四川省教育厅青年基金(09ZB088)
- 作品数：6 被引量：23H指数：2
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- 相关机构：西华师范大学教育部更多>>
- 发文基金：四川省教育厅青年基金四川省应用基础研究计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 大熊猫核糖体蛋白L10亚基基因的cDNA克隆及序列分析被引量：1
- 2010年
- 目的了解大熊猫(ailuropoda melanoleuca)核糖体蛋白L10亚基基因(RPL10)的结构特点及其与已报道的人和其他哺乳动物核糖体蛋白亚基RPL10基因的异同。方法根据已报道的部分哺乳动物RPL10基因的相关信息设计引物,运用RT-PCR技术,从大熊猫的肌肉组织总RNA中对核糖体蛋白亚基RPL10基因的进行克隆、测序;采用Genescan软件,对所克隆的基因序列进行氨基酸序列推定;采用ORF finder软件进行DNA序列的开放阅读框查找;采用DNAMANVersion 6软件,对基因序列和氨基酸序列进行同源性比较;采用Ex2PASy Proteomics Server软件,进行蛋白质功能位点和生化特性预测分析;采用http://www.imtech.res.in/raghava/apssp2/对蛋白质二级结构进行模拟分析。结果大熊猫RPL10基因的表达序列长为685 bp,开放阅读框(ORF)为645 bp,编码214个氨基酸的蛋白质,该蛋白的相对分子质量为24.599 7×103,等电点为10.74,含有4个功能位点,分别为:2个蛋白激酶C磷酸化位点,2个N化位点,2个酰胺化位点,1个核糖体蛋白L10e信号位点。进一步分析发现,该基因的表达序列及其编码的氨基酸序列与已报道的人、牛、家犬、褐家鼠、小家鼠有很高的相似性,其表达序列同源性分别为92.4%、92.4%、97.21%、88.84%与89.61%;其编码的氨基酸序列除与牛的同源性为99.07%外,与其他哺乳动物同源性为100%。而且,其蛋白质的高级结构除牛外其他物种也具有一致性。结论无论是从RPL10基因的序列、结构、功能位点,还是从其编码的氨基酸的序列和二级结构进行分析,都表明大熊猫的RPL10基因和已报道的哺乳动物的RPL10基因具有高度的遗传稳定性和功能一致性。
- 苏秀兰侯怡铃李俊孙冰吴光富宋嫣张田侯万儒
- 关键词：大熊猫RT-PCR克隆
- 大熊猫核糖体蛋白L30亚基基因(RPL30)的cDNA克隆及序列分析被引量：1
- 2010年
- RPL30是核糖体大亚基60S的组成部分,由RPL30基因所编码,主要存在于真核生物中.根据已报道的部分哺乳动物核糖体蛋白L30亚基基因(RPL30)的相关信息设计引物,运用RT-PCR技术,以大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)的肌肉组织为材料,成功地克隆了核糖体蛋白L30亚基RPL30基因,并对其进行了测序及初步分析.结果表明:大熊猫L30亚基基因的表达序列长为388bp,开放阅读框(ORF)为348 bp,编码115个氨基酸的蛋白质,并含有6个功能位点.进一步分析发现,该基因的表达序列及其编码的氨基酸序列与已报道的人、牛、褐家鼠、小家鼠有很高的相似性,其表达序列同源性分别为93.97%,96.26%,89.66%和89.94%,其编码的氨基酸序列同源性分别为99.13%,98.26%,99.13%,99.13%,且其蛋白质的高级结构相似性也很高.
- 侯怡铃侯万儒
- 关键词：大熊猫RT-PCR
- 大熊猫和亚洲黑熊TNNC1基因的克隆、表达与序列分析被引量：1
- 2012年
- 慢肌肌钙蛋白C(Troponin C type 1,TNNC1)具有高度保守性,调控骨骼肌慢肌和心肌的收缩,影响肌蛋白的生成,从而可能导致动物肌肉的生长、进化和功能的差异。本研究以大熊猫和亚洲黑熊骨骼肌为材料,提取总RNA和基因组DNA,运用RT-PCR和Touch-down PCR分别扩增出TNNC1基因的cDNA序列和结构基因序列,并且构建了含有TNNC1 cDNA的重组表达载体,转化进入E.coli BL21进行超表达研究。结果表明大熊猫TNNC1基因的cDNA片段长602 bp,包含一个编码161个氨基酸的开放阅读框,其结构基因全长2 831 bp,包含6个外显子和5个内含子。亚洲黑熊TNNC1基因的cDNA片段长486 bp,亦包含一个编码161个氨基酸的开放阅读框,其结构基因全长2 758 bp,同样包含6个外显子和5个内含子。该两个物种的TNNC1基因与已报道的13种动物的TNNC1基因具有很高的相似性。拓扑预测表明,大熊猫和亚洲黑熊TNNC1蛋白有1个蛋白激酶C磷酸化位点,5个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,1个N-豆蔻酰化位点,3个EF手性钙结合域及1个N-糖基化位点。将TNNC1基因在大肠杆菌中表达发现TNNC1蛋白与氮端多聚组氨酸标签蛋白(His6)融合成大小为23.5kD左右的多肽,这与预期结果相一致。本研究结果为进一步深入探讨大熊猫和亚洲黑熊TNNC1基因及蛋白的结构、功能和进化关系提供资料。
- 侯怡铃丁祥侯万儒
- 关键词：克隆大熊猫亚洲黑熊
- 大熊猫核糖体蛋白S17亚基基因(rps17)的克隆及序列分析被引量：1
- 2011年
- RPS17蛋白是核糖体40S亚基的组成部分,由rps17基因编码.为了解大熊猫核糖体蛋白亚基rps17基因的结构特点及其与已报道的人和其他哺乳动物核糖体蛋白亚基rps17基因的异同,分别运用RT-PCR和PCR技术,从大熊猫肌肉组织的mRNA中成功克隆了核糖体蛋白亚基S17基因的cDNA序列以及从总DNA中成功克隆了S17基因的结构基因序列.序列分析发现,大熊猫核糖体蛋白亚基S17基因的表达序列长为457bp,开放阅读框(ORF)为408bp,编码135个氨基酸的蛋白质.结构基因序列长2 368bp,含有4个外显子和3个内含子.拓扑预测显示,核糖体蛋白亚基RPS17的相对分子质量为15.52×103,PI为10.26,含有5个类型的功能位点,即:5个蛋白激酶C磷酸化位点,1个酪蛋白激酶II磷酸化位点,1个酪氨酸激酶磷酸化位点,1个N-豆蔻酰化位点及1个核糖体蛋白S17Esignature位点.进一步分析发现,该基因的表达序列及其编码的氨基酸序列与已报道的部分哺乳动物有很高的相似性,其蛋白质的高级结构除褐家鼠外与其它物种也具有一致性.对大熊猫rps17基因及其表达的蛋白质结构的比较研究,旨在丰富和完善哺乳动物rps17的基因资料库.
- 侯怡铃李俊侯万儒
- 关键词：大熊猫RT-PCR克隆
- 松乳菇多糖含量的苯酚硫酸法检测研究被引量：15
- 2012年
- 采用水提醇沉,纤维素柱层析纯化制备松乳菇多糖,建立测定松乳菇多糖含量的方法.本文采用苯酚-硫酸法,分别考察该方法的测定波长、精密度、准确度及稳定性.结果表明,测定波长为490nm,样品松乳菇中多糖含量平均为56.0μg/mL,相对标准偏差(RSD)为0.47%,平均回收率为99.1%.苯酚硫酸法检测为松乳菇多糖的测定提供了一种快速简便可靠的方法.
- 陈杨琼伍春莲侯怡铃丁祥张思楠
- 关键词：松乳菇真菌多糖
- 德钦乌头中的二萜生物碱被引量：4
- 2013年
- 目的研究乌头属植物德钦乌头Aconitum ouvrardianum根的二萜生物碱类化学成分。方法采用反复硅胶柱色谱进行分离纯化,根据谱学数据和对照TLC分析鉴定化合物的结构。结果从德钦乌头根的醋酸乙酯提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定为塔拉乌头胺(1)、彭乌碱乙(2)、卡马考宁(3)、黄草乌碱亭(4)、粗茎乌头碱甲(5)、贡乌生(6)、14-乙酰黄草乌碱亭(7)、展花乌头碱(8)、黄乌宁(9)、膝乌亭丁(10)、异塔拉乌头定(11)、翠雀它灵(12)。结论 12个化合物均为C-3位或C-6位无含氧取代的C19-二萜生物碱,且均为首次从该植物中分离得到。乌头碱型C19-二萜生物碱为德钦乌头药材的主要药用化学成分。
- 丁祥侯怡铃
- 关键词：草乌甲素
