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陕西省科学技术研究发展计划项目(2004k11-G3)

作品数：1 被引量：2H指数：1
相关作者：王宁李跃萍宋丽萍邱曙东更多>>
相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院西安交通大学更多>>
发文基金：陕西省科学技术研究发展计划项目国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇杀伤
  • 1篇杀伤效应
  • 1篇肿瘤
  • 1篇重组慢病毒
  • 1篇细胞
  • 1篇慢病毒
  • 1篇基因
  • 1篇基因治疗
  • 1篇肝癌
  • 1篇肝癌细胞
  • 1篇肝肿瘤
  • 1篇癌细胞

机构

  • 1篇西安交通大学
  • 1篇西安交通大学...

作者

  • 1篇邱曙东
  • 1篇宋丽萍
  • 1篇李跃萍
  • 1篇王宁

传媒

  • 1篇中华肿瘤杂志

年份

  • 1篇2010
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
NT4-p53（N15）-Ant重组慢病毒的构建及其对肝癌细胞的杀伤效应被引量：2
2010年
目的构建编码融合基因NT4-p53（N15）-Ant的重组慢病毒表达载体，观察其对肝癌细胞的杀伤作用。方法利用PCR体系延伸互为模板的引物，通过T载体克隆法获得p53（N15）．Ant基因克隆，酶切后连入pBV220／NT4质粒，再将融合基因NT4-p53（N15）-Ant亚克隆至慢病毒的表达质粒内，与辅助质粒共同转染HEK-293细胞，通过同源重组，获得融合基因重组慢病毒LV-NT4-p53（N15）-Ant。收集病毒上清，大量扩增并测定其滴度，用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测目的基因在HepG2细胞中的表达情况。用LV-NT4-p53（N15）-Ant处理HepG2肝癌细胞，通过光镜、电镜、四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色试验、乳酸脱氢酶（LDH）释放法和Annexin V—PI双染实验，研究LV-NT4-p53（N15）-Ant在体外对HepG2细胞生长的影响。结果克隆出p53（N15）-Ant基因，经酶切及测序证实结果正确。得到高滴度（1×10^11pfu／ml）的重组慢病毒表达载体。RT—PCR证实，感染LV．NT4-p53（N15）-Ant的HepG2细胞中有目的基因的表达。在感染后24、48、72h，LV．NT4-p53（N15）．Ant处理组的细胞存活率分别为83．4％、46．9％和33．9％，与LV．EGFP组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。LV．NT4-p53（N15）-Ant处理组细胞在感染48、72、96h后，LDH含量分别为682、815和979 IU／L，与LV.EGFP组比较，差异有统计学意义（P〈0．01），可能与肿瘤细胞膜的破坏有关。结论通过分子克隆体外重组技术，成功制备了NT4-p53（N15）．Ant复制缺陷型重组慢病毒。LV．NT4-p53（N15）-Ant对肝癌细胞具有杀伤能力，为今后的肿瘤基因治疗提供了新的可能性。
宋丽萍李跃萍邱曙东王宁
关键词：重组慢病毒肝肿瘤基因治疗
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