云南省科技厅科研基金(2007CA007)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 相关作者：李立张升宁王谦李晓延刘剑更多>>
- 相关机构：昆明医学院昆明市第一人民医院云南省第一人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 克隆筛选纯化在大鼠脂肪源性干细胞原代培养中的作用
- 2011年
- 背景:研究中发现从成体的脂肪组织中可以分离出一种间质干细胞,即脂肪源性干细胞,但传统的分离方法仍存在一些问题需要改进。目的:在脂肪源性干细胞传统的分离方法的基础上进行改进,克隆筛选纯化脂肪源性干细胞。方法:消化离心法分离Lewis大鼠脂肪源性干细胞,有限密度稀释法克隆化及条件培养基筛选,进行原代培养,以克隆筛选的脂肪源性干细胞为实验组,未克隆筛选的脂肪源性干细胞为对照组,观察细胞形态,对比生长曲线、倍增时间,流式细胞仪鉴定脂肪源性干细胞表面标记CD49d、CD29、CD44。结果与结论:经克隆筛选的脂肪源性干细胞与未经克隆筛选的脂肪源性干细胞相比,前者形态均一,生长力旺盛,倍增时间短,多代培养后生长曲线无明显改变,通过流式细胞仪鉴定,实验组与对照组在3～6代之间均表达表面标记CD49d、CD29、CD44。结果证实克隆筛选的纯化方法是脂肪源性干细胞原代培养的有效、经济的纯化方法。
- 刘剑李立冉江华张升宁邵建春
- 关键词：脂肪源性干细胞原代培养流式细胞仪
- 大鼠原位肝移植术后早期死亡的原因分析及处理策略被引量：3
- 2014年
- 目的通过建立大鼠原位肝移植（orthotopic liver transplantation,OLT）模型,分析术后24 h内大鼠死亡的原因,并探索改进方法。方法采用改良Kamada二袖套法制作大鼠OLT模型300只,记录OLT手术各阶段所用的时间及大鼠术后的生存时间。按生存时间将大鼠进行分组：术中死亡组、〈6 h组、6-24 h组及〉24 h组。比较4组大鼠OLT中各手术阶段的时间,并分析术后大鼠生存时间短于24 h的原因,以探索改进策略。结果300只大鼠OLT模型中,于术中死亡37只,占12.33%;术后6 h内死亡51只,占17.00%;术后6-24 h内死亡76只,占25.33%;术后24 h时仍存活136只,占45.34%。〈6 h组大鼠的前3位死因依次为术中失血过多、术后出血及血管栓塞,分别占27.45%（14/51）、27.45%（14/51）及15.69%（8/51）;6-24 h组大鼠的前3位死因依次为血管狭窄、术后出血及肺水肿,分别占27.63%（21/76）、21.05%（16/76）及19.74%（15/76）。4组大鼠的冷缺血时间和无肝期均不同或不全相同（P〈0.05）,术中死亡组的冷缺血时间长于其余3组（P〈0.05）,且〉24 h组的冷缺血时间短于〈6组和6-24组（P〈0.05）;术中死亡组的无肝期长于其余3组（P〈0.05）。结论导致OLT早期死亡的原因有很多,无肝期及冷缺血时间过长、术中及术后出血、血管栓塞、血管狭窄及肺水肿均是关键因素,对于引起上述原因操作的改进有助于提高大鼠OLT的建模成功率及质量。
- 刘剑李立张升宁李来邦王晓川
- 关键词：原位肝移植
- 输注同系鼠骨髓间充质干细胞对大鼠移植肝的抗排斥作用观察
- 2009年
- 目的观察输注与受体同系鼠骨髓间充质干细胞对大鼠移植肝脏的抗排斥作用。方法实验鼠随机分为A、B、C组。A组仅行DA-Lewis大鼠原位肝移植,B组行DA-Lewis大鼠原位肝移植术后予环孢素,C组行DA-Lewis大鼠原位肝移植同期输注Lewis大鼠骨髓间充质干细胞。结果术后C组血清ALT、AST、TBIL较A组显著降低(P均<0.05),与B组相近;B、C组IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ均升高(P均<0.05),但低于A组(P均<0.05);B、C组移植肝仅呈急性轻度排斥反应,A组呈急性重度排斥反应;B、C组生存时间长于A组(P均<0.05)。结论大鼠肝移植后输注与受体同系鼠骨髓间充质干细胞能减轻移植肝的排斥反应。
- 王谦李立李晓延陈旭明
- 关键词：干细胞骨髓间充质干细胞肝移植排斥反应
- 体外诱导脂肪源性干细胞向类肝细胞的定向分化
- 2011年
- 背景:用脂肪源性干细胞治疗肝脏疾病之前,如何建立有效稳定的肝细胞分化诱导方案,纯化并快速扩增性能稳定的类肝细胞等问题亟待解决。目的:建立大鼠脂肪源性干细胞转化为类肝细胞的程序化诱导体系。方法:分离纯化Lewis大鼠脂肪源性干细胞,流式细胞仪鉴定其表面标志,分3个阶段加入含有肝细胞生长因子、成纤维细胞生长因子4、酸性成纤维细胞生长因子、制瘤素M细胞因子的诱导培养体系,使脂肪源性干细胞向肝细胞转化。结果与结论:大鼠脂肪源性干细胞诱导7,14,21d后,细胞阳性表达ALB、AFP、CK18mRNA,表达量随诱导时间延长而增强,类肝细胞具有白蛋白合成功能。氨代谢和尿素的合成功能在9～12d出现并持续存在。结果表明脂肪源性干细胞体外分段诱导可成功转化为类肝细胞。
- 刘剑李立冉江华张升宁邵剑春
- 关键词：脂肪源性干细胞分化类肝细胞
- 输注同基因骨髓间充质干细胞联合脾组织移植诱导肝移植大鼠的免疫耐受被引量：6
- 2010年
- 背景:有研究显示在免疫抑制剂的作用下,同种脾脏细胞移植可诱导免疫耐受,使移植物长期存活。另有研究还显示异种骨髓间充质干细胞移植可延长移植肝存活时间。目的:观察输注与受体同基因骨髓间充质干细胞联合脾组织移植对诱导大鼠肝移植后免疫耐受的作用。方法:将受体Lewis大鼠以数字表法随机分为4组:急性排斥组行DA-Lewis大鼠原位肝移植;环孢素A组行DA-Lewis大鼠原位肝移植后灌胃给予环孢素A;干细胞组行DA-Lewis大鼠原位肝移植,同期输注异体Lewis大鼠骨髓间充质干细胞;脾组织移植组在干细胞移植组的基础上同期移植DA大鼠脾组织。观察各组生存期,肝功能情况,血清细胞因子水平,嵌合体的形成情况及肝脏病理变化。结果与结论:与其他各组相比,脾组织移植组大鼠存活时间明显延长,术后血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、总胆红素、白细胞介素2、干扰素γ水平明显降低(P<0.05),白细胞介素6、白细胞介素10明显升高(P<0.05),30d后受体脾脏中供体阳性细胞明显升高(P<0.05)。肝脏病理显示,环孢素A组和干细胞组移植肝仅呈急性轻度排斥反应,急性排斥组呈急性重度排斥反应,脾组织移植组未见明显排斥反应。说明大鼠肝脏、脾组织移植后输注同基因骨髓间充质干细胞可减轻移植肝的排斥作用,甚至诱导免疫耐受。
- 王谦李立李晓延陈刚
- 关键词：嵌合体免疫耐受骨髓间充质干细胞肝移植
