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Src蛋白及其抑制剂与肿瘤关系的研究进展被引量：4: 2012年; 随着细胞内信号通路的研究进展,肿瘤分子靶向治疗逐渐成为研究的热点。Src蛋白与肿瘤的关系十分密切,在多种肿瘤细胞中高度活化和/或过量表达,与体内的多条信号通路相联系,可被多条信号转导途径所激活,并能够促进肿瘤的发生和发展。因此,达沙替尼、塞卡替尼、博舒替尼等Src蛋白的抑制剂在肿瘤中的作用逐渐引起人们的关注。; 吴静超王金环冯学泉; 关键词：SRC 肿瘤信号通路阻断剂

bFGF与IL-6／STAT3信号通路在胶质瘤细胞中的作用关系研究被引量：6: 2014年; 目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（bfGf）与IL-6／STAT3信号通路在胶质瘤细胞中的作用关系。方法将U251细胞分为对照组、空载组和实验组，空载组和实验组按感染复数（multiplicity of infection，MOI）=100分别进行空载体腺病毒（Ad-GFP）和含有bFGF小分子干扰RNA的重组腺病毒（Ad—bFGF—siRNA）转染，通过Westernblot方法检测相关蛋白的表达，并应用ELISA方法检测细胞上清液中IL-6的水平变化。结果实验组细胞经转染Ad-bFGF-siRNA后，Westernblot结果显示，与对照组和空载组相比pSTAT3（TyrT05）和pSTAT3（Ser727）表达下降，呈时间依赖性，同时STAT3上游的激酶pERKl／2、pJAK2、Src及下游的效应蛋白CyclinDl、Bcl—xl表达均降低；ELISA法检测细胞上清液中IL-6的水平显示，实验组上清液中IL-6浓度与对照组和空载体组相比明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论腺病毒介导的bFGF小干扰RNA通过抑制IL-6的分泌，减少了胶质瘤U251细胞系的STAT3信号通路的活化，包括抑制上游的调节激酶JAK2、ERK及下游的效应分子CyclinDl和Bcl—xl的表达。; 冯学泉刘俊王金环徐新女张飚吴静超刘宏胜; 关键词：成纤维细胞生长因子白细胞介素6 胶质瘤

靶向信号转导和转录活化因子3的小干扰RNA与塞卡替尼联合治疗胶质瘤: 2014年; 目的观察携带靶向信号转导和转录活化因子3（STAT3）的小分子干扰RNA（siRNA）重组慢病毒（LV-STAT3 siRNA）与塞卡替尼（AZD0530）联合治疗在体内外抑制胶质瘤生长的效果.方法以人脑胶质瘤U87、U251细胞株和U87细胞BALB/c-nu裸鼠动物模型为研究对象,分为阴性对照组、空载体组、LV-STAT3 siRNA组、AZD0530组和LV-STAT3 siRNA与AZD0530联合治疗组.在体外实验中应用细胞计数试剂盒（CCK-8）方法检测细胞增殖,应用流式细胞仪检测细胞凋亡.在体内实验中,应用小动物活体成像技术动态监测肿瘤生长,3周后处死裸鼠,行免疫组织化学染色.结果体外实验中联合治疗组对U87和U251细胞增殖的平均抑制率分别达28.60％、36.36％（P＜0.05）;在U87细胞中,联合治疗组凋亡率最高[（55.28±1.59）％],其次为LV-STAT3siRNA组和AZD0530组[（46.38±1.76）％、（35.39±1.23）％],3组之间差异有统计学意义（P＜0.05）,在U251细胞中结果类似;体内实验中,第1周时LV-STAT3 siRNA组（8.05±1.09）、AZD0530组（7.54±1.07）和联合治疗组（7.19 ±0.73）发光值低于空载体组（11.14±1.59）,差异有统计学意义（P＜0.05）;第2周,AZD0530组（79.63 ±8.25）和空载体组（92.23±17.34）吸光度（A）值差异无统计学意义（P＞0.05）,LV-STAT3 siRNA组（63.78 ±13.46）和联合治疗组（61.57 ±7.84）A值低于AZD0530组和空载体组,差异有统计学意义（P＜0.05）.免疫组织化学显示,磷酸化STAT3和B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）蛋白在阴性对照组、空载体组和AZD0530组的表达量分别约是LV-STAT3 siRNA组和联合治疗组的3、4倍（P＜0.05）.结论体外实验中联合治疗产生明显的协同抑瘤作用;体内实验中LV-STAT3 siRNA抑瘤效果显著,AZD0530效果不理想.; 李家林尚超冯学泉吴静超徐新女刘宏胜刘俊张飚王金环; 关键词：小干扰RNA 慢病毒胶质瘤

腺病毒介导靶向碱性成纤维细胞生长因子siRNA载体的构建及鉴定: 2014年; 目的构建一种高效"沉默"碱性成纤维细胞生长因子的小干扰RNA重组腺病毒载体,并为该载体在基因研究中提供相关资料。方法设计、合成优选的靶向bFGF特异性siRNA序列。采用限制性内切酶消化和T4 DNA连接酶连接的方法,将bFGF-siRNA序列克隆至腺病毒穿梭质粒pGStrack上,然后将重组穿梭质粒pGStrack-bFGF-siRNA和腺病毒骨架质粒pGSadeno体外LR位点进行特异性重组,将bFGF-siRNA基因转移至腺病毒骨架质粒pGSadeno上,最后重组骨架质粒pGSadeno-bFGF-siRNA。鉴定正确后经Pac Ⅰ酶切,转染HEK 293细胞,包装成重组腺病毒rAd5-bFGF-siRNA。同时在HEK 293细胞中进行病毒扩增,利用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用微量全细胞病变法检测腺病毒滴度,用Western blot方法验证所构建载体作用效果。结果 PCR鉴定重组腺病毒rAd5-bFGF-siRNA构建成功;扩增后检测腺病毒滴度约为5×108 PFU/ml,Western blot结果显示目的基因蛋白沉默效率大于90%。结论应用LR重组法能成功构建携带靶向bFGF基因的siRNA重组腺病毒,该载体转染胶质瘤U251细胞株后目的基因蛋白沉默效率较高,为进一步的相关研究奠定可靠的基础。; 刘家美刘俊冯学泉徐新女刘宏胜张飚吴静超王金环; 关键词：碱性成纤维细胞生长因子腺病毒小分子干扰RNA

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天津市卫生局科技基金(2012KR07)

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