广东省科技计划工业攻关项目(2004B50201020)
- 作品数：13 被引量：33H指数：4
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- 相关机构：华南农业大学更多>>
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- 寄生虫功能基因组学研究的几种方法
- 随着人类基因组计划及各种模式生物基因组计划的完成,对生物基因组的研究已从结构基因组学逐步转向了功能基因组学。对于寄生虫而言,由于其基因众多,生活史较复杂,而体外培养技术还不完善;相对于其它学科,其功能基因组学的研究进展较...
- 朱兴全黄翠琴邹丰才林瑞庆陈宁周鹏宋慧群
- 文献传递
- 猪蛔虫感染期幼虫抑制消减cDNA文库的构建被引量：3
- 2007年
- 为筛选与线虫感染性相关的基因,本研究以猪蛔虫为对象,构建猪蛔虫感染期幼虫差异表达消减cDNA文库,为研究线虫期特异性发育的分子机制奠定基础。分别提取感染期幼虫和其它各期幼虫及成虫的总RNA,纯化mRNA后,采用Clontech公司PCR-selectTM试剂盒进行反转录合成cDNA并进行抑制消减杂交(SSH),构建猪蛔虫感染期幼虫差异表达的消减cDNA文库,并采用Southern斑点杂交进行消减效率的检测。随机从文库中抽取45个克隆进行测序及在线BLAST分析。试验结果表明,感染期幼虫差异表达的消减cDNA文库具有较强的特异性;在得到的41个表达序列标签(ESTs)中,有40个ESTs与已报道的基因有较高的相似性,主要代表猪蛔虫第三期幼虫基因和成虫头部基因,有1个cDNA片段可能代表新基因。猪蛔虫感染期幼虫差异表达消减cDNA文库的成功构建,为进一步研究幼虫发育差异表达基因的功能奠定了基础。
- 黄翠琴陈宁张新高林瑞庆宋慧群朱兴全
- 关键词：猪蛔虫抑制消减杂交差异表达基因斑点杂交
- 猪蛔虫感染期幼虫抑制消减cDNA文库的构建及分析
- 为了筛选与寄生线虫幼虫发育相关的基因,以猪蛔虫(Ascaris suum)为模型,分别提取感染期幼虫和其他各期幼虫及成虫的总RNA,纯化mRNA后,采用Clontech公司PCR-selectTM试剂盒进行反转录合成cD...
- 黄翠琴陈宁林瑞庆宋慧群朱兴全
- 关键词：猪蛔虫抑制消减杂交差异表达基因CDNA文库斑点杂交
- 文献传递
- 寄生线虫功能基因组学的研究进展被引量：1
- 2007年
- 寄生线虫病严重危害人和动物的健康,但目前防治寄生线虫病尚存在困难。随着分子生物学技术的迅速发展,运用生物技术手段来控制寄生线虫病将成为可能,由此而来,研究寄生线虫的基因功能具有非常重要的意义。本文简要概述了研究寄生虫功能基因组学的一些方法,如研究差异表达基因的方法、RNA干涉技术、寄生虫的转基因技术和生物信息学等,并综述了猪蛔虫、圆线科线虫、旋盘尾丝虫、旋毛虫、马来布鲁线虫和有齿食道口线虫等一些重要寄生线虫在功能基因组学上的研究进展。
- 黄翠琴陈宁朱兴全
- 关键词：功能基因组学RNA干涉寄生线虫
- RNAi—生命科学的又一重大发现:2006年诺贝尔生理学/医学奖介绍被引量：2
- 2007年
- 2006年10月2日,47岁的斯坦福大学教授Andrew Z.Fire和46岁的马萨诸塞州大学教授Craig C.Mello由于发现RNA干涉(RNA interference,RNAi)以及他们在基因沉默现象研究领域的杰出贡献而成为2006年诺贝尔生理学/医学奖获得者。本文概要介绍这一重大发现及其应用前景。
- 朱兴全陈宁周鹏
- 关键词：诺贝尔奖RNA干涉
- 表达谱基因芯片技术及其在兽医学上的应用被引量：5
- 2005年
- 邹丰才吴绍强李明伟朱兴全
- 关键词：基因芯片技术表达谱功能基因组学研究人类基因组计划基因组测序
- 寄生线虫期特异性发育相关基因的研究进展被引量：1
- 2006年
- 寄生线虫严重危害着人类及畜禽的健康,给养殖业造成严重经济损失。从分子水平研究寄生线虫的生长、发育、繁殖等调控机制,可望找到防制寄生线虫病的新途径。该文从与寄生线虫发育调控相关的表面分子、入侵宿主时的触发基因、在宿主体内与摄食相关的基因以及引起宿主免疫应答和逃避宿主免疫应答的基因等方面对寄生线虫期特异性发育相关基因的研究进展作一综述。
- 黄翠琴邹丰才陈宁朱兴全
- 关键词：寄生线虫发育调控
- 应用cDNA微阵列芯片技术筛选猪蛔虫性别差异表达基因的研究被引量：9
- 2006年
- 采用cDNA微阵列芯片技术,从所构建的猪蛔虫雌、雄成虫cDNA消减文库分别挑取1 044和1 119个克隆,PCR扩增其插入片段,经纯化后点样于预先处理好的基片上(双点杂交),制备成cDNA微阵列芯片。将分别标记荧光素Cy3-dUTP和Cy5-dUTP的雌虫和雄虫cDNA探针,与制备好的cDNA芯片杂交(平行进行反标杂交试验)。根据每个点杂交后的Ratio值,筛选出双点杂交和正反标中都同时具有表达差异的基因克隆共1 559个。将表达差异最明显的前831个克隆进行测序,获得720个有效序列,经生物信息学分析发现,雄虫特异表达的主要精子蛋白和雌虫特异表达的卵巢信息蛋白的基因序列多数与新杆属线虫存在同源性,有31个可能是新的ESTs。性别差异表达基因及其相关生物信息的获得为下一步研究基因功能奠定了基础。
- 邹丰才吴绍强廖申权林瑞庆李明伟宋慧群黄翠琴朱兴全
- 关键词：表达谱分析
- 猪蛔虫不同发育期幼虫的收集方法研究被引量：3
- 2006年
- 目的研究猪蛔虫不同发育期幼虫的收集方法。方法采用7.5%次氯酸钠氧化感染期蛔虫卵,37℃过夜后,用灭菌生理盐水离心数次,充分洗去次氯酸钠,将沉淀用玻璃珠在振荡器上振荡至全部卵壳破裂,幼虫孵出。用淋巴细胞分离液通过密度梯度离心法将幼虫与卵壳分离,最后收集底层的脱鞘第三期(L3)幼虫。在贝尔曼原理的基础上,在漏斗中加入低浓度(0.4%)琼脂凝胶,分别将绞碎的含幼虫的猪肝、肺和小肠内容物及其肠粘膜平均分装在数个漏斗中,放入40℃温箱中孵育3h,待大部分幼虫游离到管底,最后用400目分样筛过滤分离肝中的L3,用300目分样筛过滤分离肺中的L3,用200目分样筛过滤分离肠内容物及其粘膜上的第四期幼虫(L4)。结果次氯酸钠氧化加玻璃珠震荡法能够使感染期蛔虫卵几乎完全脱壳,配合淋巴细胞分离液的密度梯度离心法能收集到纯度较高且活力较强的体外脱鞘幼虫。与传统贝尔曼氏分离法相比,采用低浓度琼脂糖凝胶液能获得杂质少、高纯度的猪内脏中的不同发育期幼虫。结论次氯酸钠氧化加玻璃珠震荡法是体外脱鞘分离感染期幼虫的一种较为理想的方法,通过在漏斗内加低浓度的琼脂凝胶的方法是从猪内脏中获得高纯度的不同发育期幼虫的一种有效的方法。本方法不仅适用于猪蛔虫,而且对其它动物和人的寄生线虫幼虫的收集也有参考价值。
- 黄翠琴陈宁邹丰才林瑞庆朱兴全
- 关键词：次氯酸钠玻璃珠琼脂凝胶
- 应用RNA干扰技术对猪蛔虫性别相关基因功能的初步研究被引量：3
- 2006年
- 针对编码猪蛔虫雌虫卵巢蛋白基因的EST序列设计了1对特异引物及连接T7启动子的引物，经PCR扩增，获得5’端连有T7启动子的双链DNA，在RNA聚合酶的作用下，转录合成dsRNA。通过浸泡的方式将dsRNA导入秀丽新杆线虫中，在浸泡后的5个不同的时间点，采用RT—PCR检测虫体浸泡后靶基因被干扰的效果。试验结果表明，在浸泡后的8～29h能检测到同源靶标的存在；而在浸泡后的43～57h不能检测到靶标RNA。另外，试验组没有观测到虫体明显的表型变化，而对照组在浸泡28h后，发现部分线虫体内有发育成形的虫卵。初步认为导入虫体的dsRNA发生了干扰效应。
- 邹丰才宋慧群陈宁张翰林瑞庆周鹏朱兴全
- 关键词：猪蛔虫RNA干扰
