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水稻OsRacD蛋白G15V、T20N点突变对其细胞定位的影响及其与靶蛋白的相互作用被引量：2: 2009年; OsRacD是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期育性转换过程.为研究该蛋白的作用机制,采用重叠延伸PCR方法,分别在其GTPase结构域中引入G15V、T20N点突变,模拟GTP和GDP结合形式的OsRacD.进一步构建了受控于CaMV35S的与绿色荧光蛋白融合表达的双元植物表达载体;采用农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞,在荧光显微镜下观察蛋白在活细胞内定位的特点.结果显示,野生型蛋白在细胞质和细胞膜都有分布,组成型激活的蛋白主要分布在细胞膜上,而失活型蛋白则大都集中到细胞核周围.蛋白相互作用的酵母双杂交体系分析显示,OsRacD及其2个突变体具有不同的靶蛋白结合特性.研究证实,水稻OsRacD蛋白G15V和T20N点突变不仅影响其在活细胞内的定位,而且也影响了与靶蛋白的相互作用.说明处于不同鸟苷酸结合状态的OsRacD具有不同的胞内定位方式,可能通过结合不同的靶蛋白,引发不同的细胞应答事件.; 梁卫红刘肖飞毕佳佳吕超慧彭威风; 关键词：定点突变绿色荧光蛋白蛋白相互作用

水稻促分裂原活化蛋白激酶家族的研究进展被引量：7: 2009年; 促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是生物体内信号转导途径MAPK级联反应的重要组分,通过传递胞内外信号,介导生物及非生物胁迫反应、激素反应、调控细胞分化和发育过程。对水稻(Oryza sativa L.)MAPK家族的结构、作用机制、分类以及在抗逆应答、生长发育中的作用进行了综述,为水稻MAPK的深入研究和应用提供参考。; 毕佳佳梁卫红; 关键词：水稻 MAP激酶

水稻OsRhoGDI2基因RNA干扰载体的构建: 2011年; 水稻OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的小G蛋白Rho家族成员OsRacD互作蛋白的编码基因,为了研究OsRhoGDI2与OsRacD的相互作用及其在水稻发育中的功能联系,本研究基于序列比对的提示,选择了OsRhoGDI2基因长度为285 bp的特异区段,分别以正向和反向插入中间载体pKANNIBAL中,并亚克隆到受控于CaMV 35S启动子的植物表达载体pART27上,获得了OsRhoGDI2基因的RNA干扰载体,为利用水稻转基因技术鉴定该基因在水稻发育中的功能,以及与OsRacD基因的功能联系奠定基础.; 彭威风梁卫红李莉; 关键词：水稻 RNA干扰载体

水稻OsRhoGDI2蛋白生物信息学分析及亚细胞定位研究被引量：3: 2010年; 水稻OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的小G蛋白Rho家族成员OsRacD的互作蛋白的编码基因,为研究OsRhoGDI2和OsRacD的相互作用特点和调控机制,对OsRhoGDI2进行了生物信息学分析和亚细胞定位检测。通过生物信息学方法比较了二者编码蛋白的理化性质、修饰位点和亚细胞定位特点,并进一步构建了受控于CaMV35S启动子的与绿色荧光蛋白融合表达的OsRhoGDI2基因的双元植物表达载体,采用农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞,通过荧光显微镜观察了融合蛋白在活细胞内分布特点。OsRhoGDI2和OsRacD具有一些相似的理化特性和翻译后修饰位点,在洋葱表皮细胞中,OsRhoGDI2主要分布在细胞质、细胞膜和细胞核。OsRhoGDI2与OsRacD在蛋白理化特性和胞内分布上存在一定的相关性,OsRhoGDI2蛋白可能在调控OsRacD的胞内分布和活性中发挥重要作用。; 彭威风梁卫红; 关键词：植物表达载体亚细胞定位

T20N点突变对水稻OsRacD蛋白GTP酶活性的影响被引量：1: 2010年; OsRacD是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,其功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期的育性转换。在序列同源性比对和蛋白保守结构域分析的基础上,采用重叠延伸PCR方法在水稻OsRacD基因的第一个高度保守的基序G1区引入T20N点突变,模拟GDP结合形式的OsRacD。进一步构建了与组氨酸标签融合的原核表达载体,原核表达和纯化了野生型和突变型OsRacD蛋白,并通过Western blot证实了融合蛋白表达和纯化的正确性。纯化蛋白的GTP酶活性检测结果显示,突变后的OsRacD蛋白GTP水解活性显著降低,提示OsRacD在T20N突变前后具有不同的生化特性。; 刘肖飞梁卫红; 关键词：点突变原核表达和纯化

水稻促分裂原活化蛋白激酶基因OsMPK14的克隆及表达分析被引量：5: 2010年; 促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是生物体内信号转导的重要组分,受多种生物及非生物胁迫的刺激活化。利用RT-PCR方法克隆了水稻促分裂原活化蛋白激酶基因OsMPK14的cDNA序列(GenBank登录号为GQ265780)。该序列全长1660bp,包含1个1629bp的开放阅读框,编码蛋白由542个氨基酸组成,包含典型的蛋白激酶结构域及磷酸化位点TDY基序。序列比对和分析显示,OsMPK14基因位于水稻第5染色体上,其编码区由9个外显子和8个内含子组成。采用半定量RT-PCR技术,检测了光照、低温、高盐、干旱和脱落酸对该基因在水稻地上部分和根中表达的影响。结果显示高盐、低温、脱落酸都能上调其表达,而干旱对其表达具有微弱的抑制效应,光照可以降低该基因在水稻地上部分的表达,提高在根中的表达。基因可能在水稻非生物胁迫的应答中具有重要作用,其表达受多种因素调控。; 梁卫红毕佳佳彭威风张帆石宏浩李莉; 关键词：水稻基因克隆逆境胁迫

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河南省基础与前沿技术研究计划项目(092300410099)