西京医院科技创新基金
- 作品数：31 被引量：146H指数：8
- 相关作者：王雨生惠延年张鹏徐建锋赵炜更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学清华大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人脐血中血管内皮祖细胞体外扩增和鉴定的实验研究被引量：8
- 2004年
- 目的:探讨从人脐血中分离、培养、体外扩增血管内皮祖细胞(EPC)的方法及体外进行EPC的鉴定。方法:采用密度梯度离心法从脐血中分离EPC,体外分别培养在包被有FN和不包被FN的培养皿中,采用免疫组织化学技术(SABC法)鉴定培养贴壁细胞表面标志CD31、CD34及KDR的表达;流式细胞仪检测细胞表面标志CD133及表达CD133细胞比例。结果:包被FN的培养皿中细胞贴壁及增殖均比未包被的多,免疫组化染色CD31、CD34及KDR均呈阳性,培养第4天流式细胞仪检测CD133+占21.3%。结论:密度梯度离心法可用于体外分离脐血中EPC进行实验研究,FN对于体外培养EPC有非常重要的作用。
- 易成刚郭树忠张琳西舒茂国王昕梅刘忠艾卫兵倪云志
- 关键词：人脐血血管内皮祖细胞体外扩增
- 腺病毒介导脑源性神经营养因子基因在培养的雪旺细胞中的表达被引量：5
- 2006年
- 目的:观察腺病毒介导人脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNF)基因在培养的雪旺细胞(Schwanncell,SC)中的表达,为视神经损伤修复提供可靠的组织工程用的种子细胞。方法:在293细胞中培养扩增BDNF重组腺病毒(adenovirallydeliveredBDNF,Ad-BDNF),采用蚀斑形成试验测定其感染滴度。体外培养SD大鼠源性的SC,以Ad-BDNF感染培养的SC,用逆转录—聚合酶链反应(reversetranscriptasepolymersechainreaction,RT-PCR)检测BDNFmRNA的表达,用免疫印迹技术(immunoblotassay,WesternBlotting)和酶联免疫反应检测(enzyma-linkedimmumosorbentassay,ELISA)培养液上清中BDNF的表达。结果:Ad-BDNF经扩增后可获得较高感染滴度的重组腺病毒载体。在正常培养条件下未经Ad-BDNF感染的SC低表达BDNF,而感染3d后的SC其BDNF表达明显升高,表达量随时间延长而增加,并能在感染21d后仍维持高表达趋势。结论:Ad-BDNF可以介导BDNF基因转染到培养的SC中,后者可以在较长时间内高效表达BDNF。
- 卢春光胡丹惠延年
- 关键词：视神经损伤脑源性神经营养因子细胞重组腺病毒基因转染
- 血管内皮细胞生长因子体外转染血管内皮祖细胞的研究被引量：4
- 2004年
- 目的 探讨脂质体介导血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因转染血管内皮祖细胞(EPC)应用于基因治疗的可行性、安全性。方法 体外分离、培养、免疫组织化学及流式细胞仪鉴定EPC,转染VEGF后用免疫组织化学和ELISA检测EPC表达VEGF蛋白,噻唑蓝(MTT)检测EPC对VEGF质粒转染的敏感性。结果 EPC表达CD_(34)、CD_(31)、KDR及CD_(133)细胞表面标志,转染后EPC胞内表达VEGF。脂质体介导PcDNA3.1(-)/VEGF_(165)质粒转染、PcDNA3.1(-)/VEGF_(165)空质粒转染、不转染任何质粒的3组EPC培养基上清中表达的VEGF分别为(352±35)ng/L、(45±5)ng/L、0 ng/L(P<0.05),VEGF质粒转染对EPC增殖无影响。结论 EPC可作为VEGF转染的靶细胞,用于基因治疗。
- 易成刚郭树忠韩骅张琳西舒茂国吴锦华
- 关键词：体外转染VEGF165血管内皮祖细胞血管内皮细胞生长因子PCDNA3细胞表面标志
- 眼内缓释给药的研究现状被引量：4
- 2005年
- 药物疗法是防治多种眼内增生性、感染性和变性疾病的重要措施之一,而眼内缓释给药系统是实现高效、低毒局部药物治疗的一种有效手段。近年来有关眼内缓释给药系统的研究包括脂质体、纳米粒、微粒体、植入体和巩膜塞等。离子电渗给药作为一种物理控释给药途径也受到关注。
- 李越王雨生惠延年
- 关键词：眼内疾病缓释给药系统
- 慢性马兜铃酸肾病大鼠模型肾组织中差异蛋白质的筛选被引量：3
- 2006年
- 孙世仁宁晓暄陈威
- 关键词：马兜铃酸肾脏差异蛋白质
- 小鼠胚胎干细胞-聚酯复合物在体多分化特性的初步实验观察
- 2005年
- 目的初步探讨胚胎干细胞聚酯复合物在体多分化特性。方法取BALBc孕鼠3.5d的囊胚,制备内细胞团(ICM)细胞用鼠胚成纤维细胞(MEF)饲养层及条件培养液培养,挑选胚胎干细胞(ES)集落并扩增传代。应用先进快速成形技术(RP)制备聚乳酸聚羟乙酸(PLGA)人工聚酯载体,扫描电镜(SEM)观察其超微结构,并对3mm×3mm×3mm大小的粒度均匀的颗粒型聚酯载体进行Ⅰ型胶原表面修饰。取10只裸鼠,于裸鼠体部左侧皮下植入2粒Ⅰ型胶原表面修饰的颗粒型PLGA聚酯载体并同时复合ES细胞(1×107个)作为实验侧;于裸鼠体部右侧对应部位皮下仅植入2粒Ⅰ型胶原表面修饰的颗粒型PLGA聚酯载体作为对照侧,术后30d取材组织学染色对比观察。结果制备和筛选出生长旺盛、传代稳定的ES细胞。先进RP制备的PLGA聚酯载体具有规则的空间网状支架结构、相互贯通的孔隙及材料表面微孔特征。组织学发现,实验侧植入体内30d,能形成包含各胚层细胞成份的“畸胎瘤”样组织,并可观察到较为典型的软骨细胞、软骨基质以及新生骨,且在多分化新生组织形成的同时载体材料逐渐降解;对照侧术后30d未见多分化新生组织形成,并仍有相对较多的聚酯载体有待降解。实验侧的多分化新生组织形成能力、生物相容性以及聚酯载体的生物可降解性均明显优于对照侧(P<0.01)。结论先进RP技术结合载体材料表面修饰的新工艺,对ES细胞全能分化特性无明显不利影响,将有望适用于以ES细胞为种子细胞的骨、软骨组织工程构建。
- 马兴胡蕴玉颜永年熊卓王哲吕荣王军徐新智李丹
- 关键词：胚胎干细胞聚酯复合物分化
- 胚胎大鼠嗅神经干细胞的培养及分化特性被引量：9
- 2004年
- 目的 建立胚胎大鼠嗅神经干细胞 (NSCs)体外培养方法 ,研究其增殖和分化特性。方法采用添加丝裂原的无血清培养基分离、培养胚胎 14d(E14 )大鼠嗅球NSCs,应用免疫细胞化学方法鉴定培养的NSCs及自然分化为特异性神经细胞的类型 ,测定NSCs的生长曲线。结果 从E14大鼠嗅球分离、培养出表达nestin ,并能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的NSCs。嗅NSCs的增殖依赖表皮生长因子 (EGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF) ,其中EGF的促分裂增殖作用明显优于bFGF。结论 从E14大鼠嗅球培养出具有自我增殖和多向分化潜能的NSCs。
- 陈福权王锦玲邱建华刘顺利米文娟
- 关键词：胚胎大鼠嗅神经神经干细胞细胞培养分化特性
- 单步萃取RP-HPLC测定大鼠眼玻璃体腔醋酸地塞米松的浓度
- 2006年
- 目的:探讨单步萃取—反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定大鼠眼玻璃体腔醋酸地塞米松(DA)浓度的可行性。方法:取空白SD大鼠眼玻璃体50μL,分别加入不同浓度的DA标准液50μL和1.0mg/L醋酸泼尼松内标液5.0μL后混匀,经甲基叔丁醚单步提取后,甲醇溶解回收,以甲醇:水(V:V=65:35)为流动相,流速为1.0mL/min,35℃柱温下进行色谱分析,紫外检测波长为240nm。结果:大鼠眼玻璃体腔DA浓度在0.1～10.0mg/L范围内,其线性回归方程为Y=1.767X+0.078(r=0.9997)。该方法的平均回收率为102.3%(n=3),日内和日间精密度RSD均<10%(n=5),最低检测限为10.0μg/L。结论:该方法能简单、灵敏、准确地测定大鼠眼玻璃体腔DA的浓度。
- 徐建锋王雨生程绍燕吕薇
- 关键词：RP-HPLC玻璃体醋酸地塞米松
- Connexin37基因多态性与冠心病的相关性被引量：7
- 2006年
- 目的探讨陕西汉族人群间隙连接蛋白37(Connexin 37,Cx37)基因多态性与冠心病的关系。方法采用聚合酶链反应和限制性片段内切酶的方法检测了150例冠心病患者(冠状动脉造影证实)及117例对照者的Cx 37基因多态性。结果冠心病患者T等位基因频率高于对照组(0.25vs0.21),两组间3种基因型(TT、TC和CC)分布无显著性差异。在男性群体中,冠心病患者T等位基因频率高于对照组(0.254vs0.243),3种基因型(TT、TC和CC)分布在两组男性间,无显著性差异。结论汉族人群中存在Cx37基因多态性,其多态性与冠心病发病无关。
- 谢学建郭文怡李兰荪舒青姜文瑞张淑珍李飞
- 关键词：冠状动脉疾病基因多态性基因频率
- 腺病毒介导BDNF基因转染的雪旺细胞对大鼠视神经损伤修复的保护作用被引量：10
- 2006年
- 目的研究经腺病毒介导,转染有人脑源性神经营养因子(brain-derivedneu-rotrophicfactor,BDNF)基因的SD大鼠雪旺细胞(Schwanncells,SCs)对成年SD大鼠视神经夹伤后修复的保护作用。方法将人BDNF基因转染到体外培养的SCs内,采用酶联免疫反应(enzyma-linkedimmumosorbentassay,ELISA)检测培养液上清中BDNF的表达量。80只成年SD大鼠随机分为转染有BDNF基因的SCs治疗组(A组)、正常SCs治疗组(B组)、DMEM治疗组(C组)和手术对照组(D组),每组20只,每只右眼建立视神经夹伤模型,D组大鼠左眼作为空白对照组(E组)。夹伤前7d进行荧光金(fluorogold,FG)逆行标记视网膜神经节细胞(retinalganglialcells,RGCs)。夹伤后即刻向A、B、C组伤眼玻璃体腔内注入相应液体各10μL。分别在伤后第7d、14d、21d、28d时进行闪光视觉诱发电位(flashvisualevokedpotentials,FVEP)检测和全视网膜铺片、记数RGCs。结果转染有BDNF基因的SCs的BDNF表达量明显高于正常SCs。A组的P1波幅比随观察时间延长呈下降趋势,但在夹伤后第14d、21d、28d时仍明显高于其他各组(P<0.05)。夹伤后第21d和第28d时,A组RGCs数分别为(1591±82)·mm-2、(1516±91)·mm-2,明显高于除E组外的其他各组(P<0·01)。结论视神经夹伤后,玻璃体腔内注射转染有BDNF基因的SCs能够促进RGCs轴突的修复,提高RGCs存活率,保护视神经功能,对视神经损伤修复具有明显的保护作用。
- 卢春光胡丹惠延年
- 关键词：视神经损伤脑源性神经营养因子雪旺细胞重组腺病毒基因转染
