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三种冷冻方法对猪MⅡ期卵母细胞线粒体分布和损伤的影响: (目的)本研究的目的旨在探讨三种冷冻方法对猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻后线粒体的分布和超微结构变化的影响。（方法）通过透射电镜、Rhodamine-123（R-123）荧光染色和体外发育观察,（结果）结果显示,（1）无论...; 戴建军吴彩凤张廷宇张树山徐利张德福; 关键词：玻璃化线粒体; 文献传递

纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物对猪精子介导基因转移效率的影响被引量：3: 2013年; 为优化猪精子介导的基因转移(SMGT)技术,提高转基因效率,本试验利用纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物(PAMAM-D)为载体介导猪精子转染外源DNA,经原位杂交检测其阳性率,体外受精(IVF)分析外源基因的表达。结果显示,0.5μg线状质粒DNA中加入PAMAM-D(质量比20∶1)阳性率最高(P<0.05);孵育时间为90、120min时,阳性率显著高于30、60min组(19.94%、18.57%与8.50%、13.87%;P<0.05);以此条件处理精子,阳性率显著高于无载体和脂质体处理组(23.93%与7.25%、13.25%;P<0.05)。各处理精子经IVF后,PAMAM-D组EGFP表达率显著高于其他2组(9.19%与4.81%、3.43%;P<0.05),各组绿色荧光胚胎经基因组PCR分析均能检测到EGFP基因。结果表明,PAMAM-D可有效介导猪精子转染外源DNA,并通过体外受精将外源基因导入胚胎中。; 吴斌戴建军张廷宇张树山吴彩凤顾晓龙陈会兰张德福马恒东; 关键词：精子

H19和IGF2R基因在体细胞克隆猪各组织中的甲基化状态被引量：6: 2012年; 为了探求新生克隆猪可能的死亡原因以及是否存在不完全的DNA甲基化重编程,本试验运用亚硫酸氢盐测序法分别检测了H19基因和IGF2R基因差异甲基化区(DMR)在新生死亡克隆猪和同期正常猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的甲基化状态。结果发现,H19基因DMR在克隆猪肺脏中表现为超甲基化,极显著高于正常猪(95.20%vs 46.80%P<0.01),且10个测序克隆中存在2处连续的全甲基化CpG位点(4～9位、12～S17位),而在其他组织中甲基化差异不显著(P>0.05);IGF2R基因DMR在肝脏中处于超甲基化状态,显著高于正常猪(80.00%vs 39.41%P<0.05),而在肺脏中为去甲基化状态,极显著低于正常猪(14.71%vs 66.47%P<0.01),在其他组织差异不显著(P>0.05)。结果说明,在死亡克隆猪中,H19基因DMR在肺脏和IGF2R基因在肝脏与肺脏中存在不完全的DNA甲基化重编程,这可能是导致克隆动物死亡的因素之一。; 吴志强谢一妮戴建军张廷宇吴彩凤张树山顾晓龙刘亮吴斌陈慧兰张德福马恒东; 关键词：DNA甲基化体细胞克隆

玻璃化快速冷冻仪（Vit-Master）在猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻中的应用研究: 为了提高猪成熟卵母细胞玻璃化冷冻效果,本试验应用玻璃化快速冷冻仪（Vit-Master）装置进行猪成熟卵母细胞的冷冻,以观察其冷冻效果。结果显示:浆状液氮降温速率（21345±1768℃/min）远远高于普通液氮降温速率...; 徐利戴建军张廷宇吴彩凤李维杰张树山顾晓龙李翔韩晓李芳芳; 关键词：卵母细胞; 文献传递

冷冻干燥处理对猪精子结构的影响: 本研究旨在探索冷冻干燥对猪精子结构的影响作用。（方法）本试验分别通过顶体染色、扫描电镜和透射电镜等方法观察冷冻干燥精子结构。结果表明,1.冷冻干燥前利用液氮进行预处理,对冷冻干燥精子形态没有显著影响（P＞0.05）;2....; 孟祥黔张树山戴建军吴彩凤张廷宇张德福; 关键词：猪精子冷冻干燥精子结构; 文献传递

SOX9和INSL3基因在克隆猪隐睾中的表达及甲基化模式被引量：1: 2013年; 为查明本课题组所获得的体细胞克隆猪隐睾发生的可能原因,本研究采用相对荧光定量PCR技术和亚硫酸氢盐测序法分析SOX9和INSL3基因在克隆猪隐睾中的表达量及其启动子区CpG位点甲基化状态。结果表明:除了SOX9基因在克隆猪C2中的表达量显著高于对照组N(1.82 vs 1,P<0.05)外,克隆猪SOX9和INSL3基因的表达量都显著低于对照组N(P<0.05);亚硫酸氢盐测序结果显示SOX9基因启动子区在克隆猪C1和C2中的甲基化程度没有显著变化,而INSL3基因启动子区在克隆猪C1和C2中的甲基化程度显著高于对照猪N(86.25%、78.75%vs 57.50%,P<0.05)。结果说明,INSL3基因在克隆猪隐睾中DNA甲基化重编程异常,而且这种异常影响其正常表达,由此推测这可能是导致克隆猪发生隐睾的重要因素之一。; 顾晓龙徐利韩晓李翔李芳芳戴建军曾宪垠张德福; 关键词：甲基化隐睾克隆猪

红景天多糖对猪卵母细胞体外成熟及其发育潜力的影响: 本研究旨在探讨红景天多糖(Rhodiola Sachalinensis Polysaccaride,RSP)对猪卵母细胞体外成熟及发育潜力的影响。(方法)在猪卵母细胞成熟液中添加不同浓度的RSP,以排出第一极体作为核成熟...; 徐利戴建军张廷宇吴彩凤张树山张德福顾晓龙李翔韩晓李芳芳; 关键词：红景天多糖卵母细胞孤雌激活体外受精; 文献传递

体细胞克隆巴马小型猪部分生理生化指标的初步测定被引量：1: 2011年; 目的探讨体细胞克隆巴马小型猪的生理生化指标特性。方法采用全自动血球计数仪和全自动生化仪，对体细胞克隆巴马小型猪血液的部分生理和生化指标进行测定和分析。结果体细胞克隆巴马小型猪生理生化指标和同期普通巴马小型猪没有显著差异，与人类大部分指标接近。结论体细胞克隆巴马小型猪和人类的生理生化特性有一定的相似性。; 陈会兰张德福吴彩凤戴建军张廷宇张树山顾晓龙吴斌; 关键词：体细胞克隆巴马小型猪生理指标生化指标

小型猪克隆胚的构建及胚胎移植研究: 2011年; 目的建立小型猪的体细胞核移植技术，为开展转基因小型猪动物模型研究提供技术支撑。方法应用体细胞核移植技术，以小型猪胎儿成纤维细胞和枫泾猪耳成纤维细胞作为供体细胞进行体细胞核移植，并将两种重构胚混合后进行胚胎移植。结果两种供体细胞在体外发育能力上无显著差异（P〉0．05）；电融合后进行化学激活能部分提高囊胚发育率，但差异不显著（P〉0．05）。两种方法生产的小型猪和枫泾猪克隆胚胎混合后，经胚胎移植均能顺利产下4只健康后代。经微卫星亲缘关系鉴定，克隆猪lOO％与供体细胞相同，与代孕母猪无关。结论建立的克隆平台能够用于克隆猪的生产。; 戴建军李垚顾晓龙张廷宇吴彩凤张树山吴斌陈会兰陈学进张德福; 关键词：体细胞核移植克隆小型猪化学激活

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