国家教育部博士点基金(20092104120005)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
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- 两种神经球制片方法的比较研究被引量：1
- 2010年
- 目的探讨两种神经球制片方法一贴片法和切片法的差异，并初探神经球内部的细胞结构。方法分离培养新生小鼠端脑神经干细胞，收集原代或传代培养7d的神经球用于制片：贴片法是将神经球整体贴于载玻片上，切片法是将神经球用OCT包埋，冷冻切片机切片；通过比较两种制片方法的巢蛋白（nestin）免疫荧光染色的差异说明两种制片方法的差异；用HE染色方法将神经球切片染色，进一步观察其内部结构。结果成功分离培养的新生小鼠端脑神经干细胞在体外培养中形成神经球；贴片法制片神经球表面细胞染色良好，内部细胞不能着色，而且细胞形态显示不清晰．切片法制片神经球表面和内部细胞均能着色，细胞形态显示清晰；HE染色见神经球细胞之间借助突起相互连接，形成错综复杂的细胞网络。结论切片法制片较贴片法制片更有利于神经球的形态学研究：神经球是一个复杂的立体的细胞生长模式。
- 刘欣春朱悦
- 关键词：神经干细胞神经球制片
- 新生小鼠端脑神经干细胞可诱导分化为运动神经元被引量：2
- 2010年
- 目的探讨新生小鼠端脑神经干细胞诱导分化为运动神经元的可能性,并探索新的运动神经元诱导因子。方法用悬浮培养法从新生小鼠端脑分离培养神经干细胞,按诱导因素的不同分为3组:组1为对照组,诱导因素为生长培养基+5%胎牛血清(FBS);组2为诱导因子组,诱导因素为生长培养基+5%FBS+视黄酸(RA)+Shh+联丁酰基环磷酸腺苷(dbcAMP);组3为骨骼肌细胞培养液组,诱导因素为骨骼肌细胞生长过的培养液。用双重免疫荧光方法检测分化细胞的微管相关蛋白2(MAP2)和同源蛋白(HB9)的表达,以验证运动神经元的分化,每组随机选取12个标本计数。结果分化培养中检测到MAP2和HB9共表达的运动神经元,组1的运动神经元分化比例为1%;组2的分化比例为4.7%;组3的分化比例为2.9%。与组1相比有显著的统计学差异。结论新生小鼠端脑神经干细胞能诱导分化为运动神经元;骨骼肌细胞可能分泌运动神经元诱导因子。
- 刘欣春朱悦
- 关键词：端脑神经干细胞运动神经元骨骼肌细胞免疫荧光小鼠
- 靶向大鼠Nogo受体基因的小发夹RNA慢病毒载体的构建及病毒包装被引量：3
- 2012年
- 目的构建靶向大鼠Nogo受体(NgR)的小发夹RNA(shRNA)慢病毒载体并进行病毒颗粒包装及滴度测定。方法设计合成3对针对大鼠NgR及1对非特异性的寡核苷酸单链,退火后得到shNgR双链,克隆入慢病毒载体pGC-LV,行聚合酶链反应(PCR)并测序鉴定重组体;构建NgR过表达载体,双酶切并测序鉴定插入序列正确性;NgR过表达载体和各慢病毒shRNA干扰载体共转染293T细胞后,定量反转录(RT)-PCR及蛋白印迹法筛选有效的慢病毒shRNA干扰载体;重组NgR慢病毒shRNA干扰载体和病毒包装质粒共转染293T细胞,包装并收集病毒颗粒,进行病毒浓缩液滴度检测。结果 PCR及DNA测序结果均显示慢病毒载体pGC-LV-shNgR构建正确;双酶切及测序亦显示NgR过表达载体插入序列正确;定量RT-PCR及蛋白印迹法结果表明所构建的3个慢病毒载体pGC-LV-shNgR均可以有效干扰NgR的表达,其中pGC-LV-shNgR-A干扰效率最高;包装病毒颗粒后,检测病毒浓缩液的滴度为2×107 TU/mL。结论成功构建靶向大鼠Nogo受体的shRNA慢病毒载体并进行病毒颗粒包装,浓缩的病毒液可以用于后续研究。
- 刘欣春朱悦
- 关键词：慢病毒属NOGO受体
- 神经干细胞分化为功能性运动神经元的检测
- 2012年
- 目的观察神经干细胞分化形成的运动神经元能否与骨骼肌细胞形成功能性突触。方法分离培养小鼠神经干细胞及骨骼肌细胞,将神经干细胞与骨骼肌细胞进行共同培养。用免疫荧光方法检测神经干细胞的分化情况及其与骨骼肌细胞形成突触结构的情况,用药理学方法检测突触结构的功能性。结果神经干细胞在与骨骼肌细胞的共同培养中分化为运动神经元样细胞,表达胆碱能细胞标志物,可见乙酰胆碱受体沿神经元轴突排列。药理学实验证明功能性突触的存在。结论神经干细胞在与骨骼肌细胞的共同培养中分化为运动神经元,并能与骨骼肌细胞形成功能性突触结构。
- 刘欣春朱悦
- 关键词：神经干细胞骨骼肌细胞突触分化
