗干预55例）和未感染组59例（疫苗干预56例）。采集两组人群的血液样本，提取基因组DNA，对c．800G＞A和c.356＋1098C＞T进行基因分型，并进行病例-对照关联研究分析。组间基因型比较采用卡方检验（ Pearson卡方或连续校正卡方）。结果在经疫苗干预的人群中，未感染组c.800G＞A GA基因型频率为14．3％（8／56），高于感染组GA基因型频率（5.5％，3／55），但差异无统计学意义（χ2＝2.424，P＝0.119）；感染组c.356＋1098C＞T位点CC、CT和TT基因型频率分别为20.0％（11／55）、47.3％（26／55）和32.7％（18／55），未感染组分别为12.5％（7／56）、69.6％（39／56）和17.9％（10／56），两组基因型分布差异无统计学意义（χ2＝5.766，P＝0.056）。在总人群中，未感染组c.800G＞A GA基因型频率为13.6％（8／59），高于感染组GA基因型频率（6.9％，17／247），但差异无统计学意义（χ2＝2.010，P＝0.156）；感染组c.356＋1098C＞T位点CC、CT和TT基因型频率分别为20.2％（50／247）、49.8％（123／247）和30.0％（74／247），未感染组为11.9％（7／59）、69.5％（41／59）和18.6％（11／59），两组基因型分布差异有统计学意义（χ2＝7.436，P＝0.024）。为进一步了解不同基因型人群对乙型肝炎疫苗的反应性，进一步将感染组分为疫苗干预组55例和无疫苗干预组192例。其中，疫苗干预组与无疫苗干预组c.800G＞A位点GA基因型频率分别为5.5％（3／55）和7.3％（14／192），两组比较差异无统计学意义（χ2＝; 张艳琼晏泽辉石新星吴全新黄鸿菲王宇明; 关键词：疾病遗传易感性

喉癌中HPV不同亚型的检测及测序被引量：4: 2009年; 目的:检测人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)各型DNA在喉癌组织中的表达,探讨HPV在喉癌发生中的作用。方法:用PCR检测123例喉癌组织及123例喉粘膜上皮组织中HPV各型DNA。同时进行DNA测序,结果:在123例喉癌标本中,HPV-L1,-16E6/E7,-18E6/E7阳性率都明显高于其他各型。123例喉粘膜PCR结果表明:低危型HPV的阳性率与喉癌相近;高危型HPV的阳性率虽远远低于喉癌,但随着组织病变程度加重阳性率逐渐升高;HPV-L1的阳性率高于HPV-16E6、E7,随着组织病变程度加重,HPV-L1的检出率逐渐增高。结论:HPV-16感染会增强喉上皮病变的风险,而HPV-18有协同作用;L1片段适合用于检测HPV感染。; 彭方毅姜海蓉刘芳杜志银林治华彭方亮赵卫兵; 关键词：人乳头瘤病毒聚合酶链反应喉癌

HPV 16L1基因的原核表达及表达条件的优化被引量：3: 2010年; 目的:构建HPV16L1基因的原核表达质粒,并优化其表达条件。方法:根据GeneBank中的HPV序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有HPV全长基因片段重组质粒为模板,经PCR扩增出1 500 bp的DNA片段。将所得片段与pGEX-KG载体连接,转化JM109大肠杆菌,筛选阳性克隆。其扩增片段测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pGEX-KG-HPV16L1已构建成功。提取pGEX-KG-HPV16L1质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体,进行SDS-PAGE,Western Blot鉴定。结果:在大肠杆菌中获得HPV16L1基因融合表达,融合蛋白的相对分子量为83kDa;表达的蛋白能与抗HPV16L1抗体发生特异性反应。结论:HPV16L1基因在大肠杆菌中获得高效表达,为HPV16L1疫苗的研制奠定了基础。; 彭方毅姜海蓉陈远翔陈盛珍林治华彭方亮赵卫兵陈保德; 关键词：HPV16L1 原核表达 GST融合蛋白

慢性乙型肝炎抗病毒治疗的停药问题被引量：11: 2010年; 随着核苷（酸）类似物在慢性乙型肝炎（CHB）治疗中的长期应用,其停药方面的问题较为突出.首先,在定义治疗目标、治疗终点及停药标准上,如何掌握理想和现实的停药标准、最佳停药时机、使广大CHB患者获得最大疗效等问题都是当前值得我们关注和研究的热点课题.现将有关研究进展介绍如下.; 王宇明; 关键词：抗病毒治疗停药

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国家自然科学基金(30830090)

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