新疆生产建设兵团博士基金(2008JC08)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：孟庆玲陈创夫才学鹏乔军任艳更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所石河子大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 兔IL-15蛋白在毕赤酵母中的表达及其免疫学活性被引量：1
- 2008年
- 用特异性引物扩增出兔IL-15基因片段，用KpnⅠ和NotⅠ双酶切后将其定向克隆到pPICZαA中，构建出重组质粒pPICZαAIL-15。将pPICZαAIL-15用SacⅠ内切酶线性化后，电转化感受态GS115酵母细胞，用PCR法筛选阳性重组子。用1．5％的甲醇诱导重组酵母菌，取培养物上清进行重组蛋白的检测。结果SDS-PAGE电泳可在重组酵母菌培养物上清中检测到分子量为18．6kDa大小的重组蛋白。凝胶薄层扫描分析表明，3株重组酵母菌在1．5％甲醇诱导144h后，重组IL-15表达量约占培养物上清总蛋白量的6．1％-8．6％。将重组IL-15用Ni离子亲和层析纯化后，在MTT试验中表现出明显的促进淋巴细胞的增殖反应，证实表达的重组IL-15具有天然蛋白的免疫学活性。
- 孟庆玲乔军陈创夫才学鹏骆学农
- 关键词：毕赤酵母免疫学活性
- 中国荷斯坦奶牛IL-18基因的克隆与真核表达研究被引量：1
- 2009年
- 为了克隆并表达中国荷斯坦奶牛白介素18(interleukin,IL-18)基因,用牛白介素18基因特异性引物对刀豆蛋白(ConA)刺激后荷斯坦奶牛外周血单核细胞(PBMCb)总RNA进行RT-PCR扩增,并将扩增产物纯化后克隆入pMD18-T中进行核苷酸序列测定,将目的基因亚克隆到真核表达载体pGFP-C1中,构建了重组质粒pGFP-IL-18,转染BHK-21细胞,检测目的基因是否表达。结果:该基因全长582 bp,编码193个氨基酸,与羊、犬和猪IL-18基因相比,核苷酸序列有较高的同源性,但与小鼠和鸡IL-18基因相比有明显的种属差异,转染48 h后,可在转染细胞胞浆中检测到黄绿色的荧光,表明已成功克隆了中国荷斯坦奶牛IL-18基因,并实现了该基因在真核细胞中的表达。
- 乔军孟庆玲陈创夫才学鹏刘佳旭任艳张辉
- 关键词：克隆真核表达中国荷斯坦奶牛
- 中国荷斯坦奶牛CD54基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2009年
- 运用RT-PCR技术从患乳房炎的中国荷斯坦奶牛乳汁炎性细胞总RNA中扩增出CD54基因，将其克隆入pM018-T载体中进行测序和遗传进化分析。结果该基因全长1608bp，编码535个氨基酸，其中前28个氨基酸残基构成信号肽序列，482-504位为跨膜区，505～535为胞内区，在胞外区上存在13个N-链糖基化位点，在第394—472aa发现存在1个免疫球蛋白样结构域。与GenBank中报道的牛CD54相比，存在6个核苷酸变异，导致4个氨基酸发生改变，但N-联糖基化位点的数量和位置没有差异。与其他物种相比，荷斯坦奶牛CD54基因与猪CD54基因亲缘关系相对较近，与人、类人猿和猕猴亲缘性较远，与小鼠和大鼠亲缘性最远。
- 乔军孟庆玲陈创夫才学鹏任艳张辉
- 关键词：中国荷斯坦奶牛CD54克隆
