浙江省医药卫生科学研究基金(2007A175)
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 相关作者：吕建新沈蓉蓉郑筱娇岑东高洲更多>>
- 相关机构：温州医学院宁波市鄞州区疾病预防控制中心重庆医科大学更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金宁波市科技计划项目浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HGF基因转染对裸鼠人淋巴瘤移植瘤的促进作用
- 2013年
- 目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)基因转染对裸鼠人淋巴瘤移植瘤的促进作用及其机制。方法:采用HGF基因重组质粒pVITRO2-HGF转染的Raji细胞建立裸鼠皮下人淋巴瘤移植瘤模型,动态监测裸鼠体重和肿瘤大小;8周后获取瘤组织,分别采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)和免疫组化检测移植瘤组织的细胞凋亡和微血管密度(MVD),并进行相关分析。结果:造模成功率为96.7%。HGF转染组的瘤体积明显大于HGF转染+VP-16组(P<0.01)、未转染组与空载体组(P<0.01),HGF转染+VP-16组也大于对照组(P<0.01),未转染组与空载体组间无显著差异(P>0.05)。pVITRO2-HGF转染组凋亡指数显著低于对照组(P<0.01),经VP-16诱导后凋亡增加(P<0.01),但仍低于对照组(P<0.01)。pVITRO2-HGF转染组的MVD显著高于对照组(P<0.01),但经VP-16诱导后血管增生降低(P<0.01),但仍高于对照组(P<0.05),对照组间无显著差异(P>0.05)。结论:HGF基因转染可显著促进裸鼠人淋巴瘤移植瘤的生长,明显抑制凋亡的发生,这一效应可能与其促进肿瘤血管新生和抑制肿瘤细胞凋亡有关。
- 赵行郑筱娇高洲沈蓉蓉岑东裴仁治罗建平吕建新
- 关键词：基因转染淋巴瘤裸鼠异种移植物
- NK4拮抗HGF促进肿瘤细胞凋亡的生物学效应被引量：3
- 2013年
- 观察NK4通过拮抗肝细胞生长因子(HGF)诱导不同肿瘤细胞凋亡,研究其生物学作用及分子机制.以足叶乙甙(VP-16)诱导凋亡,分别或经HGF蛋白、NK4蛋白处理5种肿瘤细胞(B细胞淋巴瘤细胞系Raji、人急性粒细胞白血病细胞系HL-60、宫颈癌细胞系HeLa、前列腺癌细胞系PC-3、非小细胞肺癌细胞系A549),采用流式细胞术(FCM)、吖啶橙(AO)染色法、苏木素-伊红(HE)染色法定量观察5种肿瘤细胞的凋亡情况,并进行相关分析.FCM发现,经VP-16处理5种肿瘤细胞凋亡率均显著高于对照组(P<0.001),而HGF+VP-16组凋亡率明显下降(P<0.01),HGF+NK4+VP-16组细胞凋亡率均明显高于HGF+VP-16组(P<0.05).AO染色和HE染色结果也证实,5种肿瘤细胞经VP-16处理后凋亡率均显著增高(P<0.001,P<0.001),而HGF+VP-16组细胞凋亡率均明显低于VP-16组(P<0.001,P<0.01),HGF+NK4+VP-16组细胞凋亡率均明显高于HGF+VP-16组(P<0.001,P<0.05).此外,发现NK4+VP-16组、HGF+NK4+VP-16组、VP-16组等3组间凋亡率无统计学差异(P>0.05).以上结果提示,HGF蛋白可抵抗凋亡诱导剂VP16的作用,明显降低细胞凋亡;NK4通过竞争性抑制HGF从而促进肿瘤细胞的凋亡,具有潜在的肿瘤治疗价值.
- 郑筱娇高洲沈蓉蓉岑东裴仁治罗建平吕建新
- 关键词：肝细胞生长因子凋亡拮抗
- 肝细胞生长因子的表达、纯化和基本活性研究被引量：1
- 2012年
- 目的通过构建肝细胞生长因子（HGF）基因的重组原核表达载体，转化大肠杆菌，制备HGF重组蛋白并初步证实其活性。方法克隆HGF基因插入载体pET-26b（＋），构建重组原核表达载体pET-26b（＋）-HGF，转化E-coliRosseta（DE3）。IPTG诱导转化菌表达重组蛋白，采用Ni—NTA树脂亲和层析法进行纯化，复性后冷冻干燥。结果HGF基因重组原核表达载体pET．26b（＋）．HGF构建成功。转化pET-26b（＋）-HGF的EcoliRosseta（DE3）以包涵体形式大量表达目的蛋白，占菌体总蛋白的38％，并经Westernblot证实。经Ni—NTA树脂亲和层析法纯化后HGF蛋白纯度约为95％，作用于人非小细胞肺癌细胞系A549细胞发现可促进其增殖、迁徙并抑制凋亡。结论成功构建了HGF基因重组原核表达载体pET-26b（＋）-HGF，转化E-coliRosseta（DE3）后成功表达，纯化复性回复重组HGF蛋白结构，经体外实验证实具有生物学活性。
- 郑筱娇高洲沈蓉蓉赵行岑东罗建平吕建新裴仁治滑世轩
- 关键词：肝细胞生长因子蛋白纯化活性
- 实时荧光定量PCR检测急性白血病的肝细胞生长因子mRNA的表达及其意义被引量：1
- 2008年
- 目的定量检测急性白血病（AL）骨髓单个核细胞（MNCs）的肝细胞生长因子（HGF）mRNA的表达，并探讨其临床意义。方法制备67例初治AL患者的骨髓MNCs，提取定量MNCs的总RNA，并制备cDNA。应用实时荧光定量-PCR（FQ-PCR）检测HGF mRNA在AL的表达。结果HGF mRNA在AL组的表达显著高于对照组（6．936±1．613，0．407±0．170，P〈0．001），而急性髓系白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）的表达差异无统计学意义（7．127±1．911，6．635±0．934，P〉0．05）。在AL中，M5呈显著强表达（9．998±1．454），高于M2、M3、M4、L1、L2和L3表达（P〈0．001）；而后者间表达差异无统计学意义（P〉0．05）。HGF mRNA在性别、年龄间的表达差异也无统计学意义（P〉0．05）。缓解组HGF mRNA的表达明显低于未缓解组（6．393±1．165，8．041±1．848，P〈0．005）。结论HGF mRNA在AL组与对照组、AL亚型间的表达存在差异，但在AML与ALL、AL患者的性别、年龄间的表达无差异。且低表达者疗效较好，提示HGF mRNA可能是AL诊治的又一理想指标。
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- 关键词：白血病肝细胞生长因子聚合酶链反应
- 实时荧光定量PCR检测急性白血病的肝细胞生长因子mRNA的表达及其临床意义
- 目的定量检测急性白血病(AL)骨髓单个核细胞(MNCs)的肝细胞生长因子(HGF)mRNA的表达,并探讨其临床意义。方法制备67例初治AL患者的骨髓MNCs,提取定量MNCs的总RNA,并制备cDNA。应用实时荧光定量P...
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- 文献传递
- 肝细胞生长因子基因转染对人淋巴瘤细胞凋亡的影响被引量：2
- 2012年
- 探讨肝细胞生长因子(HGF)基因转染人淋巴瘤细胞系Raji细胞后,拮抗足叶乙甙(VP-16)诱导细胞凋亡的研究。将三种细胞:未转染Raji细胞、空载体pVITRO2-mcs转染细胞和HGF基因转染细胞,分成正常对照组和经VP-16处理的药物组。采用Western blot法验证HGF蛋白的表达;CCK-8法检测诱导Raji细胞凋亡的药物浓度;通过透射电镜、流式细胞术、吖啶橙(AO)染色、苏木精–伊红(HE)染色等方法观察Raji细胞的凋亡情况,并进行相关分析。结果显示:Western blot法验证了HGF蛋白质的表达;CCK-8法显示100μg/mL足叶乙甙可明显抑制Raji细胞增殖;透射电镜下可发现典型的凋亡细胞;流式检测结果表明:给药组与正常组相比,三组细胞的凋亡率明显升高(P<0.01),提示VP-16具有诱导细胞凋亡的作用;但给药组间:HGF基因转染组凋亡率明显低于未转染组(P<0.05)和空载体pVITRO2-mcs转染组(P<0.05),提示HGF基因转染可明显抑制VP-16诱导的Raji细胞的凋亡,AO染色和HE染色结果也同样提示HGF具有拮抗VP-16诱导的细胞凋亡效应。
- 沈蓉蓉郑筱娇岑东赵行滑世轩裴仁治吕建新涂植光
- 关键词：肝细胞生长因子基因转染凋亡
- NK4竞争性阻断肝细胞生长因子／Met途径抑制人Raji淋巴瘤移植瘤的增殖效应被引量：1
- 2014年
- 目的观察NK4对裸鼠人Raji淋巴瘤移植瘤增殖的抑制作用，探讨其分子机制。方法构建肝细胞生长因子（HGF）基因转染的裸鼠人Raji淋巴瘤移植瘤模型。成瘤后经尾静脉连续4周注射NK4蛋白（每只50μg／a），动态监测裸鼠体质量和瘤体生长。8周后取瘤组织，采用即时荧光定量PCR检测移植瘤HGFmRNA、c—MetmRNA的表达，分别采用末端转移酶标记技术（TUNEL法）和免疫组织化学检测移植瘤组织的凋亡系数（AI）和微血管密度（MVD），进行综合分析。结果成功构建裸鼠移植瘤模型。各组裸鼠体质量均下降，以NK4蛋白组最大，但组间差异无统计学意义（P〉0．05）。HGF基因转染组瘤体积大于对照组（P＜0．01），对照组间差异无统计学意义（P＞0．05），注射NK4蛋白后瘤体积均明显减小（P〈0．01）。注射NK4蛋白后，HGF基因转染组HGFmRNA、c-MetmRNA表达增强（P＜0．01）。HGF基因转染组AI（33．5％±12．3％）显著低于对照组（89．1％±22．3％，81．9％±27．O％，P＜0．05），但NK4蛋白注射后增加明显（119．1％±18．9％，P＜0．01）。HGF基因转染组MVD（28．5±2．0）较对照组（12．2±1．4，13．84-1．3，P＜0．01）为高，但NK4蛋白注射后MVD降低（15．54±2．5，P＜0．01）。结论NK4可显著抑制HGF基因转染的裸鼠人Raji淋巴瘤移植瘤的生长，其可能经竞争性阻断HGF／Met信号转导途径而促进肿瘤细胞凋亡并抑制瘤内血管新生而发挥其效应。
- 高洲郑筱娇沈蓉蓉赵行岑东罗建平滑世轩裴仁治吕建新
- 关键词：肝细胞生长因子淋巴瘤
