山东省科技发展计划项目(2011GGB01160)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 相关作者：王瑞明王腾飞刘红娟戴琨汤丹丹更多>>
- 相关机构：齐鲁工业大学山东轻工业学院更多>>
- 发文基金：山东省科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学更多>>
- 响应面法优化大肠杆菌产海藻糖合酶发酵培养基被引量：5
- 2015年
- 以海藻糖合酶基因工程菌E.coli BL21(p ET15b-Tre S)为研究对象,以海藻糖合酶的酶活为考察指标,对海藻糖合酶基因工程菌E.coli BL21(p ET15b-Tre S)的培养基进行优化。首先运用单因素实验对大肠杆菌(E.Coli)产海藻糖合酶进行了优化,利用Plackett-Burman进行两因素两水平设计对影响其产酶因素进行评估并筛选出具显著效应的3种因素:葡萄糖、酵母浸粉和K2HPO4。用最陡爬坡实验逼近以上三种因素的最大响应面区域后,采用Box-Behnken进行三因素三水平的设计以及响应面分析,获得最佳产海藻糖合酶的培养基。结果表明,发酵大肠杆菌的最佳培养基配方为:葡萄糖7.2g/L,酵母浸粉6.6g/L,蛋白胨10g/L,(NH4)2SO45g/L,K2HPO415.7g/L,KH2PO44g/L,Mg SO4·7H2O1.6g/L,微量元素混合液0.5m L/L。在此条件下进行产酶重复实验5次,海藻糖合酶酶活为65U/mg,比优化前提高了91.2%。
- 刘红娟王腾飞汤丹丹王升戴琨王瑞明
- 关键词：大肠杆菌海藻糖合酶PLACKETT-BURMAN设计响应面法
- 乙酸对重组大肠杆菌BL21产酶的影响及作用机理研究被引量：2
- 2015年
- 旨在研究发酵过程中产生的乙酸对重组大肠杆菌BL21(DE3)/p ET15b-Tre S的生长以及重组海藻糖合酶基因表达的影响,并对其作用机理进行探讨。通过外源添加乙酸(钠)的方法,研究了乙酸钠对重组菌BL21(DE3)/p ET15b-Tre S生长曲线的影响;利用环境扫描电子显微镜,观察了重组菌形态的变化情况;通过测定菌液的电导率值变化、菌液上清中OD260的变化,研究了乙酸(钠)对菌体细胞膜渗透性、完整性的影响;通过测定菌液上清中β-半乳糖苷酶的活性检测了乙酸钠对菌体细胞内膜的影响;利用荧光分析法检测了乙酸对菌体膜蛋白构象的影响;采用SDS-PAGE电泳研究了乙酸钠对菌体重组海藻糖合酶表达量的影响。结果表明,乙酸(钠)会对重组菌的生长产生一定的抑制作用,可以导致菌体细胞的表面出现凹陷、皱缩;并会影响细胞膜的渗透性、完整性,使得一些细胞内容物发生泄漏;影响细胞膜上的膜蛋白构象,对膜的结构造成一定程度的破坏;对重组海藻糖合酶的表达产生影响。乙酸(钠)对重组菌菌体的生长及重组海藻糖合酶基因的表达有影响,并且菌体细胞膜是其作用的一个靶点。
- 戴琨王腾飞郝昭程汤丹丹刘红娟王瑞明
- 关键词：乙酸重组大肠杆菌抑菌机理海藻糖合酶
- 海藻糖合酶基因在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2013年
- 首次构建来源于恶臭假单胞菌海藻糖合酶基因(AE015451.1)的真核表达载体,探索在毕赤酵母中的表达。PCR扩增目的基因,经EcoRⅠ/XbaⅠ双酶切后连接至同样双酶切的pPICZaA中,经PCR检测和序列测定准确后,通过电击法将重组质粒转入毕赤酵母GS115中,利用含Zeocin的YPD平板筛选到阳性转化子,提取阳性转化子基因组并利用特异性引物PCR得到一条与目的基因大小相同的条带,说明目的基因转入成功,诱导重组蛋白表达并用SDS-PAGE检测可见一条约76 ku与目的蛋白大小预测相符合的蛋白条带,最后HPLC检测重组蛋白可将麦芽糖特异转化为海藻糖,说明外源表达的海藻糖合酶具有一定酶活。通过PCR、SDS-PAGE和HPLC结果说明成功构建重组pPICZaA-TreS质粒并整合到巴斯德毕赤酵母的基因组上,且海藻糖合酶基因得到预期的表达并具有活性,为下一步研究奠定基础。
- 王瑞明李忠奎王腾飞刘红娟李丕武
- 关键词：海藻糖海藻糖合酶毕赤酵母
- 产海藻糖合酶工程菌的构建及酶转化条件研究被引量：1
- 2013年
- 海藻糖作为一种功能糖，在生命科学、医药、农业、食品工业、化妆品工业等领域都有着广阔的应用前景。长期以来，由于海藻糖制取和提取上存在的困难使海藻糖的价格昂贵。试验通过基因工程技术获得一株具高效表达海藻糖合酶的大肠杆菌，该菌海藻糖合酶产量稳定，产酶酶活高。该大肠杆菌基因工程菌产海藻糖合酶最适温度为50oC，pH7．0-7．5，底物质量浓度为0．3g·mL-1，反应时间为8h，其最高转化率62．14％，每克大肠杆菌干菌体产酶酶活达到311．42U／g。
- 王建彬王腾飞吕磊李丕武王瑞明
- 关键词：大肠杆菌工程菌海藻糖合酶酶法生产
