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湖北省自然科学基金(2010CDB07706)
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陶凯雄
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华中科技大学同济医学院附属协和医院
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小干扰RNA沉默zeste基因增强子同源物2对阿霉素诱导胃癌细胞MKN28衰老的影响
2013年
目的观察小干扰RNA(siRNA)沉默zeste基因增强子同源物2(EZH2)对阿霉素诱导胃癌细胞MKN28衰老的影响。方法体外化学合成EZH2基因特异性小干扰RNA,脂质体Lipo-fectamine2000介导转染人胃癌细胞MKN28;实时定量聚合酶链反应(Real—timePCR)检测特异性siRNA对EZH2基因mRNA水平的沉默效果;采用阿霉素诱导细胞衰老,衰老相关.p.半乳糖苷酶(SA—B.gal)染色检测各组细胞衰老情况,激光共聚焦显微镜检测各组细胞胞核中衰老相关异染色质灶(SAHF)的形成。流式细胞仪和噻唑蓝实验(MTF)检测siRNA对细胞周期和生长的影响,并比较在阿霉素诱导下各组细胞的相应变化。结果EZH2siRNA能有效抑制MKN28细胞中EZH2mRNA表达,促进阿霉素诱导的MKN28细胞衰老和SAHF形成,EZH2siRNA+阿霉素组细胞SA-13-gal染色阳性率和SAHF形成比例明显高于对照组,分别为(87.88±2.66)%、(96.27±1.71)%和(42.01±7.50)%、(51.72±2.97)%,且EZH2siRNA能阻滞MKN28细胞周期于Go/G.期,比例为(47.41±10.68)%,抑制细胞增殖,并促进阿霉素的阻滞细胞周期和抗增殖效应。结论EZH2siRNA可有效抑制胃癌细胞MKN28中EZH2表达,促进阿霉素诱导的胃癌MKN28细胞衰老,抑制细胞增殖。
白洁一
马牧原
蔡明
许飞
陈俊华
韩高雄
帅晓明
陶凯雄
关键词:
小干扰RNA
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