浙江省医药卫生重点科技项目(2001ZD007)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 相关作者：吕建新彭颖孟哲峰潘建华沈波更多>>
- 相关机构：温州医学院浙江省台州医院更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生重点科技项目温州市科技计划项目浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人EGF-IL-18融合蛋白的表达纯化及复性被引量：4
- 2006年
- 融合基因EGF-IL-18与表达载体pET32a(+)连接构建融合型原核表达质粒pET32a(+)-EGF-IL-18。该基因在E.coliRosetta(DE3)中获得高效表达,SDS-PAGE分析表明表达产物大部分以包涵体形式存在。以2mol/L尿素和1%TritonX-100对包涵体进行反复洗涤后,利用离子交换柱层析对包涵体进行柱上复性,结果表明离子交换层析柱上复性不仅能够获得可溶性的EGF-IL-18融合蛋白,而且产物同时得到纯化,纯度大于90%。复性的EGF-IL-18经分子筛进一步纯化后,体外实验证明具有促进人外周血单个核细胞(PBMC)IFN-g基因表达的能力。该方法简单、高效,为进一步开展EGF-IL-18的动物实验及其大量纯化制备打下基础。
- 潘建华彭颖郑昭暻吕建新
- 关键词：包涵体
- 用于肿瘤靶向治疗的EGF-IL-18融合蛋白在昆虫细胞中的表达及活性鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的 :制备能用于肿瘤靶向治疗的重组表皮生长因子受体干扰序列 白细胞介素 18(EGF-IL-18)融合蛋白 ,并鉴定其生物学活性。方法 :利用Bac-to-Bac表达系统在昆虫细胞Sf9中表达融合蛋白 ,用离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析等方法纯化表达产物 ,并以IFN-γ诱导实验和EGFR竞争结合实验初步评价融合蛋白的生物活性。结果 :经SDS-PAGE和Westernblot检测 ,Sf9细胞中表达的重组蛋白与预期的EGF-IL-18融合蛋白分子量一致 ,纯化后融合蛋白具有较高纯度和良好的免疫原性。IFN -γ诱导实验和EGFR竞争结合实验显示 ,该融合蛋白具有肿瘤导向性和抗肿瘤活性。结论 :成功表达并纯化了具有肿瘤导向性的抗肿瘤蛋白———EGF-IL-18融合蛋白 ,该蛋白具有较好的肿瘤导向性和抗肿瘤活性 。
- 孟哲峰彭颖沈波吕建新
- 关键词：昆虫细胞肿瘤靶向治疗
- 人EGF-IL18融合基因的构建及在杆状病毒表达系统的表达
- 目的通过多种基因工程方法构建EGF受体结合序列和人IL-18的融合基因,并在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中进行表达。方法重组PCR技术构建融合基因,通过亚克隆技术构建重组杆状病毒载体pFASTBacEGF-IL1...
- 孟哲峰彭颖吕建新
- 文献传递
- 突变型人IL-18的肿瘤靶向性改造及真核表达
- 2005年
- 为了构建肿瘤靶向性的人突变型IL18新基因并进行真核表达,以重组PCR技术构建EGFIL18融合基因,利用BactoBac杆状病毒表达系统和Sf9昆虫细胞株(来自秋天草地夜蛾)表达融合基因,纯化表达产物,并以IFNγ诱导实验和EGFR竞争结合实验初步评价融合蛋白的生物活性。测序证明构建的融合基因为原设计EGFIL18融合基因。SDSPAGE和Westernblot证明EGFIL18融合基因在昆虫细胞中获得表达,表达的融合蛋白的Mr约为20000,与理论值相符,纯化后融合蛋白具有特异的IL18单抗结合活性。IFNγ诱导实验和EGFR竞争结合实验显示,该融合蛋白具有肿瘤导向性和抗肿瘤活性。表明对突变型IL18成功地进行了肿瘤导向性改造并使其在真核细胞获得表达。
- 吕建新彭颖孟哲峰
- 关键词：融合基因肿瘤靶向性
- 突变型人白细胞介素18cDNA的克隆被引量：4
- 2002年
- 目的 :获得人白细胞介素 18cDNA。方法 :从 1名健康献血者的外周血单个核细胞 (PBMC)中提取总RNA ,通过PT -PCR扩增出人白介素 18(hIL - 18)的cDNA ,与PUCmT载体连接 ,构成重组质粒 ,进行测序及同源性分析。结果 :已获得hIL - 18的编码序列 ,且与Ushio等报道的序列相比存在 3处有意义突变。结论 :克隆了突变型hIL - 18cDNA。
- 彭颖吕建新
- 关键词：CDNA白细胞介素18基因克隆基因突变
- 微板酶联夹心杂交法定量检测人IL-18 mRNA
- 2003年
- 目的 :建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术 ,定量检测人IL 18mRNA。方法 :针对人IL 18mRNART PCR产物一条链的不同区域序列设计一对特异探针 ,其中一条为捕获探针 ,5’端为氨基修饰 ,可以与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合 ,“竖直”地包被在微孔板内 ;另一条为检测探针 ,3’端标记生物素。提取人外周血单个核细胞中总RNA ,进行RT PCR扩增IL 18mRNA ,产物热变性后加入已包被捕获探针的微孔板内进行杂交 ,再加入检测探针与已杂交的产物结合 ,最后经亲和素 辣根过氧化物酶 (SAV HRP)系统检测杂交信号。结果 :该法检测IL 18mRNART PCR产物的灵敏度明显高于琼脂糖凝胶电泳 ,重复性良好 ,且结果数据化。结论 :该方法具有操作简单、灵敏度高、特异性强等优点 ,适合于PCR扩增产物的定量检测。
- 金晶彭颖吕建新
- 关键词：RT-PCR
