国家自然科学基金(30973851)
- 作品数：6 被引量：37H指数：3
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- 急性胰腺炎肺损伤时肺组织Ⅱ型分泌型磷脂酶A2表达及清胰汤的干预作用被引量：14
- 2010年
- 目的 探讨重症急性胰腺炎（SAP）诱发急性肺损伤（ALI）时肺组织Ⅱ型分泌型磷脂酶A2（sPLA2-Ⅱ）的表达及清胰汤的干预作用.方法 将30只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、清胰汤干预组,每组10只.采用胰胆管逆行注射去氧胆酸钠建立SAP诱发ALI模型;假手术组仅剖腹翻动胰腺.清胰汤组于制模后30 min和12 h分别给予清胰汤10 ml/kg灌胃.术后24 h各组进行血气分析,测定血清淀粉酶、sPLA2含量及肺组织湿/干重（W/D）比值;采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白质免疫印迹法（Western blotting）测定肺组织sPLA2-Ⅱ的mRNA和蛋白表达,并观察肺、胰组织病理变化.结果 与假手术组比较,模型组动脉血氧分压（PaO2）、pH值显著降低[PaO2（mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa）：79.24±5.84比96.78±3.81,pH值：7.269±0.054比7.391±0.054],动脉血二氧化碳分压（PaCO2）、血清淀粉酶、肺W/D比值、血sPLA2显著升高[PaCO2（mm Hg）：47.57±2.55比27.69±1.02,血清淀粉酶（U/L）：7 144.19±727.91比1 193.41±192.54,肺W/D 比值：8.57±2.45比3.70±0.90,血sPLA2（nmol·min^-1·ml^-1）：45.13±6.0比29.94±6.39],肺sPLA2-ⅡmRNA（1.28±0.21比0.80±0.08）和蛋白表达显著升高（均P〈0.05）.与模型组比较,清胰汤组PaO2、pH值明显升高[PaO2：（88.16±5.07） mm Hg,pH值：7.322±0.039],PaCO2、血清淀粉酶、肺W/D比值、血sPLA2明显降低[PaCO2：（33.13±2.14） mm Hg,血清淀粉酶：（4 283.51±527.52） U/L,肺W/D比值：4.05±0.52,血sPLA2：（28.00±4.78） nmol·min^-1·ml^-1],且肺sPLA2-ⅡmRNA（0.89±0.08）和蛋白表达显著降低（均P〈0.05）.清胰汤组肺、胰组织病理改变较模型组明显减轻.结论 SAP时肺组织sPLA2-Ⅱ表达增高可能是ALI的发病机制之一;清胰汤可能在转录水平抑制sPLA2-Ⅱ的表达,从而保护肺功能.
- 张雪梅陈海龙王朝晖
- 关键词：清胰汤
- 大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、纯化和鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)分离、培养及鉴定的方法。方法:采用Dobbs法提取ATⅡ。肺动脉灌洗减少肺内红细胞,气管灌洗除去肺泡腔内的白细胞,将胰蛋白酶、胶原酶灌入肺内消化分离细胞;采用免疫贴附法纯化细胞,将细胞悬液培养于覆被IgG的平皿中,有Fc段受体的细胞被黏附,而无Fc段受体的ATⅡ得以纯化。ATⅡ的鉴定采用电镜和肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)免疫组化染色,其在电镜下有特征性板层小体,免疫组化染色见胞浆有SP-A表达。结果:纯化后台盼蓝染色显示细胞活力为95%以上。通过SP-A免疫组化染色判定,纯化后ATⅡ纯度可达92%。结论:分离、纯化大鼠ATⅡ时,合适的胰蛋白酶浓度及作用时间对细胞活性有重要作用,大鼠IgG黏附纯化可以得到高纯度的ATⅡ,通过电子镜观察板层小体和免疫组化染色检测细胞SP-A表达可用于鉴定ATⅡ。
- 张雪梅陈海龙王朝晖张利纪军
- 关键词：肺表面活性物质相关蛋白A细胞培养
- 急性胰腺炎肺损伤大鼠肺组织中Cav-1与水通道蛋白1、5的表达及清胰汤的治疗作用被引量：13
- 2010年
- 目的 观察窖蛋白（Cav）1和水通道蛋白（AQP）1、5在急性胰腺炎肺损伤大鼠肺组织中的表达及定位,探讨其在急性胰腺炎肺损伤发病过程中的作用及清胰汤的可能作用机制.方法 将40只Wistar大鼠分为假手术组、模型组、地塞米松治疗组、清胰汤治疗组.经胰胆管逆行注射脱氧胆酸钠建立大鼠急性胰腺炎肺损伤模型.24 h后采血和肺组织,检测血清淀粉酶、肺湿/干重比值和肺组织病理切片判定损伤程度 RT-PCR检测肺组织中Cav-1和AQP1、AQP5的mRNA表达 提取脂筏,Western印迹检测Cav-1和AQP1、AQP5在脂筏内外的定位与表达.结果 模型组大鼠血清淀粉酶[（6152±502）U/L]、肺湿/干重比值（7.98±0.41）和肺组织病理损伤程度均明显升高.肺组织Cav-1和AQP1、AQP5均有表达,但在模型组mRNA表达水平均下调.Cav-1在脂筏内外均有表达,以脂筏内为主,AQP1完全定位在脂筏上,而AQP5则定位在脂筏外,三者在脂筏内外的分布状态没有改变,但表达量在模型组均明显下降.与模型组相比,地塞米松和清胰汤治疗组大鼠血清淀粉酶、肺湿/干重比值和肺组织病理损伤程度均下降 肺组织Cav-1和AQP1、AQP5的mRNA表达上调,在脂筏内外的表达水平有不同程度的恢复.结论 Cav-1和AQP1定位在脂筏,而AQP5定位在脂筏外,三者的表达下调与急性胰腺炎肺损伤密切相关.地塞米松和清胰汤都能够明显上调Cav-1和AQP1、AQP5的表达,有效减轻肺损伤程度.
- 王钢陈海龙任凤李雅琼李洁
- 关键词：CAVEOLIN-1水通道蛋白
- 脱氧胆酸对胰腺腺泡细胞的损伤及核转录因子活性的影响被引量：1
- 2011年
- 目的观察脱氧胆酸（DCA）对AR42J胰腺腺泡细胞的损伤作用并探讨其对核转录因子（TF）活性的影响。方法应用噻唑蓝（MTF）比色法检测DCA作用下细胞存活率改变，流式细胞术AV／PI双染法检测细胞的凋tk／坏死率。细胞经0．4mmoL／LDCA分别作用15min、30min、4h后收集培液上清，收集细胞并提取细胞质和细胞核蛋白，分别检测培液上清和胞质淀粉酶的活性，利用Luminex检测细胞核，11F的DNA结合活性。结果DCA对AR42J胰腺腺泡细胞的损伤作用呈浓度和时间依赖性，对细胞质内和培液中的淀粉酶水平无明显影响。在检测的40种TF活性变化中，DCA诱导ATP2、AR33、STATS、NFAT、FKHR和NKX-2．5这6种TF活性明显升高，而RUNX／AML、NF-Y、MEF2和E2F1这4种11F活性则明显下降，其余30种TF活性无明显变化。结论DCA对腺泡细胞的损伤作用主要表现为凋亡和坏死，对细胞内酶的合成和分泌功能没有明显影响。DCA诱导细胞核TF活性的变化，可能是其诱导细胞损伤的分子生物学基础。
- 张桂信陈海龙曹传海林小洋张利纪军王永鹏
- 关键词：腺泡细胞脱氧胆酸急性胆源性胰腺炎核转录因子
- 重症急性胰腺炎肺组织Ⅱ型分泌型磷脂酶A_2的表达及功能改变被引量：3
- 2012年
- [目的]探讨重症急性胰腺炎(SAP)时肺组织Ⅱ型分泌型磷脂酶A2(sPLA2-Ⅱ)的表达及功能改变。[方法]将SD大鼠随机分为假手术组(SO组,n=10)、模型组(SAP组,n=10)。SO组仅行剖腹术,翻动胰腺;SAP组用去氧胆酸钠胰管逆行注射建立SAP合并肺损伤模型。2组动物在术后24h测pH、PaO2、PaCO2、血淀粉酶、sPLA2-Ⅱ,肺湿/干比值。应用RT-PCR、western-blot观察肺组织sPLA2-Ⅱ表达,并观察胰、肺组织病理变化。[结果]SAP组血淀粉酶、sPLA2、肺湿/干比值显著高于SO组(P<0.05)。SAP组PaO2、pH显著低于SO组(P<0.05),PaCO2、sPLA2-Ⅱ显著高于SO组(P<0.05)。[结论]SAP时肺组织sPLA2-Ⅱ表达增高,可能是急性肺损伤的发病机制之一。
- 张雪梅陈海龙王朝晖
- 关键词：重症急性胰腺炎急性肺损伤
- 急性胰腺炎肺损伤大鼠肺组织肿瘤坏死因子受体-1与窖蛋白-1的表达及清胰汤的治疗作用被引量：6
- 2010年
- 目的 观察肿瘤坏死因子受体-1（TNFR-1）和窖蛋白-1（Cav-1）在急性胰腺炎肺损伤大鼠肺组织的表达及功能,探讨清胰汤的可能作用机制.方法 Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、地塞米松治疗组、清胰汤治疗组.经胰胆管逆行注射脱氧胆酸钠建立大鼠急性胰腺炎肺损伤模型.24 h后采血和肺组织,检测血清淀粉酶、肺湿/干重比值和肺组织病理切片判定损伤程度 放免法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平 逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot分别检测肺组织中TNFR-1和Cav-1的mRNA及蛋白表达.结果 模型组血清淀粉酶、肺湿/干重比值、血清TNF-α（4.82±0.14比2.96±0.30,P＜0.01）和肺组织病理损伤程度均明显升高 肺组织TNFR-1的mRNA表达上调（1.29±0.15比0.43±0.05,P＜0.01）,而Cav-1的mRNA表达则下调（1.14±0.10比2.00±0.10,P＜0.01） 脂筏内外表达的TNFR-1均升高,尤以脂筏内升高明显,而Cav-1则表达下降.与模型组比较,地塞米松和清胰汤组的血清淀粉酶、肺湿/干重比值、血清TNF-α（地塞米松组：3.79±0.11,清胰汤组：3.66±0.10,模型组：4.82±0.14,P＜0.01）和肺组织病理损伤程度均下降 肺组织TNFR-1的mRNA表达下降（地塞米松组：0.48±0.01,清胰汤组：0.49±0.02,模型组：1.29±0.15,P＜0.01）,而Cav-1的mRNA则表达升高（地塞米松组：1.66±0.06,清胰汤组：1.52±0.04,模型组：1.14±0.10,P＜0.01） 脂筏内外表达的TNFR-1均下降,而Cav-1则上升.结论 TNF-α/TNFR-1的表达增加和Cav-1表达的下降与急性胰腺炎肺损伤密切相关.地塞米松和清胰汤都能够明显降低TNFR-1的表达并上调Cav-1的表达,有效减轻肺损伤程度,这可能是清胰汤治疗急性胰腺炎肺损伤的作用机制之一.
- 王钢陈海龙唐颖任凤李洁姜妙娜
- 关键词：急性胰腺炎急性肺损伤CAVEOLIN-1
