国家海洋公益性行业科研专项(201305015)
- 作品数：23 被引量：109H指数：6
- 相关作者：叶秀云林娟曹敏杰翁凌王国增更多>>
- 相关机构：福州大学集美大学福建省水产研究所更多>>
- 发文基金：国家海洋公益性行业科研专项国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程农业科学更多>>
- 琼胶寡糖的生物酶解制备工艺研究被引量：3
- 2017年
- 以龙须菜为原料,以琼胶得率为指标,采用正交实验研究了液料比、水提温度、水提时间对琼胶得率的影响,得到最佳水提琼胶工艺条件;进一步以水解度为指标,采用响应曲面法研究了pH、酶解温度、底物浓度对琼胶水解度的影响,得到最优酶解工艺。结果表明,琼胶的最佳水提条件为:液料比281(v/w),水提温度120℃,水提时间90 min,在此条件下,琼胶得率为32.8%。酶解时间2h,加酶量20 U/mL条件下的最优酶解工艺为:pH6.4,酶解温度54℃,底物浓度0.6%(w/v),此时水解度为89.75%。经薄层层析分析,酶解产物为偶数新琼寡糖(DP2、4、6、8),其中主要产物为新琼四糖,为功能性琼胶寡糖的开发应用打下基础。
- 谢喜珍谢金盛杨捷叶秀云林娟
- 关键词：龙须菜琼胶琼胶寡糖水提酶解工艺
- 产几丁质酶微生物的筛选、鉴定及酶学性质研究被引量：6
- 2017年
- 从福建地区土壤中筛选获得一株产几丁质酶菌株B120,经16S rDNA鉴定为蜡样芽孢杆菌。对菌株B120的产酶培养基进行优化,得到优化的培养基配方:乳糖3.5%,蛋白胨1.0%,细粉几丁质0.2%,K_2HPO_40.07%,KH_2PO_40.03%,MgSO_40.05%,FeSO_4·H_2O 0.002%,NaCl 0.5%,初始pH 6.0。在此条件下发酵84 h酶活力可达603 U/L,比优化前(87 U/L)提高了5.93倍。对几丁质酶酶学性质的研究表明,该酶的最适反应pH 8.0,最适反应温度50℃;在30℃、pH 7.0~10.0条件下保温1h,相对酶活力保持在74%以上,是一种中温碱性几丁质酶。
- 连文浩林娟王国增叶秀云苏冰梅
- 关键词：几丁质酶蜡样芽孢杆菌培养基优化酶学性质
- 海洋弧菌Ag-1产琼胶酶条件研究被引量：5
- 2017年
- 以课题组从龙须菜中分离得到的产琼胶酶弧菌Ag-1为试验菌株,对其产酶培养基和发酵条件进行研究,得到优化后的培养基配方和培养条件为:琼脂0.2%,蛋白胨0.3%,酵母膏0.8%,NaCl 4.0%,MgSO_40.6%,CaCl_20.2%;培养基初始pH 6.5,接种量1%(体积分数),摇床转速240 r/min,装液量50 m L/250 m L,发酵温度33℃,发酵周期24 h。在此条件下做发酵产酶试验,琼胶酶活力达45.51 U/m L,较优化前的7.0 U/m L提高了5.5倍。
- 张建美韩尧跃王国增叶秀云林娟
- 关键词：弧菌琼胶酶培养基优化产酶条件优化
- 海蜇胶原蛋白肽的酶解制备工艺被引量：5
- 2018年
- 以海蜇加工下脚料为原料提取胶原蛋白,以还原力(RP)和水解度(DH)为指标,采用响应面法研究了酶解温度、酶解时间、p H、料液比、酶添加量对还原力和水解度的影响,得到最佳酶解胶原蛋白的工艺条件;并进一步与复合酶水解工艺进行比较,确定海蜇胶原蛋白肽的最优制备工艺。结果表明:胰蛋白酶的最优酶解条件为:温度44℃、p H8.5、料液比0.50 g/m L、酶添加量3.0%和酶解时间4 h;风味蛋白酶的最优酶解条件为:温度44℃、p H7.5、料液比0.56 g/m L、酶添加量4.0%和酶解时间4 h;进一步进行复合酶实验,结果表明采用风味蛋白酶和胰蛋白酶分别在其最适条件下进行先后酶解获得的酶解液的DH和RP最高,分别为(71.56%±0.0076%)和(0.341±0.0101)。
- 李玉芬郑明星叶秀云林娟
- 关键词：胶原蛋白肽胰蛋白酶风味蛋白酶水解度还原力
- 羊栖菜多酚提取工艺优化被引量：6
- 2015年
- 目的对羊栖菜多酚提取工艺进行优化研究。方法通过乙醇溶剂提取羊栖菜中多酚,探讨乙醇浓度、提取时间、料液比以及提取温度等因素对羊栖菜多酚提取的影响,在单因素的基础上,选取乙醇浓度、提取时间和液料比为影响因子,应用Box-Benhnken中心组和设计原理进行3因素3水平实验设计,以羊栖菜多酚的提取量为响应值,运用响应面(response surface methodology,RSM)法对羊栖菜多酚提取工艺进行优化。结果回归模型具有高度显著性,方程对试验拟合较好,可以对羊栖菜多酚提取量进行很好的分析和预测;各因子对提取量的影响大小依次是乙醇浓度>料液比>提取时间,羊栖菜多酚最佳提取条件为乙醇浓度25%、提取时间3 h、液料比30:1(V:m)、提取温度40℃。结论在此条件下羊栖菜多酚的提取率达7.91 mg/g,与预测值8.02 mg/g基本一致。
- 何传辉何传波魏好程王姣熊何健
- 关键词：单因素响应面
- 鲍鱼性腺小肽的制备及抗氧化活性的初步研究被引量：4
- 2014年
- 以雄性皱纹盘鲍性腺为原料,建立了蛋白酶酶解制备抗氧化活性蛋白肽的工艺条件.分别对木瓜蛋白酶和中性蛋白酶进行单因素研究,并以二者的复合酶为工具酶进行响应面分析.结果显示,雄性鲍鱼性腺的最优酶解条件为木瓜蛋白酶与中性蛋白酶的比例为1∶4、pH=6.6、酶解温度为53.7℃、酶解时间为70.4 min.高效液相色谱(HPLC)分析结果表明,酶解液中多肽的分子质量主要分布在1 ku以下.制备的酶解液具有较强的清除自由基效果,清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)的EC50值为6.8 mg/mL,还原力的AC0.5值为12.87 mg/mL.
- 欧柳舒沈建东翁凌陶志鹏张凌晶曹敏杰
- 关键词：性腺酶解条件抗氧化活性肽蛋白酶
- 鲍鱼内脏中天然牛磺酸的提取与检测被引量：10
- 2014年
- 目的：以皱纹盘鲍内脏为原料,优化高纯度牛磺酸的提取工艺,并建立用高压液相色谱检测牛磺酸纯度的方法。方法经水煮、乙醇抽提、蒸发浓缩、沉淀、活性炭处理、结晶等步骤,获得高纯度天然牛磺酸。用高压液相色谱检测牛磺酸纯度的方法为：色谱柱：Discovery C18；流动相：甲醇-0.05 mol/L乙酸钠缓冲液(pH 5.3)(v/v,50：50)；流速：1 mL/min；检测波长：330 nm；柱温：室温。结果该提取工艺能从1 kg 鲍鱼内脏中提取得到天然牛磺酸3.07 g。采用该检测方法,牛磺酸的出峰时间为6.037 min,在1~20μg/mL浓度范围内线性关系良好(R2=0.9999),最低检出限为0.03μg/mL,最低定量限为0.12μg/mL,样品测定的平均回收率为99.44%(RSD=0.25%),方法的精密度和稳定性好(RSD<1%),用该方法检测提取得到的牛磺酸纯度为96.06%。采用红外光谱法(IR)对提取得到的鲍鱼内脏牛磺酸进一步作结构鉴定,发现它与标准品的红外特征吸收峰一致。结论获得了高纯度牛磺酸的提取工艺。本方法精密度和稳定性好,回收率高。
- 章骞郑福来翁凌张凌晶曹敏杰
- 关键词：牛磺酸
- 褐藻胶裂解酶基因的克隆表达及重组酶酶学性质被引量：6
- 2017年
- 【目的】克隆交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)BYS-2的褐藻胶裂解酶基因,实现其在大肠杆菌细胞中异源表达,对分离纯化的重组酶进行酶学性质研究。【方法】以交替假单胞菌BYS-2菌株基因组DNA为模板,克隆得到褐藻胶裂解酶基因alg738,构建重组基因工程菌BL21(DE3)/p ET22b-alg738,诱导表达,表达产物通过Ni-NTA树脂纯化后进行酶学性质研究。【结果】重组酶的最适反应p H为8.0,在p H 6.0-9.0范围内37°C保温1 h仍能保持84%以上的相对酶活力,具有较好的p H稳定性;最适反应温度为45°C,热稳定性实验显示在37°C下保温60 min其残余酶活力仍达66.6%;在5 mmol/L浓度下,Na^+、Mg^(2+)、Mn^(2+)对该酶具有明显的促进作用,Ni^(2+)、Co^(2+)、Cu^(2+)、Hg^(2+)、Zn^(2+)、EDTA、β-巯基乙醇、SDS具有明显的抑制作用。动力学参数Km、Vmax分别为1.11 g/L和0.011 g/(L·min),底物特异性分析表明该重组酶为偏好聚甘露糖醛酸钠(Poly M)裂解作用的双功能酶。【结论】重组褐藻胶裂解酶具有良好的酶学特性,为褐藻胶裂解酶的开发应用打下基础。
- 韩伟林娟谢勇徐凡叶秀云
- 关键词：褐藻胶裂解酶交替假单胞菌克隆表达重组酶酶学性质
- 罗尼氏弧菌Vibrio shilonii BY新琼胶酶基因的克隆、序列分析及表达被引量：1
- 2015年
- 【目的】从海洋来源的罗尼氏弧菌菌株BY中克隆得到一个具有琼胶酶活性的新基因,并对其进行重组表达。【方法】对实验室保藏的产琼胶酶菌株BY进行16S r RNA基因序列分析,并构建系统发育树。根据已报道的琼胶酶基因序列的同源性,设计简并引物,利用降落PCR(Touch-down PCR)及染色体步移技术扩增琼胶酶基因序列全长,对基因序列进行生物信息学分析。将目的基因插入p ET22a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),对重组酶进行表达,利用DNS法测定了重组酶的酶活,对该重组琼胶酶酶学性质进行研究。【结果】克隆得到一条新的琼胶酶基因,命名为Vibrio sp.BY(Gen Bank登录号:AIW39921.1),Vibrio sp.BY基因序列全长2 232 bp,编码744个氨基酸,理论分子量为85 k D,Vibrio sp.BY的氨基酸序列基因库中与已知的琼胶酶氨基酸序列Vibrio sp.EJY3的相似度为86%。发酵液琼胶酶酶活力为71.73 U/m L,证明表达的蛋白为琼胶酶。酶学性质研究表明重组琼胶酶的最适温度及p H分别为50°C和7.0,并且具有较好的稳定性。【结论】利用染色体步移技术克隆得到一条新的琼胶酶基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了重组表达,为琼胶酶的应用奠定了基础。
- 杨光叶秀云林娟李婧玒韩尧跃李仁宽
- 关键词：琼胶酶
- 皱纹盘鲍Hdh-MMP-1基因cDNA的克隆及原核表达被引量：2
- 2016年
- 利用同源克隆方法和c DNA末端快速扩增(RACE)技术,从皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)肌肉组织中克隆得到基质金属蛋白酶-1基因(Hdh-MMP-1)c DNA全长序列(Gen Bank登录号:KR537291)。结果表明,Hdh-MMP-1 c DNA全长2136 bp,其中ORF长度为1551 bp,编码区含有516个氨基酸残基,预测其分子质量为58.94 ku,理论等电点为5.99。Hdh-MMP-1具有MMPs家族典型的N-端前肽区、催化区、铰链区和C-端类血红素结合区。利用SOPMA和SWISS-MODEL软件对该基因编码蛋白质高级结构进行了预测分析。氨基酸序列相似性结果显示,Hdh-MMP-1不仅与多种生物MMP-1基因具有序列相似性,且与某些软体动物和虫类的MMP-14及MMP-19也具有序列相似性。多序列比对结果显示,Hdh-MMP-1与红螺鲍、杂色鲍、美洲牡蛎的MMP-1相似性分别为95.29%、82.35%、38.85%。随后,构建了表达载体p ET28a-cat MMP-1,利用大肠杆菌原核表达系统,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功对该蛋白质催化区进行异源表达。
- 段雪昆杜翠红胡健健蔡秋凤刘光明曹敏杰
- 关键词：皱纹盘鲍DNA克隆原核表达
