辽宁省教育厅高校重点实验室项目(LS2010101)
- 作品数：17 被引量：32H指数：3
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- 9-顺式维甲酸对甲状腺鳞癌SW579细胞周期及CYCLIND1、CDK4表达的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨9-顺式维甲酸(9-cisRA)对甲状腺鳞癌细胞系SW579细胞周期及周期因子表达的影响。方法分别以不同浓度的9-cisRA处理SW579细胞系,采用MTT比色法测定细胞增殖活性;用流式细胞仪检测细胞周期;用RT-PCR方法检测SW579细胞CDK4、CYCLIND1 mRNA的表达水平;用Western blot法检测SW579细胞CDK4、CYCLIND1的蛋白表达。结果 9-cisRA作用后,各组细胞均出现显著的生长抑制作用,生长抑制率明显升高,并呈剂量依赖性。流式细胞仪分析,各组细胞均随着药物浓度的升高,S期细胞在细胞周期中所占比例逐渐减少,G1期细胞则明显增加(P<0.01),细胞滞留在G1期。经不同浓度9-cisRA处理的细胞CDK4 mRNA和蛋白表达水平没有明显变化;CYCLIND1的mRNA和蛋白表达水平明显下调(P<0.01)。结论 9-cisRA显著抑制SW579细胞生长,可能与抑制CYCLIND1的表达并将细胞阻滞于G1期有关。
- 张秀梅刘超闫纪亮赵颂王翠瑶肖建英
- 关键词：9-顺式维甲酸SW579细胞周期CYCLIND1
- 3-溴丙酮酸对肠癌HCT116细胞的增殖抑制作用及其机制被引量：2
- 2013年
- 目的:研究3-溴丙酮酸(3-BP)对肠癌细胞HCT116增殖的抑制作用并初步探讨其抑制作用的机制,为3-BP的临床应用提供依据。方法:将体外培养的HCT116细胞分为对照组和不同浓度3-BP组(3-BP的终浓度分别为25、50、75和100mg.L-1)。采用Western blotting法检测己糖激酶Ⅱ(HKⅡ)蛋白表达水平;采用6-磷酸葡萄糖(G-6-P)检测试剂盒检测培养液中G-6-P的浓度;采用MTT比色法测定细胞增殖活性;采用流式细胞术检测细胞周期。结果:与对照组比较,25mg.L-1 3-BP组HKⅡ蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),与对照组和25mg.L-1 3-BP组比较,50、75和100 mg.L-1 3-BP组HKⅡ蛋白表达水平均显著下调(P<0.01)。与对照组比较,25 mg.L-1 3-BP组培养液中G-6-P浓度无明显变化(P>0.05);与对照组和25mg.L-1 3-BP组比较,50、75和100mg.L-1 3-BP组培养液中G-6-P的浓度均显著下降(P<0.01)。MTT法,与对照组比较,25mg.L-1 3-BP组细胞存活率无明显变化(P>0.05);与对照组和25mg.L-1 3-BP组比较,50、75和100mg.L-1 3-BP组细胞存活率明显降低(P<0.05)。流式细胞术,与对照组比较,25mg.L-13-BP组G1和S期细胞所占比例无明显变化(P>0.05);与对照组和25 mg.L-1 3-BP组比较,50、75和100mg.L-1 3-BP组S期细胞所占比例逐渐减少(P<0.05),G1期细胞则明显增加(P<0.01),细胞滞留在G1期。结论:3-BP可显著抑制HCT116细胞增殖,其机制可能与3-BP抑制HKⅡ活性、减少细胞对葡萄糖的利用有关。
- 张秀梅张霞肖建英
- 关键词：HCT116
- 干扰CDK4和CyclinD1的表达抑制MCF-7细胞的增殖被引量：7
- 2013年
- 目前研究表明，CyclinD1、CDK4参与细胞周期G1/S期的转换，在多种恶性肿瘤中存在CyclinD1、CDK4表达增加，并且CyclinD1、CDK4的表达水平与肿瘤的恶性程度成正相关。
- 张秀梅张霞肖建英
- 关键词：CYCLIND1CDK4MCF-7细胞G1S期
- 蛋白激酶CK2α在人甲状腺鳞癌细胞SW579中的表达和活性
- 2013年
- 目的研究蛋白激酶CK2α在人甲状腺鳞癌细胞SW579中的表达和活性，探讨其与甲状腺癌细胞之间的关系。方法体外培养SW579和Hacat细胞，应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblotting技术分别检测蛋白激酶CK2α mRNA和蛋白在SW579细胞和Hacat细胞中的表达；应用放射自显影法检测细胞内蛋白激酶CK2的活性。结果蛋白激酶CK2α mRNA和蛋白在SW579细胞中高表达，在Hacat细胞中低表达（mRNA：0．92±0．01vs0．52±0．02，t=19．24，P〈0．01；蛋白：0．98±0．01vs0．37±0．02，t=24．14，P〈0．01）；SW579细胞中CK2的活性高于Hacat细胞（4911±151．30vs1999±87．90，t=16．64，P〈0．01）。结论蛋白激酶CK2α过表达可能与甲状腺癌的发生和发展有关。
- 谷迪西刘超刘洋肖建英
- 关键词：蛋白激酶类病理学鳞状细胞病理学
- 靶向CK2α基因的siRNA对结肠癌HCT116细胞生长抑制作用及其机制被引量：4
- 2014年
- 目的:探讨RNA干扰酪蛋白激酶2(CK2α)基因表达后对HCT116细胞生长的抑制作用并阐明其作用机制。方法:针对CK2α的mRNA序列设计CK2α-siRNA序列,将体外培养的HCT116细胞分为正常对照组(未转染)、阴性对照组(转染siRNA)和CK2α-siRNA组(转染CK2α-siRNA),应用Lipofectamine 2000进行转染,利用Western blotting法检测CK2α、cyclin H、P53和P21蛋白表达水平;应用MTT法检测各组HCT116细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞周期时相的分布。结果:与阴性对照组比较,CK2α-siRNA组CK2α和细胞周期蛋白cyclin H的表达水平明显降低(P<0.01),P53蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),P21蛋白表达水平则明显升高(P<0.01);MTT检测,与阴性对照组比较,转染48和72h,CK2α-siRNA组细胞存活率明显降低(P<0.01);流式细胞术分析,与阴性对照组比较,CK2α-siRNA组S期细胞所占比例逐渐减少(P<0.01),G1期细胞则明显增加(P<0.01),细胞滞留在G1期。结论:RNA干扰CK2α表达能够抑制HCT116细胞增殖,发生G1期阻滞;其机制可能与RNA干扰CK2α表达后cyclin H表达下调及P53活性恢复有关。
- 张霞张秀梅肖建英
- 关键词：结肠肿瘤HCT116细胞
- RNA干扰Glut1表达对MCF-7细胞增殖的影响被引量：1
- 2014年
- 葡萄糖转运蛋白（glucose transporter proteinl，Glutl）是哺乳动物转运葡萄糖跨过细胞膜进入细胞最重要的载体[1]。许多研究证实不同来源的恶性肿瘤Glutl表达水平升高。目前研究表明：Glutl可能与恶性肿瘤的发生发展有关。本研究探讨RNA干扰Glutl表达对MCF-7细胞生长增殖的抑制作用，探索肿瘤基因治疗的新途径。
- 张秀梅张霞肖建英
- 关键词：MCF-7细胞增殖RNA干扰葡萄糖转运蛋白进入细胞生长增殖
- 蛋白激酶CK2β小干扰RNA促进小鼠受精卵早期发育被引量：1
- 2012年
- 目的:利用特异性小发夹RNA(siRNA)寡核苷酸片段,研究蛋白激酶CK2调节亚基CK2β对小鼠受精卵早期发育的影响,阐明调控小鼠受精卵早期发育的机制。方法:超排卵获得小鼠1-细胞期受精卵,分别显微注射TE缓冲液、scramble siRNA和CK2βsiRNA,收集卵细胞后用RT-PCR和Western blotting方法检测CK2βsiRNA的干涉效能;相差显微镜观察受精卵的形态变化、计数卵裂率;放射自显影测定M期促进因子(MPF)活性。结果:与TE缓冲液和scramble siRNA组比较,CK2βsiRNA组CK2β的mRNA水平和蛋白表达显著降低(P<0.01),MPF的活性明显升高(P<0.01),在人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射后28.5h达到高峰;受精卵第一次有丝分裂加速,CK2βsiRNA组在hCG注射后28.5h大多数受精卵已经分裂为2-细胞期胚胎;hCG注射后32.0h卵裂率为89.5%,与TE缓冲液和scramble siRNA组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:CK2βsiRNA通过提前激活MPF活性,进而促进小鼠1-细胞期受精卵的发育。
- 刘超任丽莉刘洋肖建英
- 关键词：SIRNA小鼠受精卵
- PKB/CDC25B信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖的调控作用
- 2011年
- 目的探讨PKB/Cdc25B信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖的调控作用。方法体外培养甲状腺鳞癌SW579细胞,实验分为对照组、Wortmannin组和DMSO组,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;用western blot方法检测PKB、CDC25B蛋白表达和PKB-pS473、CDC25B-pS353及CDC2-pTyr15的磷酸化状态;用ELISA方法检测MPF活性。结果与对照组相比,DMSO组细胞形态无明显变化,各项检测指标无明显差异(P>0.05);Wortmannin组细胞形态回缩,PKB和CDC25B蛋白表达明显下降(P<0.01),PKB-pS473和CDC25B-pS353的磷酸化水平显著下调(P<0.01),而CDC2-pTyr15的磷酸化水平显著上调(P<0.01),MPF活性明显下降(P<0.01)。结论甲状腺鳞癌SW579细胞内源性PKB可以通过调控CDC25B对MPF活性及细胞增殖产生影响。
- 闫纪亮肖建英赵颂高月王翠瑶张秀梅刘超
- 关键词：甲状腺鳞癌PKBCDC25BMPF
- 四溴苯三唑对甲状腺鳞癌SW579细胞凋亡的影响被引量：3
- 2013年
- 目的观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖和凋亡的影响。方法将甲状腺鳞癌细胞株SW579分为对照组和实验组。实验组细胞均在培养24 h后加药,加入不同浓度的TBB,使其终浓度分别为12.5、25、50、75、100μmol/L。培养到一定时间后,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测培养细胞的增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达。结果低浓度TBB组(12.5、25、50μmol/L)肿瘤细胞有向良性细胞形态转化的趋势;高浓度组(75、100μmol/L)细胞生长密度较对照组明显降低,与低浓度组相比,向成熟分化的趋势不明显。MTT结果显示,实验组细胞均出现显著的生长抑制作用,且呈剂量依赖性。实验组随着TBB药物浓度的升高,S期细胞在细胞周期中所占比例逐渐减少,G1期细胞则明显增加,细胞滞留在G1期。RT-PCR方法检测发现实验组细胞凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达水平上调。结论 TBB可抑制甲状腺鳞癌SW579细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性;其机制可能与上调Caspase-3基因表达,激活Caspase途径有关。
- 刘超刘洋赵颂王翠瑶肖建英
- 关键词：甲状腺鳞癌细胞凋亡CASPASE-3
- 曲古抑菌素A对甲状腺鳞癌SW579细胞株p53和p21表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察曲古抑菌素A(TSA)对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖及p53和p21表达的影响,进而探讨TSA抗甲状腺癌的作用机制。方法体外培养SW579细胞,实验分为DMSO组、TSA组(终浓度为50、100、200、400 nmol/L),采用MTT比色法测定细胞增殖活性;用RT-PCR方法检测SW579细胞p53及p21的mRNA表达;用Western blot方法检测SW579细胞p53及p21的蛋白表达。结果 MTT结果显示,TSA可明显抑制SW579的增殖,并呈剂量依赖性。RT-PCR与Western blot检测结果表明,与未加TSA组比较,TSA组随着浓度的逐渐加大,p21 mRNA和蛋白表达水平明显升高;p53 mRNA表达不变,而p53蛋白表达水平上调。结论 TSA在一定浓度范围内对甲状腺鳞癌细胞株SW579有剂量依赖性地增殖抑制作用,其机制可能与TSA提高SW579细胞p53的表达,进而再上调p21的表达有关。
- 刘超赵颂张秀梅王翠瑶刘洋肖建英
- 关键词：曲古抑菌素AP53P21SW579
