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TaqMan荧光定量PCR检测猪圆环病毒2型方法的建立: 根据猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2的序列设计两对特异性引物及TaqMan探针,以重组质粒为标准品做标准曲线,建立了PCV2的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示:TaqMan荧光定量建立的标准曲线循环阈值(C...; 陈蓉许大文魏建忠张玮李郁; 关键词：猪圆环病毒2型 TAQMAN 荧光定量PCR; 文献传递

家养野猪源猪圆环病毒2型安徽株的分离鉴定及其全基因组序列分析: 2010年; 目的对安徽省临诊疑似PMWS家养野猪病例进行猪圆环病毒2型（PCV2）分离鉴定，并对分离株的全基因组进行克隆与序列分析。方法应用PK-15细胞进行PCV2的分离与增殖，根据PCR、IFA、电镜技术进行PCV2分离株的鉴定，克隆分离株的全基因组，并对序列进行分析。结果获得1株来自安徽家养野猪源PCV2分离株，命名为YZ0901。该毒株全基因组长为1767bp，属于PCV2b基因型。与GenBank已发表的国内外参考毒株的同源性介于93．9％～99．2％，与安徽分离毒株彼此之间的同源性介于93．4％～99．5％。结论安徽省家养野猪中存在PCV2感染，分离毒株与家猪源病毒差异不大，PCV2核苷酸序列比较稳定，其进化不存在明显的地域相关性，家养野猪源PCV2的基因型与当地PCV2流行株的基因型密切相关。; 陈蓉李郁孙裴李超苏金存许大文魏建忠; 关键词：家养野猪猪圆环病毒2型全基因组

安徽省猪圆环病毒2型毒株的分离与鉴定被引量：2: 2010年; 目的从病原学角度了解安徽省猪群中PCV2的感染情况。方法PCR检测临床疑似PCV2感染的病料,阳性病料接种于PK15细胞中进行PCV2的分离和增殖,再经PCR检测、间接免疫荧光试验、电镜观察,以及ORF2基因序列分析等鉴定。结果9份临床病料中均扩增出630bp的PCV2特异性DNA片段,分离鉴定获得5株PCV2,分离毒株之间及其与27株国内外参考毒株之间的ORF2基因序列同源性在87.3%～99.8%。结论首次从病原学角度证实安徽省猪群中PCV2感染的普遍存在,分离毒株与国内外参考毒株的同源性均较高。; 苏金存李超魏建忠王桂军孙裴李郁; 关键词：猪圆环病毒2型

安徽省猪圆环病毒2型感染的流行病学调查被引量：11: 2010年; 目的了解安徽地区猪群中猪圆环病毒2型(PCV2)的感染状况。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对采自安徽省14个地(市)的468份血清样品进行PCV2抗体检测,并运用PCR技术同步进行PCV2核酸检测。结果PCV2抗体检测的平均阳性率为74.36%,且阳性率随猪的日龄增长而升高,皖南地区的阳性检出率明显高于淮北和江淮两个地区,PCR与ELISA检测结果的符合率为99.37%。结论安徽省猪群中普遍存在PCV2的感染,病毒血症与抗体共存现象显著。; 李超魏建忠淩英济谢倩孙裴李郁; 关键词：猪圆环病毒2型流行病学 ELISA PCR

猪圆环病毒2型疫苗免疫对母猪繁殖性能及仔猪母源抗体水平的影响被引量：5: 2012年; 为了解接种猪圆环病毒2型(PCV-2)疫苗对母猪繁殖性能及其仔猪母源抗体水平的影响,通过对合肥某猪场640头母猪的PCV-2疫苗免疫,统计其免疫前与免疫后各1年的繁殖性能数据,并分析其繁殖性能的差异,同时采用ELISA和PCR方法检测4头免疫母猪所产仔猪不同日龄血清中PCV-2抗体及其核酸。母猪PCV-2疫苗免疫后与免疫前的繁殖性能进行比较显示,窝产仔数和窝产活仔数分别增加0.36头和0.43头,差异极显著(P<0.01);窝产弱仔数减少0.11头,差异显著(P<0.05);仔猪吮初乳后10日龄时抗体水平高于其他检测日龄,至30日龄时迅速下降,之后随着日龄增长母源抗体逐渐下降,各组试验仔猪均未检测到PCV-2核酸。表明母猪接种PCV-2疫苗能显著提高母猪的繁殖性能,并能降低所产仔猪的PCV-2感染,仔猪20日龄左右首免PCV-2疫苗最佳。; 张毅李郁刘文孙裴魏建忠; 关键词：猪圆环病毒2型疫苗繁殖性能母源抗体

猪链球菌2型安徽分离株毒力基因cps2J、mrp、epf、sly的检测及其序列分析被引量：3: 2012年; 为了解19株猪链球菌2型(S.suis 2)安徽分离株的毒力基因型及毒力基因变异情况,通过PCR扩增S.suis 2毒力基因cps2J、mrp、epf和sly,对这4种毒力基因的扩增片段进行序列测定,并与国内外其他分离株的基因序列进行比较。结果显示,cps2J、mrp、epf和sly基因在19株S.suis 2中的检出率分别为100%、68.4%、68.4%、78.9%;19个受试菌株共分为7个毒力基因型,其中cps2J+/mrp+/epf+/sly+占57.9%,为优势基因型;S.suis 2安徽分离株4种毒力基因的检测序列之间及其与国内其他地区S.suis 2分离株的相应序列同源性均在99.1%以上,与国外S.suis 2分离株的相应序列同源性在87.8%～100%之间;19株cps2J+菌株中有1株菌cps2J基因序列有变异,13株mrp+菌株中有6株菌mrp基因序列发生变异,检测的epf和sly基因序列没有变异。表明cps2J+/mrp+/epf+/sly+是S.suis 2安徽分离株优势毒力基因型,检测的S.suis 2安徽分离株cps2J、epf和sly基因部分序列较保守,mrp基因部分序列存在较大的变异。; 许大文魏建忠孙裴殷宗俊赵洪武李郁; 关键词：猪链球菌2型毒力基因

猪圆环病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立被引量：6: 2012年; 目的建立基于TaqMan探针的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)荧光定量PCR检测方法。方法根据PCV2 ORF2的相对保守序列,设计两对特异性引物及TaqMan探针,制备重组质粒标准品;优化反应体系及反应条件,绘制标准曲线,建立PCV2 TaqMan荧光定量PCR检测方法,并验证其敏感性、特异性及重复性;用建立的方法对50份临床样本进行检测,并与普通PCR检测结果进行比较。结果重组质粒标准品经PCR及测序鉴定构建正确;建立的定量标准曲线Ct值与模板拷贝数对数之间呈良好的线性关系,相关系数R2为0.993 85;该方法的敏感性为6×101拷贝/μl,比普通PCR高2个数量级;检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪瘟兔化弱毒均无扩增曲线;检测3份PCV2阳性模板的变异系数在0.07%～0.50%之间;临床样本的阳性检出率(64%)明显高于普通PCR(44%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论建立的PCV2 TaqMan荧光定量PCR检测方法具有较高的敏感性、特异性和重复性,适用于临床样本中微量PCV2的快速检测及其组织亲嗜性、细胞培养特性的研究。; 陈蓉王艳魏建忠刘军军孙裴殷宗俊李郁; 关键词：猪圆环病毒2型 TAQMAN 荧光定量PCR

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安徽省“十一五”科技攻关项目(08010302155)