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国家高技术研究发展计划(2012AA021904): 作品数：15 被引量：25H指数：3; 相关作者：李陶敬彭焱胡勇李策生邢延涛更多>>; 相关机构：武汉生物制品研究所有限责任公司四川大学国药集团武汉血液制品有限公司更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国际科技合作与交流专项项目四川省科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

人凝血酶原复合物的临床前药物安全性评价被引量：1: 2022年; 目的评价人凝血酶原复合物(human prothrombin complex,简称PCC)制品的临床前药物安全性。方法采用体外试管法进行兔红细胞体外溶血试验;采用同体自身对照法进行兔血管刺激性试验;按照《中国药典》三部(2010版)方法对PCC进行异常毒性试验、人凝血酶活性检查、肝素含量、活化的人凝血因子活性检查及磷酸三丁酯和聚山梨酯80残留量检测。结果体外溶血试验未观察到兔红细胞溶血,也未见红细胞聚集;人凝血酶原复合物静脉输注给予新西兰兔,给药局部未见与供试品相关的刺激性反应;小鼠和豚鼠经腹腔注射本品30 min后均无异常反应,观察期结束时,小鼠体重平均增加>50%,豚鼠体重平均增加>10%;肉眼观察供试品无凝块或纤维蛋白原析出;肝素含量和活化的人凝血因子活性检查均符合质量要求;聚山梨酯80残留量≤100μg/mL,磷酸三丁酯残留量≤10μg/mL。结论成都蓉生药业有限责任公司生产的PCC是安全的,可用于临床。; 余伟牟蕾吴佳君鲁涛黄琰洪树青王黔川李伟; 关键词：异常毒性聚山梨酯80 磷酸三丁酯

人纤溶酶活性动态显色检测方法的建立及验证被引量：3: 2017年; 目的建立人纤溶酶(plasmin,Plm)活性的动态显色检测方法,并进行验证。方法用微量滴定板作为载体,将不同活性浓度的Plm(1.0、0.5、0.25、0.125、0.062 5、0.031 25 IU/ml)分别与不同浓度的发色底物S-2251(2.0、1.0、0.66、0.33 mg/ml)混匀,连续监测10 min,测定反应体系吸光值变化率(ΔA/min),确定方法的反应参数。同时对方法的选择性、线性范围、定量下限、准确度、精密性、特异性及稳定性进行验证。采用建立的方法检测Plm纯化样品。结果确定定量上限为0.6 IU/ml,底物浓度为0.66 mg/ml;监测5 min时校正标样及质控样品回收率为92.0%~111.8%,定量下限样品回收率为96.5%~118.0%。注射用水、稀释液、尿激酶(Urokinase,UK)、6-氨基己酸(6-Aminocaproic acid,EACA)、人纤溶酶原(plasminogen,Plg)等组分的响应低于定量下限响应的8.22%,并低于内标响应的0.86%,表明该方法具有良好的选择性;线性范围为0.05~0.6 IU/ml,校正标样回收率在96.8%~111.2%之间,R2≥0.99;定量下限为0.05 IU/ml,定量下限处准确度在115.2%~116.2%之间,CV≤5.0%;高、中、低浓度质控样品检测结果准确度在102.3%~111.8%之间;批内CV值≤7.7%,批间CV值≤5.2%;0.5μg/ml UK对Plm活性检测无影响,EACA浓度在0.05~0.2 mol/L之间及Plg浓度低于0.3 mg/ml时对Plm活性检测结果无影响;Plm质控样品复溶后在室温及2~8℃放置1 h不影响检测结果。Plm纯化样品活性回收率为91.84%。结论本方法具有良好的准确度、精密度、特异性及稳定性,可用于工艺样品中Plm活性的检测。; 岳胜兰周志军彭焱林连珍李陶敬邢延涛汪菲菲李策生胡勇; 关键词：酶活性

人巨细胞病毒培养条件的优化及快速病毒滴度检测方法的建立: 2015年; 目的优化人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)的培养条件,并建立一种快速检测HCMV滴度的方法。方法以人胚肺二倍体细胞(MRC-5)为病毒传代和滴度测定用细胞,对病毒接种量、培养温度、保护剂种类等条件进行优化。将本实验室建立的快速微量中和试验-感染细胞核染色法用于病毒滴度检测,并与蚀斑形成法及微量细胞病变法进行比较,采用Behrens-Karher法计算病毒滴度。结果 HCMV接种MRC-5细胞后在37℃培养可出现明显病变;MOI为1.0时,病毒滴度基本达到平台;病毒收获时加入1%人血白蛋白或10%FBS保护剂可维持病毒滴度稳定。同一病毒液经蚀斑形成法检测病毒滴度为5.707 lg PFU/ml,微量细胞病变法和感染细胞核染色法检测病毒滴度分别为5.633和5.667 lg CCID50/ml,3种方法的检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论HCMV接种MRC-5的最佳培养条件为:病毒接种量1.0 MOI,在37℃培养,加入1%人血白蛋白或10%FBS作为保护剂。建立的感染细胞核染色法可用于HCMV滴度的快速测定,为抗病毒物质的开发及效果评价提供了一种新的技术手段。; 秦婷婷刘波刘瑞熙杨硕李小姣吕家成杨春; 关键词：人巨细胞病毒细胞病变

人凝血因子Ⅷ制品配方研究: 2015年; 目的摸索一种适用于人凝血因子Ⅷ制品的配方。方法以人凝血因子Ⅷ质量为指标,进行成分筛选实验,对选定的成分再进行剂量选择,获得最终配方、制备成品。进行质量与安全性、稳定性考察,评估最终配方的效果。结果得到的配方效果令人满意,经稳定性（2-8℃、24个月;25℃、24个月;40℃、6个月）考察证明配方稳定有效。结论研发出一种适合人凝血因子Ⅷ制品的配方。; 王黔川牟蕾鲁涛余伟李伟吴传芳

血管性血友病因子抗原含量ELISA检测方法的建立、验证及应用被引量：4: 2017年; 目的建立检测人血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。方法用配对的VWF抗体进行棋盘滴定来确定最佳捕获抗体和检测抗体浓度,建立检测人VWF抗原含量的双抗体夹心ELISA方法;用VWF国际标准品(NIBSC07/316)标定内控标准品(无FⅧ的VWF),确定VWF∶Ag的国际单位(Ag/ml)与质量单位(μg/ml)的关系;对建立的方法进行线性、准确度、精密度、样品稳定性验证;将验证后的该方法用于FⅧ纯化工艺的监控及产品质量分析。结果捕获抗体和检测抗体稀释度均为1∶200;VWF∶Ag的1 Ag/ml对应16μg/ml;标准曲线的线性范围为160~10 ng/ml,各浓度回收率在95.8%~103.2%之间,变异系数(CV)<5%,R2≥0.99;不同浓度样品检测结果的批内回收率在93.0%~113.9%之间,批间回收率在95.1%~105.5%之间;批内CV在0.7%~8.2%之间,批间CV在3.8%~9.6%之间;样品添加试验的回收率在96.9%~114.7%之间。具有生物学活性的样品应-80℃冻存,复融1次后立即检测;国药集团武汉血液制品有限公司FⅧ纯化工艺中PEG沉淀和离子交换层析去除了95%以上的VWF,工艺稳定性较好,成品具有与血浆接近的FⅧ∶Ag/VWF∶Ag比值。结论建立的人VWF抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法具有良好的线性、准确度和精密度。用该方法进行VWF的抗原含量检测可作为FⅧ纯化工艺内部质量控制的一个指标。; 周志军林连珍彭焱李陶敬李策生胡勇; 关键词：血管性血友病因子抗原含量酶联免疫吸附测定

荧光定量RT-PCR检测脑心肌炎病毒方法的建立及初步应用被引量：2: 2015年; 根据GenBank中公布的脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus EMCV)3D基因保守区段设计并合成1对引物,以提取的EMCV核酸为模板,分别进行荧光定量RT-PCR扩增,优化反应体系及条件,建立脑心肌炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法,并初步运用于静注人免疫球蛋白(IVIG)纳米膜过滤工艺去除EMCV效果的验证.结果显示该方法实验内和实验间的精密度均小于5%,最低检测限为102copies/μL;纳米膜过滤工艺可使样品中的EMCV滴度下降4Logs.; 袁源许锬郑朝共容新宗黄琰苗松张雪梅; 关键词：脑心肌炎病毒

全层析工艺制备10%静注人免疫球蛋白及检测分析被引量：4: 2017年; 目的试验研究全层析法结合超滤透析等步骤,并辅以3步病毒灭活/去除工艺制备10%静注人免疫球蛋白的可行性。方法运用全层析工艺纯化制备10%IVIG,计算工艺回收率,并参照《中华人民共和国药典》及《欧洲药典》8.0静注人免疫球蛋白质量标准对其关键指标进行了检测;用散射比浊法对终产品Ig A、Ig M杂质蛋白及Ig G亚类等指标进行检测分析。结果 Ig G总回收率平均值为60.86%,变异系数为0.7%表明工艺具有良好的重复性;纯度、分子大小分布等关键指标到达《中华人民共和国药典》及《欧洲药典》8.0要求;杂质蛋白Ig A、Ig M含量较低,Ig A<2.87 mg/L、Ig M<0.15 mg/L;4个亚类构成比(%)分别为55.1±2.5、35.8±2.3、5.39±0.93和3.66±0.16。结论本公司全层析工艺能高效制备满足国际标准的10%IVIG产品。; 邢延涛李策生胡勇李陶敬周志军彭焱林连珍陈克金邓志军李娟詹骞岳胜兰

pH值、辛酸钠浓度和灭活时间对病毒灭活效果的影响: 2015年; 目的探讨p H值、辛酸钠浓度和灭活时间对辛酸钠用于人免疫球蛋白制品中加入的脂包膜指示病毒灭活效果的影响。方法向不同p H值和不同辛酸钠浓度的人免疫球蛋白制品中加入指示病毒伪狂犬病毒（pseudorabies virus,PRV）,于30℃水浴条件下作用不同时间后,采用细胞病变法测定残余病毒滴度,对不出现病变的细胞盲传3代。探讨p H值、辛酸钠浓度和灭活时间对辛酸钠灭活PRV效果的影响。结果在酸性p H值（4.6±0.2）条件下,当辛酸钠浓度在7-13 mmol/L时,均能在5 min以内灭活PRV≥7.00 Lg TCID50/0.1 ml。在中性p H值（7.4±0.2）条件下,13 mmol/L辛酸钠能瞬时灭活PRV≥7.00 Lg TCID50/0.1 ml,而7、9和11 mmol/L浓度的辛酸钠能灭活PRV 2.8、0.43和3.2 Lg TCID50/0.1 ml,均不能瞬时完全灭活病毒,但继续灭活至5 min,可灭活PRV≥7.00 Lg TCID50/0.1 ml。灭活后不出现病变的细胞盲传3代未出现细胞病变。结论辛酸钠可有效灭活加入人免疫球蛋白制品中的脂包膜指示病毒PRV;且酸性p H值条件下,辛酸钠的灭活效果优于p H值中性条件;辛酸钠对指示病毒的作用是灭活而非抑制。; 邹莉李陶敬彭焱邢延涛; 关键词：辛酸钠 PH值伪狂犬病病毒人免疫球蛋白

不同配方的冻干保护剂对人凝血因子Ⅷ制品干热法灭活猪细小病毒效果的影响被引量：2: 2013年; 目的研究不同配方的冻干保护剂对人凝血因子Ⅷ制品干热法灭活非脂包膜指示病毒猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)效果的影响。方法取人凝血因子Ⅷ原液,分别加入A、B、C 3种配方(氯化钠浓度为C6 LgTCID50/ml的指示病毒PPV,进行冻干、干热法灭活(100℃30 min),检测残余PPV滴度;用筛选出的最佳配方制备3批人凝血因子Ⅷ半成品,进行冻干和干热法灭活,检测残余PPV滴度,验证PPV灭活效果;按照《中国药典》三部(2010版)人凝血因子Ⅷ的成品检测要求对人凝血因子Ⅷ效价、外观、水分、复溶时间和复溶后外观进行检测。结果在100℃30 min条件下,可有效灭活配方A制备的人凝血因子Ⅷ半成品中的指示病毒PPV,确定配方A为最佳冻干保护剂配方;3批凝血因子Ⅷ经干热灭活后,可使残余PPV滴度下降(4.08±0.02)LgTCID50/0.1 ml,且灭活过程对人凝血因子Ⅷ的生物学活性无明显影响,步骤活性回收率为(91.1±2)%。结论已成功研制出1种冻干保护剂配方,应用干热灭活法对人凝血因子Ⅷ制品中非脂包膜病毒PPV具有较好的灭活效果,该方法与有机溶剂/表面活性剂(solvent/detergent,S/D)法联合去除/灭活病毒,可有效提高人凝血因子Ⅷ产品的安全性。; 李策生邹莉李陶敬胡勇邢延涛彭焱周雁翔李娟; 关键词：冷冻干燥猪细小病毒灭活

人凝血因子Ⅷ的溶血性和血管刺激性研究: 2015年; 目的评估人凝血因子Ⅷ（human coagulation factorⅧ,hFⅧ）的溶血性和血管刺激性.方法以家兔为实验动物,对hFⅧ进行体外溶血和体内血管刺激性实验.结果在3h体外实验期间未观察到兔红细胞发生溶血和凝聚.当以40 IU/kg剂量的hFⅧ对家兔进行静脉注射时,未观察到家兔耳缘静脉的血管刺激性反应.结论静脉注射推荐剂量的hFⅧ不会发生溶血和血管刺激反应.; 李伟牟蕾鲁涛王黔川余伟; 关键词：溶血血管刺激性

国家高技术研究发展计划(2012AA021904)

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