国家自然科学基金(30572402)
- 作品数：8 被引量：35H指数：5
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- 相关机构：福建中医学院福建省泉州市第一医院福建中医药大学更多>>
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- 健骨颗粒含药血清培养成骨细胞整合素/黏着斑激酶信号通路相关因子的表达被引量：9
- 2010年
- 背景:目前有关成骨细胞整合素的功能状态及整合素信号转导调控的研究较少。健骨颗粒对成骨细胞整合素表达水平及信号转导通路调控的作用未被阐明。目的:观察健骨颗粒含药血清对成骨细胞黏附的影响,揭示健骨颗粒对成骨细胞整合素表达水平及信号转导通路的调控作用。方法:健康雄性3月龄SD大鼠用于制备健骨颗粒含药血清,选取最佳剂量的含药血清干预第3代大鼠成骨细胞,ELISA法检测培养液中纤连蛋白、Ⅰ型胶原、玻连蛋白的水平,Western blot法检测成骨细胞黏着斑激酶的磷酸化情况,实时荧光定量PCR法检测成骨细胞纤连蛋白、Ⅰ型胶原、玻连蛋白、黏着斑激酶mRNA的表达。结果与结论:浓度为20%的健骨颗粒含药血清能明显增强体外培养成骨细胞的增殖活力。随着含药血清干预时间的延长,成骨细胞表达及分泌的纤连蛋白、Ⅰ型胶原、玻连蛋白、黏着斑激酶mRNA及蛋白水平逐渐上升,黏着斑激酶的磷酸化水平也逐渐增高(P<0.05);均明显高于同期的生理盐水血清干预水平(P<0.05或P<0.01)。说明健骨颗粒能作用于成骨细胞整合素激活的粘着斑激酶转导通路各相关因子,使成骨细胞进入"分泌增加→黏附增加→功能增强、分裂增殖→分泌增加"的良性循环,对成骨细胞的成骨效应起正性调节作用。
- 林煜卢天祥吴银生黄云梅林燕萍
- 关键词：健骨颗粒成骨细胞整合素粘着斑激酶
- 健骨颗粒含药血清对肿瘤坏死因子α诱导大鼠成骨细胞凋亡的影响被引量：3
- 2009年
- 背景:成骨细胞数量减少或凋亡进程加速,使骨形成少于骨吸收可导致骨质疏松的发生。肿瘤坏死因子α在去势大鼠或绝经后骨质疏松患者骨组织中呈高表达,在体外可刺激成骨细胞凋亡。健骨颗粒可降低骨质疏松模型鼠血清肿瘤坏死因子α水平。目的:验证健骨颗粒含药血清对肿瘤坏死因子α诱导的鼠成骨细胞凋亡的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2004-07/2006-12在福建中医学院骨伤系分子生物学实验室完成。材料:3月龄SD雌性大鼠40只用于制备含药血清,24hSD乳鼠5只用于培养成骨细胞。健骨颗粒由煅狗骨、淫羊藿、山茱萸、党参等药味组成,原药材由福建省药材公司提供,福建中医药研究院中试车间加工制备,每克颗粒含原生药2.9g。方法:用酶消化法培养成骨细胞。随机将40只SD大鼠分为高、中、低剂量含药血清组和生理盐水对照组,每组10只,分别将健骨颗粒按4,2,1g/(kg·d)的药量灌服,对照组每天灌服2mL生理盐水。连续给药7d后腹主动脉取血得到健骨颗粒含药血清,将含药血清作用于成骨细胞48h后,再用肿瘤坏死因子α诱导24h。运用TUNEL技术、流式细胞术、免疫细胞化学结合图像分析方法,检测成骨细胞凋亡情况。主要观察指标:①成骨细胞凋亡指数。②成骨细胞凋亡峰。③成骨细胞Bcl-2、Bax表达。结果:用肿瘤坏死因子α诱导的各组成骨细胞均出现凋亡现象,其中中、高剂量含药血清组的细胞凋亡指数和凋亡率明显低于其他组,而Bcl-2/Bax灰度比值却较其他组高(P<0.05),Bcl-2/Bax灰度比值与凋亡指数呈负相关(r=-0.757,P<0.01)。结论:健骨颗粒对肿瘤坏死因子α诱导的成骨细胞凋亡有一定的保护作用,可能通过提高Bcl-2的表达来实现。
- 李异龙吴银生林燕萍
- 关键词：成骨细胞
- 去卵巢骨质疏松大鼠成骨细胞G_1期调节蛋白的改变被引量：8
- 2010年
- 背景:G1期调节蛋白对调控增殖细胞的增殖周期具有重要作用,目前关于成骨细胞G1期调节蛋白的研究甚少,绝经后骨质疏松与成骨细胞G1期调节蛋白的关系更未被阐明。目的:观察去卵巢大鼠骨质疏松发病过程中成骨细胞G1期调节蛋白的改变,探讨绝经后骨质疏松症的发病机制。方法:100只6月龄SD雌性大鼠,随机分成假手术组和模型组各50只,模型组进行双侧卵巢结扎切除术,假手术组除未行卵巢结扎切除外,其余步骤与手术组相同。所有大鼠于术后4,8,12,18,24周分批取材,每批每组各处死10只,取大鼠腰椎。运用免疫组织化学方法检测骨组织中成骨细胞G1期调节蛋白CyclinD1、CDK4、p21蛋白表达。结果与结论:CyclinD1、CDK4蛋白阳性表达主要定位于骨小梁表面的成骨细胞。假手术组有CyclinD1、CDK4蛋白阳性表达,模型组表达强于假手术组。p21蛋白阳性表达部位与CyclinD1相似,假手术组和模型组均有明显阳性表达,但模型组的表达维持在较高水平,在各时期均明显高于同期假手术组(P<0.01)。结果证实,去卵巢骨质疏松模型大鼠发病过程中,成骨细胞CyclinD1、CDK4、p21蛋白出现明显高表达。提示成骨细胞增殖加快,同时成骨细胞周期受阻滞亦增多,成骨细胞数量相对不足,骨形成低于骨吸收,导致骨质疏松的发生。
- 吴银生林燕萍卢天祥林煜黄云梅黄美雅
- 关键词：细胞周期蛋白D1癌基因蛋白质P21骨组织工程
- 健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模型鼠整合素信号转导通路的影响被引量：5
- 2009年
- 目的从分子水平探讨健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模型鼠整合素传导通路的影响。方法切除大鼠卵巢建立骨质疏松模型,药物干预,运用荧光定量PCR检测模型鼠骨组织中Ⅰ型胶原、整合素β1(Itgβ1)和粘着斑激酶(FAK)mRNA表达。结果切除卵巢后12周,大鼠骨密度明显降低,模型成立。Ⅰ型胶原、整合素β1和FAK mRNA表达均明显下降。经过健骨颗粒治疗后12周,骨密度虽然未能达到正常,但与生理盐水组对比明显回升;Ⅰ型胶原、Itgβ1和FAK的mRNA表达则显著增加。结论健骨颗粒可通过整合素信号转导通路作用于成骨细胞,提高成骨细胞的功能活性,从而改善骨质量,控制骨密度的继续下降。
- 卢天祥杨华吴银生林煜黄云梅林燕萍
- 关键词：健骨颗粒整合素Β1粘着斑激酶
- 去卵巢骨质疏松模鼠DPD及1,25-(OH)_2D_3与骨质量的相关性研究被引量：8
- 2008年
- 目的:探讨雌性SD大鼠切除卵巢后机体尿DPD及血1,25(OH)2D3变化与骨质量的相关性。方法:40只雌性SD大鼠随机分为卵巢切除组(OVX组)和假手术组(Sham组),分别于术后12、24周取材。运用双能X线骨密度仪测L1、股骨、股骨颈骨密度,ELISA法测尿DPD浓度,激素放免法测血1,25(OH)2D3浓度,光测弹性仪测L1压缩强度极限、弹性模量及右侧股骨弯曲破坏载荷,不脱钙骨切片技术观察胫骨上段骨组织形态结构并计量分析,对实验数据进行相关性分析。结果:术后OVX组除尿DPD/Cr明显升高外,其他检测指标均较Sham组低,且随术后时间推移持续下降,差异有统计学意义。相关分析显示:尿DPD/Cr与腰椎、股骨密度、椎体压缩强度极限、股骨弯曲破坏荷载和骨小梁面积均呈负相关。血清1,25(OH)2D3水平与腰椎、股骨、股骨颈密度、骨小梁面积、椎体压缩强度极限和股骨弯曲破坏荷载呈正相关。结论:大鼠卵巢切除后尿DPD、血1,25(OH)2D3水平变化与骨质量显著相关,可以通过检测尿DPD、血1,25(OH)2D3水平变化预测骨质量。
- 林燕萍郭世明吴银生林煜卢天祥黄美雅黄云梅
- 关键词：骨质疏松脱氧吡啶酚骨化三醇骨质量
- 健骨颗粒对大鼠成骨细胞OCN、Cbfa1的影响被引量：3
- 2008年
- 骨质疏松症主要是由于骨形成、骨吸收偶联的破坏，使骨形成减少．骨量降低所导致。成骨细胞是骨形成的关键细胞，而成骨细胞的分化成熟、功能活性与骨形成密切相关。前期在体、体外实验表明．补肾健脾中药健骨颗粒能明显增强成骨细胞的功能活动。为进一步探讨健骨颗粒的作用机制，我们在前期研究的基础上，从成骨细胞分化的角度切入。旨在观察健骨颗粒对成骨分化的敏感指标骨钙素（osteocalcin，OCN）、核心结合因子（core binding factor apha 1，Cbfa 1）的影响，探讨健骨颗粒对成骨细胞的分化作用，以揭示健骨颗粒有效防治骨质疏松症的作用机制。
- 林煜林燕萍卢天祥吴银生
- 关键词：健骨颗粒成骨细胞骨钙素核心结合因子
- 健骨颗粒含药血清对大鼠成骨细胞G_1期调节蛋白的影响被引量：7
- 2010年
- 目的探讨健骨颗粒含药血清对成骨细胞G_1期调节蛋白的影响。方法采用酶消化法培养SD大鼠成骨细胞,健骨颗粒含药血清干预,以生理盐水大鼠血清为对照,运用流式细胞术检测成骨细胞增殖周期,免疫细胞化学法、RT-PCR法检测成骨细胞G_1期调节蛋白细胞周期蛋白(Cyclin)D1、CDK4、P21表达。结果 20%健骨颗粒含药血清能推进成骨细胞增殖周期进程,促进其增殖;成骨细胞核中存在Cyclin D1、CDK4、P21等蛋白表达;与生理盐水血清比较,健骨颗粒含药血清干预24、48、72 h均能提高成骨细胞CyclinD1、CDK4蛋白及mRNA表达(P<0.05或P<0.01),而降低P21表达(P<0.05,P<0.01)。结论健骨颗粒含药血清能从mRNA及蛋白层面上提高体外培养成骨细胞Cyclin D1、CDK4表达,抑制负性调节因子p21的表达,调节G_1期调节蛋白,促进成骨细胞增殖。
- 吴银生林燕萍卢天祥林煜黄云梅黄美雅
- 关键词：成骨细胞细胞周期蛋白D1健骨颗粒
- 健骨颗粒含药血清对成骨细胞增殖的影响被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨健骨颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响。方法:采用酶消化法培养SD大鼠成骨细胞,健骨颗粒含药血清干预,以生理盐水大鼠血清为对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布。结果:与同浓度生理盐水血清相比,20%健骨颗粒含药血清能明显促进体外培养成骨细胞增殖(P<0.05),明显降低G0/G1期细胞分数(P<0.01或P<0.05),提高S期、G2/M期细胞分数和增殖指数(P<0.01或P<0.05)。结论:健骨颗粒含药血清能推进体外培养成骨细胞细胞周期,从而促进成骨细胞增殖。
- 吴银生黄云梅黄美雅陈旭征林煜林燕萍
- 关键词：成骨细胞细胞增殖血清学试验中药疗法
