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卫生部临床学科重点项目(20010103)

作品数：10 被引量：34H指数：3
相关作者：马恩陵康军仁李云玖张立阳蒋朱明更多>>
相关机构：北京协和医院中国医学科学院北京协和医学院中国循证医学中心更多>>
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文献类型

  • 10篇中文期刊文章

领域

  • 10篇医药卫生

主题

  • 5篇实时定量PC...
  • 5篇实时定量PC...
  • 4篇人全血
  • 4篇全血
  • 3篇黏膜
  • 3篇黏膜屏障
  • 3篇发热
  • 3篇肠黏膜
  • 3篇肠黏膜屏障
  • 2篇载量
  • 2篇外科
  • 2篇外科感染
  • 2篇细胞
  • 2篇发热患者
  • 2篇埃希菌
  • 2篇大肠埃希菌
  • 1篇血标本
  • 1篇血糖
  • 1篇血细胞
  • 1篇血细胞计数

机构

  • 9篇北京协和医院
  • 1篇中国医学科学...
  • 1篇中国循证医学...

作者

  • 10篇马恩陵
  • 5篇康军仁
  • 4篇崔希增
  • 4篇张立阳
  • 4篇蒋朱明
  • 4篇李云玖
  • 3篇廉东波
  • 3篇房嘉宾
  • 3篇王秀荣
  • 2篇徐云飞
  • 2篇郭广亮
  • 1篇温泉
  • 1篇谢秀丽
  • 1篇何桂珍
  • 1篇徐英春
  • 1篇江华

传媒

  • 5篇中国临床营养...
  • 4篇中华临床营养...
  • 1篇医学研究通讯

年份

  • 1篇2015
  • 1篇2014
  • 1篇2012
  • 1篇2011
  • 5篇2006
  • 1篇2003
共 10 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
多重实时定量PCR同时检测人全血中大肠杆菌与白念珠菌基因方法的建立
2015年
目的建立多重实时定量PCR（MRQ—PCR）同时快速检测血中大肠杆菌与白念珠菌DNA的方法，以评估肠屏障损伤可能导致的移位微生物的种类和程度并提供针对性用药的建议。方法选择大肠杆菌β-右旋半乳糖苷酶基因作为检测大肠杆菌的靶基因设计引物和探针，选择白念珠菌ITS2基因设计引物和探针。采用QIAamp DNA Blood Mini Kit试剂盒提取大肠杆菌与白念珠菌基因组DNA；建立25μlTaqMan探针MRQ-PCR反应体系；对18份模拟血标本及10份外科发热患者临床标本进行MRQ—PCR检测。结果引物和探针特异性好，大肠杆菌与白念珠菌标准曲线相关系数分别在0．994—0．999和0．994～0．998，扩增效率分别为0．894～1．022和0．905～1．028。标准样品检测限分别为大肠杆菌13．9拷贝／μl和白念珠菌0．8cfu／μl，两种菌的检测灵敏度分别为100％和99．69％，特异度分别为100％和94．73％，标准品中大肠杆菌与白念珠菌特异基因平均回收率分别为（101．89±5．69）％和（103．74±4．64）％，两种菌基因检测的批内变异系数分别为（13．14±10．27）％和（19．18±8．54）％，批间变异系数分别为（14．35±9．34）％和（18．31±10．25）％。全血标本中大肠杆菌与白念珠菌特异基因的检出限分别为12455．2拷贝／ml和800．3cfu／ml，平均回收率分别为（111．60±11．06）％和（99．96±6．16）％，两种菌基因检测的批内变异系数分别为（11．02±5．65）％和（8．14±7．29）％，平均批间变异系数分别为（12．88±7．59）％和（18．62±9．14）％。结论多重实时定量PCR可以同时快速、灵敏、特异地定量检测人全血标本中大肠杆菌与白念珠菌基因，准确度高、重复性好、节省血标本用量及检测成本、总检测时间缩短，在临床全血标本的真菌与细菌快速鉴别检测、抗微生物药物的针对性应用及疗效评估、肠屏障�
房嘉宾康军仁马恩陵郭广亮崔希增
关键词：大肠杆菌白念珠菌全血
实时定量PCR检测人全血中金黄色葡萄球菌DNA方法的建立被引量：3
2014年
目的建立实时定量PCR（RQ—PCR）快速检测人全血中金黄色葡萄球菌DNA的方法，以便早期定量评估肠屏障损伤所致肠道内细菌移位引起或加重的全身感染。方法对15份模拟全血标本及26份外科发热患者全血标本进行RQ—PCR检测。选择金黄色葡萄球菌高度保守的看家基因femA基因作为靶基因设计引物和Taqman探针，建立20ul的RQ—PCR反应体系，采用含靶基因扩增片段的重组质粒建立标准曲线，提取血标本中的细菌基因组DNA。结果引物和探针特异性好，检测限为10^0拷贝／ul（10^3CFU／ml），灵敏度为99．7％，特异度为94．6％。标准曲线线性关系好，R。在0．9918—0．9997。不同浓度的金黄色葡萄球菌样本检测的平均准确性为（96．25±2．26）％，批内及批间重复性的平均变异系数分别为（8．06±0．07）％和（10．01±4．40）％。全血标本中金黄色葡萄球菌DNA平均回收率为（111．72±20．72）％。临床血标本RQ-PCR检测阳性率为15．4％（4／26），血培养结果皆为金黄色葡萄球菌阴性。结论RQ—PCR可用于定量检测全血标本中的金黄色葡萄球菌DNA含量，具有快速、灵敏、特异性强、重复性好的优点。
康军仁马恩陵房嘉宾崔希增
关键词：实时定量PCR金黄色葡萄球菌发热血标本
肠内营养中碳水化合物及脂肪比例对糖尿病患者血糖及感染率的影响:Meta-分析被引量：1
2003年
目的评价肠内营养中不同碳水化合物及脂肪比例对糖尿病患者血糖及感染率的影响。方法检索中国生物医学文献数据库、Cochrane图书馆、Medline光盘数据库,鉴定有关随机对照试验(randomized clinical trial,RCT),采用RevMan4.1统计软件进行Meta-分析。结果纳入4个符合入选标准的研究,比较含不同碳水化合物及脂肪比例的肠内营养(EN)对糖尿病患者血糖及感染率的影响。低碳水化合物高脂肪的EN比高碳水化合物低脂肪的EN,对应激状态糖尿病患者血糖影响的加权均数差值(weighted mean difference,WMD)为-1.47,95％CI为[-3.22,0.27],P=0.10;对感染率影响的相对危险度(Relative Risk,RR)为0.90,95％CI为[0.59,1.39],P=0.60。结论糖尿病患者(尤其在应激状态下)接受低碳水化合物高脂肪的EN(糖尿病适用型)后,血糖较接受高碳水化合物低脂肪普通En的患者有降低倾向;感染率虽有下降趋势,但无统计学差异。
马恩陵江华王秀荣蒋朱明
关键词：血糖感染率肠内营养
通用真菌引物和探针检测人全血标本中侵袭性真菌DNA载量的方法被引量：3
2012年
目的建立实时定量PCR（RQ-PCR）以真菌通用引物和探针快速准确检测人全血标本中侵袭性真菌DNA载量的方法，并与细菌相鉴别及进行初步临床应用。方法选择临床常见的真菌基因组多拷贝基因5.8S rDNA作为靶基因设计特异性通用真菌引物和TaqMan探针，采用QIAamp血液DNA小提试剂盒提取多种致病真菌基因组DNA，建立20 μl RQ-PCR反应体系，对含有不同载量致病真菌的模拟人全血标本和71份外科发热患者全血标本进行侵袭性真菌基因组的定量检测。结果本方法的特异性良好，检测限为101拷贝/μl上机待测液 （即约105 拷贝/ml 全血）；检测灵敏度和特异度分别为95.5%和97.6%，阳性预告值和阴性预告值分别为98.7%和92.0%；标准曲线R2在0.9931~0.9977；批内及批间平均变异系数分别为（10.4±4.0）%和（27.9±2.0）%；人血标本中真菌基因组DNA平均回收率为（91.0±7.6）%，相对回收率平均变异系数为（14.9±4.0）%。71份外科发热患者血标本中未检测出侵袭性真菌基因组。结论RQ-PCR可以借通用真菌引物和TaqMan探针快速、特异、灵敏地定量检测人血标本中侵袭性真菌DNA的载量并可与细菌相鉴别，且有着较好的准确度与精密度。外科发热患者血中侵袭性真菌基因组的存在率可能很低。
徐云飞马恩陵康军仁崔希增
关键词：外科感染
实时定量PCR检测外科发热患者静脉血中大肠杆菌DNA的方法被引量：22
2006年
目的建立实时定量PCR(RQPCR)检测大肠杆菌DNA的方法,评估临床标本检测效果。方法选择大肠杆菌β右旋半乳糖苷酶基因作为检测靶基因设计引物和探针,采用HighPurePCRTemplatePreparationKit提取基因组DNA,建立20μlTaqMan探针RQPCR反应体系。对26份外科发热患者标本(血标本20份,腹腔引流液3份,胸水2份,胆汁1份)进行荧光RQPCR检测。结果引物和探针特异性好,标准曲线相关系数在0.991～0.999之间。在最低检测限(102拷贝/反应体系)以上,仪器对不同含量大肠杆菌样本检测的平均准确性为(112.19±7.48)%;批内及批间重复性平均变异系数(CV)分别为(16.33±4.80)%和(16.03±7.80)%。血标本中大肠杆菌DNA平均提取效率为(38.40±14.05)%,提取效率平均CV为(20.57±16.92)%。含有同等量大肠杆菌模拟标本存放在-20℃或-70℃6个月内,大肠杆菌DNA拷贝数差异无显著性(P=0.130)。外科发热患者血中大肠杆菌阳性率高达30%,最高含量约为1.24×106个/ml;另外在胆汁及腹腔引流液标本中检测出的大肠杆菌DNA含量明显高于相同患者血中含量。结论RQPCR是一种快速、灵敏、特异、重复性好、能定量起始模板拷贝数的检测大肠杆菌DNA方法,可用于定量检测全血及其他体液标本中大肠杆菌含量。
李云玖马恩陵廉东波张立阳王秀荣何桂珍蒋朱明
关键词：实时定量PCR肠黏膜屏障发热体液
实时定量PCR在细菌移位研究中的潜力被引量：6
2006年
实时定量PCR(RQPCR)是一种新型核酸定量技术,具有实时监测、快速、灵敏、精确、特异等特点。与原有PCR技术相比,其最主要的优势是能对待测样本起始PCR反应模板进行准确定量,扩大了PCR的应用范围。目前在细菌移位研究中,对肠黏膜屏障损伤的早期诊断一直没有很理想的方法。RQPCR能准确定量外周血中细菌DNA,有利于对肠黏膜屏障损伤的早期诊断和损伤程度评估。
李云玖马恩陵张立阳
关键词：实时定量PCR细菌移位肠屏障
肠黏膜屏障的研究进展被引量：2
2006年
胃肠黏膜固有屏障正常稳态的维持,对于防止胃肠腔内细菌、食物抗原、酶和化学药物等直接与黏膜裸露面接触引起的相关疾病至关重要。本文就胃肠黏膜固有屏障的关键结构、成分和功能、调节因素等方面研究进展予以综述。
温泉马恩陵
关键词：粘膜屏障细胞因子三叶肽
实时定量PCR检测大肠埃希菌在LB培养基和血中对抗生素的药物敏感性被引量：3
2006年
目的 建立以实时定量PCR快速检测大肠埃希菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素药物敏感性的方法。方法 临床血培养获得大肠埃希菌株，以常规纸片法检测其对抗生素的药物敏感性。分别在LB液体培养基和健康人新鲜全血中加入该大肠埃希菌至终浓度为0．5麦氏单位，采用不加抗生素的标本作为生长对照组，加入耐受或敏感的抗生素的标本作为耐受药物组或敏感药物组，37℃震荡培养，分别提取0、1、2、3、4小时的基因组DNA，以大肠埃希菌特异β-右旋半乳糖苷酶基因的引物和TaqMan探针，对标本进行实时定量PCR检测。结果 实时定量PCR方法有较好的重复性（CT值变异系数0．26％～1．56％）和精确度（大肠埃希菌DNA提取效率在LB培养基中为43．6％，在血中为26．7％），标准曲线线性关系好（R^2≥0．998）。培养1～3小时后，耐受药物组与生长对照组的大肠埃希菌DNA拷贝数均呈对数增长，在LB液体培养基中增至约19～120倍，在新鲜全血中增至约6～11倍；敏感药物组大肠埃希菌DNA拷贝数呈减少趋势，在LB液体培养基中减至0．22～0．12倍，在新鲜全血中为1．29～0．14倍。上述药敏结果与常规纸片法一致。结论 采用实时定量PCR检测大肠埃希菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素的药物敏感性，结果与常规纸片法一致，但更快速。
马恩陵廉东波李云玖张立阳谢秀丽徐英春蒋朱明
关键词：实时定量PCR大肠埃希菌
外科发热患者静脉血中大肠埃希菌DNA实时定量PCR检测与体征及血细胞计数的相关性被引量：2
2006年
目的 定量检测外科发热患者静脉血中大肠埃希菌DNA含量，研究其与体征及皿细胞计数之间的相关性，并比较不同检测方法对血中大肠埃希菌的阳性检出率的差异。方法 以实时定量PCR（RQ-PCR）定量检测40份健康人静脉血标本，确定临床阳性检测限。31例发热患者共72份血标本同时进行常规细菌培养及大肠埃希菌DNA定量检测，比较两种检测方法对血中大肠埃希菌的阳性检出率的差异，两个取血时间点间大肠埃希菌DNA含量的变化，并计算大肠埃希菌DNA含量与体温、心率、白细胞计数、中性粒细胞及淋巴细胞百分比之间的相关性。结果 RQ-PCR定量检测大肠埃希菌DNA阳性率为52．78％（38／72），显著高于细菌培养阳性率2．78％（2／72）（P=0．000）。同一患者两个时间点血标本检测结果显示，静脉血中大肠埃希菌DNA在2～6小时内的升降变化达10～20倍。血中大肠埃希菌DNA含量与体温和心率之间均显著相关（P=0．000），相关程度中度密切（，值分别为0．565和0．546），与白细胞计数、中性粒细胞及淋巴细胞百分比之间无显著相关关系。结论 RQ-PCR检测外科发热患者静脉血中大肠埃希菌阳性率远高于血培养。血中大肠埃希菌DNA拷贝数变化速度较快。血细胞计数不能很好反映血中大肠埃希菌的含量，而体温心率的影响因素较多，因此RQ-PCR能更及时准确反映大肠埃希菌血症的严重程度，有助于对肠屏障损伤导致肠道细菌移位的动态程度或后果进行评估。
马恩陵李云玖廉东波张立阳康军仁王秀荣蒋朱明
关键词：大肠埃希菌DNA肠黏膜屏障发热
实时定量PCR检测人全血标本中烟曲霉基因组载量的方法及临床应用被引量：2
2011年
目的建立实时定量PCR（RQ-PCR）快速检测人全血标本中烟曲霉基因组载量的方法及进行初步临床应用。方法基于烟曲霉多拷贝基因ITSl-5．8S基因设计引物和TaqMan探针，用QIAamp^DNA Blood Mini Kit提取烟曲霉基因组DNA，建立20μlRQ-PCR反应体系，对含有不同载量烟曲霉基因组的模拟人全血标本和66份外科发热患者全血标本进行烟曲霉基因组的定量检测。结果检测限为10^-1基因组／μl上机待测液（即约78CFU／ml全血）；检测特异度和灵敏度分别为94．25％和99．04％，阳性预告值和阴性预告值分别为97．63％和97．62％；测定结果的平均相对误差为（3．67±13．19）％；批内及批间平均重复性变异系数分别为（12．38±1．53）％和（16．27±2．72）％；人血标本中烟曲霉基因组平均回收率为（107．81±25．92）％，回收率平均变异系数为（26．24±5．62）％。66份外科发热患者血标本中未检测出烟曲霉基因组。结论RQ-PCR可以快速、特异、灵敏地定量检测人血标本中烟曲霉基因组的载量，且有着较好的准确度与精密度。本研究外科发热患者血中未检测到烟曲霉基因组。
崔希增马恩陵康军仁郭广亮房嘉宾徐云飞
关键词：实时定量PCR烟曲霉全血外科感染
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