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枯草芽孢杆菌CG24发酵条件优化被引量：10: 2013年; 枯草芽孢杆菌CG24是一株烟草野火病菌拮抗菌,本文采用单因素实验和响应面法对该菌株发酵条件进行了优化。结果表明CG24菌株在培养温度32℃初始pH 7.5装液量50 mL/150 mL和接种量4%的NA培养液中振荡培养28 h,其代谢产物的抑菌活性作用最为显著。通过单因素实验确定了影响菌株CG24生长的培养基主要因素为葡萄糖、酵母膏和氯化钙,对3个因素进行响应面优化分析,确定最优发酵培养基为:葡萄糖40 g/L酵母膏7.55 g/L氯化钙0.72 g/L,抑菌圈直径比优化前提高了25.72%,为该菌株以后的扩大培养和微生态制剂的开发应用奠定了基础。; 孙沙沙夏振远吴德喜; 关键词：枯草芽孢杆菌烟草野火病

灯盏花总黄酮和抗光氧化能力对外源茉莉酸的响应被引量：24: 2011年; 研究用不同浓度的外源茉莉酸处理灯盏花叶片,测定叶片黄酮和叶绿素含量及抗光氧化能力的变化.结果显示:茉莉酸处理后的3 d内黄酮含量变化不大,第6天则显著升高;0.5,1.0,1.5 mmol/L 3个浓度的茉莉酸处理组黄酮含量均高于对照,且1.5 mmol/L处理组黄酮含量明显比0.5和1.0 mmol/L处理组低.茉莉酸未对灯盏花光合作用造成损伤,但叶绿素b含量下降;类胡萝卜素含量都有所增加;叶绿素a在茉莉酸浓度为0.5 mmol/L时增加,而浓度为1.0和1.5 mmol/L时下降.0.5 mmol/L处理组抗光氧化能力下降,1.0,1.5mmol/L处理组抗光氧化能力增强.因此,可以把外源茉莉酸应用于灯盏花的人工种植,提高灯盏花有效成分含量.; 姜维苏文华敖金成崔凤涛; 关键词：灯盏花茉莉酸次生代谢光合作用

烟草可培养内生细菌16S rDNA的PCR-RFLP和系统发育分析被引量：6: 2012年; 为了解烟草内生细菌的多样性,采用改良的NA培养基和稀释平板法从不同生长期的烟草的根、茎、叶中分离得到127株内生细菌。利用细菌16S rDNA特异引物扩增得到16S rDNA的部分片段,长约700 bp,分别用内切酶MspⅠ、HaeⅢ、AfaⅠ、HinfⅠ对扩增产物进行限制性酶切。16S rDNA PCR-RFLP分析中,在100%相似性水平处,除了cj23、ty16、cg23、wy6、cj25、wy13、my23、ty7、cj14、cg25、cg2、cj13、my11,my27单独成群外,其余菌株分为15个分类操作单元,其中Otu1、Otu2,Otu27类群最大,分别包括了27、18,26个菌株。对29个代表菌株16S rDNA序列系统发育分析表明,这些菌株主要分布于芽孢杆菌(Bacillus)分支,其余菌株分布于葡萄球菌属(Staphylococcus)、微杆菌属(Microbacterium)、单胞菌属(Sphingomonas)、中华根瘤菌属(Sinorhizobium)、土壤杆菌属(Agrobac-terium)、根瘤菌属(Rhizobium)、纳西杆菌属(Naxibacter)、贪铜菌属(Cupriavidus)、寡养食单胞菌属(Stenotrophomonas)、不动杆菌属(Acinetobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)、肠杆菌属(Enterobacter)、泛菌属(Pantoea)、克雷伯菌属(Klebsiella)、Bifissio属系统发育分支。通过Shannon多样性指数对不同生长期分离到的菌株进行多样性分析和比较,结果表明团棵期叶片中分离到的内生细菌多样性最大,随后是旺长期,苗期次之,成熟期最小。; 陈泽斌夏振远雷丽萍陈海如; 关键词：烟草内生细菌 RFLP

烟草内生促生细菌的筛选及在漂浮育苗中的应用效果被引量：7: 2013年; 通过培养皿发芽试验,从127株烟草内生细菌中初步筛选出4株能提高烟草种子发芽率、根长、根体积的内生细菌。对这4个菌株进行了漂浮育苗试验复筛,发现它们对烟苗的生长具有明显促进作用。其中促生作用最好的wy2菌株使烟苗茎直径增加了33.3%,根长增加了49.2%,与对照相比差异显著。通过16S rDNA序列同源性分析将wy2菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。; 陈泽斌杨跃华夏振远雷丽萍陈海如; 关键词：烟草内生细菌促生育苗解淀粉芽孢杆菌

烟草内生细菌分离方法的优化研究被引量：23: 2014年; 用研磨组织稀释分离法与表面消毒有效性评价相结合的方法确定了适宜烟草组织的表面消毒方法以及内生细菌分离培养基。采用1%次氯酸钠浸泡5 min,再用75%酒精浸泡2分钟能够100%去除表面附生菌,并且分离得到更多的内生细菌。研究比较了TSA、NA、PDA、LB四种常用的细菌分离培养基在分离烟草内生细菌中的差异,其中TSA和NA培养基分离得到的内生细菌数量较高,TSA培养基从烟草根、茎、叶中分离出的内生细菌数量分别为5.18 log cfu/g.fw、2.17 log cfu/g.fw、4.69 log cfu/g.fw;NA培养基分别为5.01 log cfu/g.fw、1.81 log cfu/g.fw、4.93 log cfu/g.fw。对分离得到的127株内生细菌进行16S rDNA序列测定表明,TSA和NA培养基分离得到的内生细菌种类最多,其中TSA培养基分别从根、茎、叶中分离到9、7、13种内生细菌;其次是NA培养基,分别从根、茎、叶中分离到8、6、10种内生细菌。结果表明,采用TSA和NA培养基分离烟草内生细菌,可以达到较为理想的分离效果。; 陈泽斌代方平寸林江李啟陈艳芳许石剑方飞黄杨; 关键词：烟草内生细菌

非培养方法解析烟草根部内生细菌的群落结构被引量：13: 2012年; 为了解烟草根部内生细菌多样性,采用改进的CTAB法提取烟草根部总DNA,利用细菌16 S rDNA基因通用引物对烟草根总DNA进行16 S rDNA扩增,构建烟草根部内生细菌16 S rDNA克隆文库;挑取具有不同酶切谱型的克隆进行测序、比对并构建16 S rDNA基因系统发育树。构建的烟草根部内生细菌16 S rDNA克隆文库中,155个克隆分属于36个不同的分类单元,Blast结果表明,大部分克隆与已知细菌的16 S rDNA序列相似性较高,分别属于变形菌门(Proteobacteria)的Alpha、Gamma、Beta亚群,放线菌门(Actinobacteria),拟杆菌门(Bacteroidetes),厚壁菌门(Fir-micutes)中的肠杆菌属(Enterobacter)、不动杆菌属(Acinetobacter)、寡养食单胞菌属(Stenotrophomonas)、假单胞菌属(Pseudomonas)、嗜甲基菌属(Methylobacillus)、食酸菌属(Acidovorax)、芽孢杆菌属(Bacillus)等16个属,其中13.5%的克隆序列与非可培养细菌(Uncultured bacteria)的相似性在93%～99%之间,假单胞菌属细菌是烟草根部内生细菌的优势种群。这些研究结果说明烟草根部存在较为丰富的内生细菌系统发育多样性,并且潜藏着未知的内生细菌资源。; 陈泽斌夏振远雷丽萍刘飞陈海如钟永丽; 关键词：内生细菌烟草微生物多样性

烟草黑胫病拮抗内生细菌的分离、鉴定及防效测定被引量：12: 2011年; 采用常规分离方法从健康烟株的根、茎、叶中分离得到内生细菌269株,从中筛选出7株对烟草黑胫病病原菌具有明显拮抗作用的菌株,它们的抑菌半径达到6 mm以上。菌株05-4004、05-2501培养液滤液中存在具有明显抑菌作用的活性成分。致病性试验中,发现菌株701-1在人工接种条件下有致病能力或潜在致病性,选择余下6株拮抗细菌进行了温室盆栽试验,以05-4004、05-2002两株烟草内生细菌对烟草黑胫病的防效最好,分别为46.6%、45.2%。促生试验中,NB培养液和清水对照的种子发芽率分别为84.3%、82.7%,而经过05-2002和05-4004除菌滤液浸种后,发芽率分别提高到93.5%和93.7%。经过05-4004、05-2002灌根处理后,株高、叶长、叶宽、有效叶片数、叶面积明显增加。证明菌株05-2002、05-4004同时还具有一定的促生作用。以细菌16S rDNA同源性为基础的系统发育分析表明05-4004和Bacillus pumilus(EU366363)、Bacillus safensis(AY030327)处于同一分支,相似性为100%,05-4004鉴定为芽孢杆菌属。; 陈泽斌夏振远雷丽萍陈海如; 关键词：内生细菌拮抗

烟草可培养内生细菌的分离及多样性分析被引量：24: 2011年; 采用稀释平板法,从健康烟草的根、茎、叶组织中分离到267株内生细菌。利用细菌菌落表征性状和16S rRNA序列对这些分离物进行了多样性分析。通过数值分析比较了8个菌落形态表征性状,以类平均连锁聚类法的方式进行聚类分析,在2.15的水平上可分成5个聚类群和56个亚群。16S rDNA序列系统发育分析表明267株分离物可分为21个类群。研究表明同一菌落形态类型的菌株在系统发育树中不一定聚为一类,菌落形态分类与分子生物学方法分类结果不完全一致。经克隆测序分析表明,这267株分离物分别与GenBank中6类细菌中的21个已知种相似性达到98%99%。其中芽孢杆菌属(Bacillus)细菌是烟草可培养内生细菌的优势种群。; 陈泽斌夏振远雷丽萍陈海如; 关键词：烟草内生细菌微生物多样性

防治烟草黑胫病有益内生细菌的筛选及其抑菌作用被引量：14: 2013年; 为筛选具有防病作用的植物内生细菌,采用常规分离方法从不同生长期的健康烟株的根、茎、叶中分离得到内生细菌127株,平板对峙培养法从中筛选出12株对烟草黑胫病菌具有明显拮抗作用的菌株,它们的抑菌带宽度达到5mm以上。对其进行了皿内拮抗试验、发酵液抑菌试验和温室防病试验。有8个菌株培养液滤液中存在具有抑菌作用的活性成分。其中wy2、wy11、wy4培养滤液的抗菌活性最强(>30%),它们的细菌培养滤液能破坏病原菌菌丝形态,使烟草黑胫病菌菌丝细胞膨大、细胞壁破损、原生质外渗、菌体崩溃、生长缓慢。温室盆栽试验表明wy11对烟草黑胫病的防效最好,为51.7%。此外,内生细菌wy11和cj17发酵液灌根对烟株具有一定促生作用,能提高烟株茎围、叶长、叶宽。以细菌16S rDNA同源性为基础的系统发育分析表明防病促生内生细菌wy11与B.amyloliquefaciens(AB255669)处于同一分支,相似性为99%,初步将菌株wy11鉴定为解淀粉芽孢杆菌B.amyloliquefaciens。; 陈泽斌夏振远雷丽萍陈海如; 关键词：烟草黑胫病菌内生细菌生物防治促生作用

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国家自然科学基金(30860017)

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