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国家高技术研究发展计划(2007AA02Z405): 作品数：11 被引量：113H指数：7; 相关作者：范伟兴刘丽娅李博钟旗叶锋更多>>; 相关机构：中国动物卫生与流行病学中心新疆畜牧科学院东北农业大学更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生更多>>

猪链球菌2型分离株的生物学特性试验被引量：1: 2011年; 对从济南某猪场急性死亡的病例中分离得到的阳性球菌进行了形态学观察、生化试验、PCR鉴定及序列测定,药敏试验结果显示该分离菌的形态、培养特性及生化特性符合链球菌2型的特点。PCR扩增出现长度为675bp的目的条带,其核苷酸序列与Genebank中猪链球菌2型参考菌株的同源性高达98%～100%。药敏试验表明该分离菌株对复方新诺明、氨苄西林、恩诺沙星、青霉素、万古霉素、阿莫西林高度敏感。动物致病性试验表明能100%致死小白鼠。; 刘丽蓉常凯吴娟单虎; 关键词：猪链球菌2型生化试验 PCR 药敏试验动物试验

新疆牛分枝杆菌MIRU-VNTR基因分型的初步研究被引量：3: 2010年; 为了解牛分枝杆菌的基因型特点,初步建立适合新疆地区的MIRU-VNTR基因分型方法,本研究利用24个MIRU-VNTR位点,对30株牛分枝杆菌新疆分离株进行基因分型研究。结果显示,在24个MIRU-VNTR位点中,有9个位点(ETR-A、B、D、E;MIRU24;QUB11a、11b、1895、26)具有多态性,可将30株菌分为7个基因型,分型指数为0.611。而国际通用的5个ETRs位点(ETR-A～E)可将该30株菌分为4个基因型,分型指数为0.712。多态性位点中多态性指数较高的5个位点(ETR-B、ETR-D、MIRU24、QUB11a、QUB26)具有与9个位点相似的分型能力,分型指数为0.715。研究表明,新疆地区与其他地区或国家的牛分枝杆菌在基因分型方面存在差异。5个多态性较高的位点均具有良好的分型能力,表明MIRU-VNTR基因分型方法可以作为新疆地区牛分枝杆菌分子流行病学研究的辅助方法。; 曹瑞张喜悦孙照刚呼西旦田苗李妍胡文婷李传友范伟兴胡桂学; 关键词：牛分枝杆菌基因分型

布鲁氏菌VirB8变异株的构建及其感染力和毒力的测定被引量：10: 2009年; 作者拟对缺失致病力因子——四型分泌系统中的VirB8基因后布鲁氏菌感染力和毒力的变化进行测定与分析。首先,构建了布鲁氏菌VirB8基因缺失株(△B8B.suis),用缺失株感染巨噬细胞和BALB/c小鼠,再用B.suis强毒攻击BALB/c小鼠并检测脾脏含菌数,观察其在动物体内定居能力、毒力及抗感染保护力。鉴定△B8B.suis为VirB8基因完全缺失株,△B8B.suis感染巨噬细胞6、24和48 h,其CFU分别为49、165和355;△B8B.suis感染BALB/c小鼠的每克脾含菌数为3.6×107(1×108CFU腹腔接种)和5×106(1×109CFU蹊部接种);BALB/c小鼠攻毒试验显示△B8B.suis免疫组每克脾平均含菌数为7.61×102,非免疫对照组为2.98×105。结果表明布鲁氏菌缺失VirB8基因后,其毒力较亲本株弱,但能在小鼠脾脏定居,为弱毒株;△B8B.suis呈现出作为疫苗的生物学特性,但毒株能否作为疫苗株使用,还需进一步验证。; 钟旗何倩倪范伟兴谷文喜易新萍吴冬玲叶锋李博刘丽娅; 关键词：布鲁氏菌致病因子毒力保护力

布鲁氏菌病VirB8-PCR诊断试剂盒的特异性评价被引量：7: 2009年; 使用VirB8-PCR诊断试剂盒对布鲁氏菌标准株、疫苗株及新疆分离株共7株布鲁氏菌的VirB8基因序列扩增、克隆并与Genbank中发表的VirB8基因序列(AF226278)进行比较和分析,发现:该基因非常保守,7株布鲁氏菌的同源性在99.2%以上,其中A菌与Rev1基因序列100%同源,B菌与Genbank发表的基因序列100%同源;牛种(544A、A19)和羊种(M5、Rev1)分别各自在相同部位发生了相同的碱基突变,因此VirB8基因有可能做为布鲁氏菌疫苗菌的鉴定分类基因。VirB8基因在布鲁氏菌中高度保守,可作为布鲁氏菌检测模板,VirB8-PCR诊断试剂盒特异、敏感,检测结果可靠。; 谷文喜吴冬玲范伟兴叶峰李博刘丽娅钟旗岳大安; 关键词：布鲁氏菌试剂盒

中国禽群高致病性禽流感发生状况及其风险预测被引量：19: 2010年; 本研究旨在探讨中国高致病性禽流感的发生状况,并对其风险态势进行尝试性的预测。作者在流行病学数据挖掘和模型分析基础上,基于OIE风险评估理论,结合昆虫生态学格局分析和Bernoulli统计模型,对中国2004年以来高致病性禽流感的发生状况及其风险态势进行了分析和预测。结果显示:(1)中国家禽养殖数量大,养殖模式复杂,种类繁多,养殖的区域特征显著,给中国HPAI的防控带来了挑战;(2)中国自2004年发生HPAI以来,疫情发生的时-空连续性强,突出表现在疫情发生的季节、区域和宿主特征明显,提示科学的区域化管理和协作的重要性;(3)在发展态势上,由于区域周边疫情特点和中国禽群养殖及风险管理状况,使得中国局部地区禽群在相当长的一段时间内存在较大的暴露和感染的风险;(4)风险预测上,利用Bernoulli统计模型和信息技术,预测2008年中国禽群在90%的置信区间内最有可能会有2～10起HPAI疫情发生,发生6起左右的高致病性禽流感疫情可能性较大,其中在中国东南部分地区局部区域禽群具有较高的疫情暴露和发生风险。本研究表明中国禽群持续发生HPAI疫情的可能性大,开展基于风险的区划和管理对疫情发生和控制具有积极意义。; 张志诚李长友黄保续刘拥军宋建德韦新捷蔡丽娟王志亮马洪超; 关键词：高致病性禽流感风险评估统计模型风险管理

地理风险分析在动物卫生与流行病学中的应用被引量：10: 2009年; 地理风险分析(Geographi cal Risk Analysis,GRA)是指综合地理科学理论和风险评估的方法开展定性描述和定量分析的方法。地理风险分析的理论基础是地理学,同时融合和借鉴地图学、测绘学、拓扑学、生态学、环境科学和概率统计学科的技术和方法综合开展对某一类事件的监测、认知和研究。地理风险分析的方法具有高度的实践性和综合性。在当前我国禽流感、口蹄疫等重大动物疫病事件和动物卫生区域化特征逐渐明显化的态势下,地理风险分析的方法在动物卫生相关信息的宏观综合、不同尺度信息融合与扩展、地理事件元数据挖掘和分析以及风险管理的科学决策等诸多方面将会有广阔的应用前景。; 张志诚李蕾王志亮刘拥军黄保续; 关键词：风险评估动物卫生禽流感口蹄疫

北京基因型结核分枝杆菌感染THP-1细胞系表达谱的研究被引量：2: 2011年; 目的通过分析不同结核分枝杆菌感染巨噬细胞后表达谱的改变,探讨结核病(tuberculosis,TB),尤其是北京基因型结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis M.tb)感染的结核病免疫发病机制。方法具有IS6110 DNARFLP和Spoligotyping基因分型结果的265株北京基因型结核分枝杆菌(简称M.tb Beijing genotype)鉴定自2000年中国结核病流行病学抽样调查(简称2000年流调),采用平均连锁方法计算北京基因型结核分枝杆菌中心菌。结核分枝杆菌(M.tb H37Rv)、牛分枝杆菌(M.bovis)标准菌株和M.tb Beijing genotype感染THP-1细胞,采用基因芯片分析其表达谱的改变。结果输入MAS系统,行进一步的分析。结果依据计算原则,相似系数最大为0.514,其对应菌株为结核分枝杆菌北京基因型中心菌株。分枝杆菌感染THP-1细胞后相应的芯片结果具有可靠性和可分析性。M.tb H37Rv、M.bovis、M.tb Beijing genotype感染THP-1细胞的共同表达293个基因。共同表达基因的GO和pathway分析,发现一些不为人特别关注,但对结核免疫有一定作用的信号通路,例如B细胞受体信号通路。M.tb H37Rv、M.tb Beijing genotype感染THP-1细胞差异表达基因包括:tnf,tnfrsf9,pim-1,icam-1和cd48。结论 2000年结核病流调以中国人口为整体,采用分层整群随机抽样。因此获得的M.tb Beijing genotype中心菌株具有中国代表性。293个基因可作为筛选用于菌阴结核病诊断的候选靶标。对这些差异表达基因涉及的信号通路,例如:JAK-STAT信号通路和自然杀伤细胞介导的细胞毒性以及TNF的深入分析,将对理解M.tb Beijing genotype免疫毒性特征有益。; 李卫民黄海荣高峰刘毅范伟兴戴广明姜广路宋小运赵立平付玉红; 关键词：结核分枝杆菌北京基因型基因芯片表达谱

牛结核γ干扰素ELISA检测方法的建立及应用被引量：10: 2011年; 为建立快速、敏感的牛结核分枝杆菌检测方法,本研究利用两株牛γ干扰素(IFN-γ)的单克隆抗体(MAb)建立检测牛IFN-γ的抗原捕获夹心ELISA方法。通过优化反应条件,确定抗体包被浓度为5μg/mL;全血刺激上清最佳稀释倍数为1∶2,作用时间为1 h;最佳酶标抗体作用时间为1 h;底物作用时间为15 min。该方法对重组牛IFN-γ的最小检测量可达25 pg/mL,对重组和天然牛的IFN-γ均具有特异性,与IFN-α、IFN-β或白细胞介素4为阴性反应;与山羊和绵羊的IFN-γ呈阳性反应,而与猪、鸡、鹿、犬和人的IFN-γ呈阴性反应。通过对177头牛进行检测,该方法与皮内变态反应的符合率为78.9%,与进口试剂盒的符合率为89.8%,表明该方法具有良好的应用价值。本研究为牛结核早期及其潜伏期感染的监测及流行病学调查提供了快速敏感的检测方法。; 胡文婷曹瑞张旭霞张喜悦李传友范伟兴单虎; 关键词：牛结核 ELISA

布鲁氏菌PCR鉴定方法的研究与应用被引量：24: 2011年; 目的采用PCR、PCR-SSCP方法对布鲁氏菌进行快速鉴定,并对其种、型鉴别。方法分析已发表布鲁氏菌属、种、型基因序列,寻找出不同布鲁氏菌的种、型特异性碱基分布规律,设计特异性引物,用于布鲁氏菌属、种、型的鉴定;根据聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析原理,建立PCR-SSCP方法,用于区分牛种A19疫苗株与其他型布鲁氏菌。结果所建立的PCR方法能高效、准确鉴定出布鲁氏菌,并能对其种、型进行区分;PCR-SSCP方法可将A19疫苗株从其他型布鲁氏菌中区分出来。结论利用PCR、PCR-SSCP方法能快速、准确地进行布鲁氏菌属、种、型以及疫苗株A19的鉴别,且简便、可靠,便于临床应用。; 钟旗易新萍李博吴冬玲刘丽娅叶锋闫晶华李金平王力俭; 关键词：布鲁氏菌 PCR PCR-SSCP

牛支原体、无乳支原体和丝状支原体丝状亚种小克隆三重PCR检测方法的建立及初步应用被引量：32: 2011年; 本研究旨在建立一种可一次性区分牛支原体、丝状支原体丝状亚种小克隆和无乳支原体的三重PCR诊断方法,为临床诊断和流行病学调查提供可靠检测技术。根据GenBank发表的上述3种病原的基因组序列保守区域设计3对特异性引物建立三重PCR方法;确定其检测敏感性,以猪支原体、鸡支原体、无乳支原体和丝状支原体丝状亚种小克隆基因作模板检验其特异性;同时和病原分离鉴定结果对比其准确性。结果表明在优化体系和条件下能够同时得到扩增长度为448、549、375 bp 3条特异性片段,未扩增出猪、鸡支原体模板特异性片段;其敏感性(可检测到的最小模板DNA含量)为0.8 ng.μL-1;36份临床样品检测结果显示,三重PCR检测结果与分离培养鉴定方法一致,均能鉴定出牛支原体阳性病料。本研究建立的三重PCR诊断方法能够一次性鉴别3种支原体,具有高敏感性、特异性和准确性,可用于临床诊断和流行病学调查。; 李大伟黄灿平张彦明谢建华冉智光熊仲良范伟兴; 关键词：牛支原体三重PCR

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