湖南省科技计划项目(2008FJ3133)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 相关作者：卢光琇周菂曾思聪谭志荣更多>>
- 相关机构：中南大学更多>>
- 发文基金：湖南省科技计划项目国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 端粒酶shRNA慢病毒载体的构建及转染人类胚胎干细胞被引量：1
- 2011年
- 目的:构建端粒酶shRNA慢病毒载体及建立端粒酶稳定干扰的人类胚胎干细胞系。方法:将端粒酶基因特异性shRNA靶序列与慢病毒载体PLKO.1-puro连接、转化、挑取阳性克隆进行PCR及测序鉴定;利用包装细胞293T获得重组的慢病毒,感染人类胚胎干细胞,分为干扰组ShTert、载体组vector和野生型组wt;Realtime-PCR检测端粒酶mRNA的表达。结果:经PCR和DNA测序鉴定,成功构建端粒酶特异性shRNA慢病毒载体,并感染人类胚胎干细胞;经检测shTert组端粒酶mRNA表达较vector和wt组明显降低,vector组和wt组之间无明显差异。结论:通过成功构建的端粒酶特异性shRNA慢病毒载体对人类胚胎干细胞的转染实现了对其端粒酶mRNA的调控。
- 曾思聪周菂卢光琇
- 关键词：人类胚胎干细胞慢病毒载体转染
- 定量荧光原位杂交测定端粒长度被引量：1
- 2011年
- 目的:应用定量荧光原位杂交(Q-FISH)方法测定端粒长度。方法:选取4种端粒长度均一的标准细胞株采用Q-FISH的方法做出荧光亮度与端粒长度的标准曲线,从而得出实验细胞株的端粒长度,与DNA印迹法测定末端限制性片段(TRF)长度进行二者之间的相关性分析。结果:检测荧光强度的最佳线性曝光时间为400ms,相对于DNA印迹法,定量荧光原位杂交(Q-FISH)法所需标本量少,实验周期短,端粒长度结果与Southern杂交法具有很好的相关性。结论:采用定量荧光原位杂交方法测端粒长度具有重复性好、精确可靠的特点,适用于对珍贵标本的端粒改变进行分析。
- 曾思聪卢光琇
- 关键词：端粒
- 高效液相色谱串联质谱联用法测定培养基中丝裂霉素C残留量被引量：2
- 2009年
- 目的建立液相色谱-电喷雾串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定培养基中丝裂霉素C残留量的方法。方法培养基样品经乙腈直接沉淀蛋白后,采用Thermo Hypurity C18柱(2.1mm×150mm,5μm)分离,流速为0.2ml/min,以乙腈∶0.1%甲酸=40∶60为流动相等度洗脱。通过电喷雾离子源进入质谱,以二级质谱多反应监测(MRM)方式进行检测。结果丝裂霉素的线性范围分别为0.098～50ng/ml,最低检测浓度为0.098ng/ml,平均相对回收率在91.30%～105.46%范围内,日内和日间精密度<15%。结论本法简单、快速、灵敏、重现性好,可用于丝裂霉素C的培基中残余量的测定和监控。
- 周菂谭志荣卢光琇
- 关键词：液相色谱质谱联用丝裂霉素C人胚胎干细胞
- 人类早期胚胎发育端粒维持初步研究被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨人类胚胎在早期发育过程中端粒维持的机制。方法:利用端粒特异性探针对临床ⅣF过程中2～8细胞时期停止发育不适合移植的胚胎和来自于囊胚期的人类胚胎干细胞进行荧光原位杂交检测端粒重组。结果:人类早期胚胎发育中存在端粒交换的结构APB小体,而来自于囊胚期的胚胎干细胞不再具有这种结构,胚胎干细胞端粒交换发生频率较低(0.15%)。结论:结合其他实验报道,提示人类胚胎早期发育过程中出现两种端粒维持机制的并存。
- 曾思聪周菂卢光琇
- 关键词：胚胎干细胞端粒
