国家自然科学基金(30860039)
- 作品数：25 被引量：52H指数：4
- 相关作者：卢晟盛卢克焕杨小淦许惠艳陆阳清更多>>
- 相关机构：广西大学广西亚热带生物资源保护利用重点实验室西藏农牧学院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 广西巴马小型猪附睾成纤维细胞的分离培养和鉴定被引量：2
- 2010年
- 为了建立广西巴马小型猪附睾成纤维细胞体外培养体系,利用微量液体组织块贴壁法原代培养分离附睾成纤维细胞,进行常规传代培养、冷冻和复苏,并通过接触抑制和解除抑制研究细胞的增殖能力,以及通过免疫荧光对其进行鉴定。结果表明,该法成功分离获得广西巴马小型猪附睾成纤维细胞,并可以大量传代和冷冻,目前已经传至55代以上,生长良好;冷冻复苏和接触抑制解除后仍可以正常培养和传代;细胞免疫荧光检测,波形蛋白表达阳性。可见,通过微量液体组织块贴壁法能成功分离得到广西巴马小型猪附睾成纤维细胞,在体外能稳定培养和传代。
- 王献伟王宪梁世忠邹知明卢晟盛卢克焕
- 关键词：广西巴马小型猪附睾成纤维细胞
- 显微操作时间对猪ICSI胚胎早期发育的影响被引量：1
- 2010年
- 为了进一步优化现有的猪卵胞质内精子注射(ICSI)体系,探讨了ICSI操作时间对猪ICSI胚胎早期发育的影响情况。结果表明,囊胚形成率随着ICSI操作时间的延长而呈现明显下降趋势,其中卵母细胞在体外4 h内完成ICSI组的囊胚形成率(5.90%)显著低于其他3个处理(P<0.01)。可见,ICSI操作时间越长,其胚胎早期发育率越低。
- 罗龙兴秦祖兴梁世忠邹知明卢晟盛卢克焕
- 关键词：卵母细胞
- 陆川猪耳部成纤维细胞的体外培养被引量：3
- 2011年
- 本研究建立陆川猪耳部成纤维细胞的体外培养体系,采用组织块培养法可以获得陆川猪耳部成纤维细胞。用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA消化液消化细胞、用含有10%FBS的DMEM对细胞进行培养,能很好的支持陆川猪耳部成纤维细胞的生长。传3代后,观察到培养的细胞形态逐渐均一,为典型的成纤维细胞,绝大部分呈梭形或不规则三角形。细胞生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势。用间接免疫荧光法对细胞类型进行鉴定。抗波形蛋白免疫荧光染色显示为阳性,抗角形蛋白免疫荧光染色为阴性。结果,分离得到的细胞为成纤维细胞。结果表明,用组织块培养法,可以培养出陆川猪耳部成纤维细胞。
- 秦小娥胡林林卢晟盛卢克焕
- 关键词：陆川猪组织块培养间接免疫荧光
- 人神经母细胞瘤细胞异种克隆胞质受体的选择
- 2012年
- 本研究检测人神经母细胞瘤细胞-水牛和人神经母细胞瘤细胞-猪重构胚胎的体外发育潜能,以期建立人神经细胞母细胞瘤细胞的异种治疗性克隆模型,为进一步研究人癌症发生过程中的表观遗传学修饰机制及分离得到正常的人类胚胎干细胞奠定基础。分别以水牛颗粒细胞和人神经母细胞瘤细胞为供体,水牛卵母细胞为受体构建克隆胚胎,然后检测这2种重构胚胎的体外发育效率;再以猪卵母细胞为胞质受体,同样以上述2种体细胞为供体细胞构建重构胚胎。结果显示,人神经母细胞瘤细胞-水牛重构胚胎囊胚发育率显著低于水牛同种克隆胚胎的(1.1%∶12.1%,P<0.05),而融合率(83.7%∶79.4%,P>0.05)和卵裂率(55.8%∶58.2%,P>0.05)无显著差异。但是,当以猪卵母细胞为受体胞质时,人-猪重构胚胎卵裂率显著低于水牛-猪重构胚胎(43.7%∶89.8%,P<0.05),但重构胚胎融合率和囊胚率差异不显著(85.8%∶82.5%,0∶1.4%,P>0.05)。结果表明,人神经母细胞瘤细胞-水牛和人神经母细胞瘤细胞-猪异种重构胚胎可以在体外发育,尽管其囊胚发育率相对比较低。
- 刘红波吕培茹王献伟杨小淦秦小娥宁淑芳韩晓慧陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：水牛人神经母细胞瘤细胞异种核移植
- 食蟹猴-猪异种体细胞核移植的初步研究被引量：1
- 2011年
- 采用食蟹猴耳部成纤维细胞作为核供体利用电融合法构建猴-猪异种核移植胚胎,研究其核重编机制并寻找适宜的培养基,初步建立食蟹猴-猪异种核移植体系。结果显示:(1)重构胚胎激活后3 h,供体核的大小基本不发生变化,但在激活后6 h大部分形成膨大的类原核。(2)食蟹猴-猪异种核移植胚胎融合率为74.2%,有70.5%的重构胚胎发生卵裂,29%的卵裂胚胎发育到桑椹胚阶段。(3)在NCSU-23+10%FCS和TCM199+10%FCS培养基中,重构胚突破4-细胞阻滞发育到8-细胞以上的比例分别为23.5%和17.0%,在NCSU-23培养基中的为19.9%,但是只有在NCSU23+10%FCS和TCM199+10%FCS培养基中重构胚胎发育到囊胚阶段(1.4%vs1.1%),尽管差异不显著。本研究首次建立了食蟹猴-猪异种体细胞克隆体系。
- 吕培茹刘红波左二伟杨小淦宁淑芳韩晓慧陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：食蟹猴异种核移植培养基
- FSH+LH添加方式、半胱氨酸、EGF对猪IVM卵母细胞早期孤雌发育的影响被引量：4
- 2010年
- 为探讨IVM液中FSH+LH添加方式、半胱氨酸和表皮生长因子(EGF)不同浓度对猪IVM卵母细胞早期孤雌发育的影响,将在不同成熟体系中IVM44 h后的卵母细胞经化学激活后放入NCSU-23中培养,分别于第2、7天统计分裂率和囊胚发育率。结果表明:①IVM液添加有FSH+LH且在培养22 h后更换添加有FSH+LH的IVM液继续培养22 h,其分裂率(83.76±9.95)%和囊胚发育率(23.49±7.74)%显著高于添加FSH+LH连续培养44 h、中间不换液的处理(P<0.05);②IVM液中添加1.2 mmol/L半胱氨酸的囊胚发育率(28.13±10.9)%显著高于添加0、0.3、0.6 mmol/L半胱氨酸的处理,差异显著(P<0.05);③IVM液中添加10 ng/mL EGF的囊胚发育率(23.49±7.74)%显著高于其他浓度处理(P<0.05)。可见:在该研究条件下,IVM液添加有FSH+LH且在培养22 h后更换添加有FSH+LH的IVM液继续培养22 h,并添加1.2 mmol/L半胱氨酸、10 ng/mL EGF,有利于促进猪IVM卵母细胞早期孤雌发育。
- 许惠艳苏克同何若钢梁世忠卢晟盛卢克焕
- 关键词：卵母细胞体外成熟半胱氨酸
- 5-Aza-dc和TSA对陆川猪体细胞核移植的影响
- 陆川猪是全国八大地方良种猪之一。肉质优味道好、母性好且繁殖力高、遗传性稳定,杂交优势明显。本研究选择陆川猪为研究对象,对地方优良品种的育种和保种研究和实际应用均具有特殊的意义。体细胞克隆效率低,普遍认为是由于移入受体的体...
- 胡林林秦小娥卢晟盛陆阳清卢克焕
- 文献传递
- 广西巴马小型猪Oct4基因克隆及其在成纤维细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 根据GenBank中公布的猪Oct4核苷酸序列设计合成1对引物,采用RT-PCR方法从巴马小型猪睾丸组织扩增Oct4基因编码全序列。然后将该基因重组于含有绿色荧光报告基因的真核表达载体pEGFP-N1中,构建成pEGFP-Oct4重组质粒,通过酶切电泳鉴定和DNA测序证明重组质粒构建成功。使用脂质体2000将pEGFP-Oct4转染巴马小型猪肾脏成纤维细胞,荧光显微镜下可观察到绿色荧光,转染细胞株中可检测到Oct4的转录。结果表明,成功构建了真核表达载体pEGFP-Oct4,并可在巴马小型猪肾脏成纤维细胞中表达,为进一步研究Oct4基因生物学功能奠定了基础。
- 宁淑芳李青洋梁明明许惠艳杨小淦陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：巴马小型猪真核表达绿色荧光蛋白
- 猪卵母细胞化学辅助手工去核及手工核移植胚胎发育能力因素的研究被引量：5
- 2011年
- 本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较了化学辅助手工去核法和荧光染色去核法、不同类型的供体细胞(颗粒细胞、新生巴马肌肉成纤维细胞和胎儿成纤维细胞)和供体细胞的不同处理方法(70%～80%汇合、血清饥饿法和100%接触抑制法)对重构胚发育能力的影响。结果表明:(1)利用DC诱导去核,对体外成熟培养44h的卵母细胞以浓度0.4μg.mL-1作用0.5～1h为宜。(2)用DC化学辅助手工去核与用荧光染色去核的重构胚囊胚发育率差异不显著(13.11%vs 9.25%,P>0.05)。(3)以胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞为供体构建的重构胚的融合率、卵裂率及囊胚率均差异不显著(P>0.05)。(4)用70%～80%汇合(对照组)组、接触抑制组和血清饥饿组的细胞作供体构建的重构胚,在融合率上,接触抑制组显著高于对照组(P<0.05);在分裂率与囊胚率上,各组之间均无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,化学辅助手工去核法在实际生产中可以替代荧光染色去核法,能省去去核过程中荧光染色及紫外光照射去核等步骤,从而简化了猪手工体细胞核移植程序,提高了猪手工体细胞核移植效率,能为高效的猪手工体细胞核移植技术体系的建立提供参考。
- 任子利赵彦玲杨小淦陆阳清卢晟盛卢克焕
- 5-Aza-dc和TSA处理巴马小型猪体细胞对其表观遗传修饰和核移植效果的影响
- 【目的】探讨5-Aza-dc(5-氮-2-脱氧胞苷,DNA甲基化转移酶抑制剂)和TSA(Trichostatin A,去乙酰化酶抑制剂)对广西巴马小型猪肾脏成纤维细胞表观遗传修饰及核移植胚胎早期发育的影响。【方法】分别用...
- 宁淑芳李青洋梁明明杨小淦陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：巴马小型猪5-AZA-DCTSA
- 文献传递
