广东省科技计划工业攻关项目(2005B50301016) 作品数:21 被引量:39 H指数:4 相关作者: 李扬秋 杨力建 陈少华 周羽竝 胡刚 更多>> 相关机构: 暨南大学 更多>> 发文基金: 广东省科技计划工业攻关项目 广州市科技计划项目 国务院侨办重点学科基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 更多>>
超抗原SEA体外对Jurkat T淋巴细胞增殖活性与表面超微结构的影响 2009年 目的:通过显微形态观察和功能检测分析超抗原(SEA)对JurkatT淋巴细胞的影响。方法:应用CCK-8法,原子力显微镜(AFM)体外检测JurkatT淋巴细胞增殖活性、及其细胞膜超微结构的改变。结果:与对照组比较,不同浓度的SEA随着作用时间的增加,细胞膜超微结构与R且值明显发生改变。JurkatT淋巴细胞经过质量浓度为0.1—100mg/LSEA,作用48h期间,JurkatT细胞的表面超微结构(平均粗糙度,Ra)和增殖活性(A值)变化非常明显。其中,质量浓度10mg/LSEA作用24h,JurkatT淋巴细胞表面结构变化最明显,而细胞增殖活性在48h达最强。结论:SEA作为超抗原作用于JurkatT淋巴细胞后,JurkatT淋巴细胞的活化表现出表面形态结构改变先于代谢水平的改变,较后者更灵敏。 郜世隽 林晨 龚超群 杨力建 李扬秋 蔡继业 田红霞 高永鹏关键词:JURKAT 超抗原 原子力显微镜 CCK-8 增殖活性 PML-RARα系列重组质粒在BALB/c小鼠体内表达分析 被引量:1 2008年 目的检测PML-RARα融合基因疫苗在小鼠体内的转录和表达。方法用成功构建的重组质粒(PML-RARα-hIL-2)免疫小鼠,于第0周、2周、4周在双侧股四头肌各注射1次,分离注射部位肌肉,用RT-PCR检测目的基因在小鼠骨骼肌中的转录;应用免疫组织化学染色法检测重组质粒蛋白表达。结果小鼠注射部位肌肉中检测到PML-RARα及hIL-2基因的转录,并可检测到hIL-2蛋白的表达。结论所构建的PML-RARα系列重组质粒可以在小鼠体内有效地表达基因产物,具有DNA疫苗的基本特性。 岑东芝 周羽竝 胡刚 杨力建 陈少华 李扬秋关键词:PML-RARΑ HIL-2 急性早幼粒细胞白血病 DNA疫苗 PML-RARα-hIL-2 DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的细胞和体液免疫应答 被引量:1 2008年 目的分析PML-RARα融合基因疫苗诱导小鼠特异体液和细胞免疫应答情况。方法用成功构建的重组质粒(pIRES-PML-RARα-hIL-2)免疫小鼠后,分别利用ELISA法检测小鼠血清中INF-γ生成情况;LDH释放法检测小鼠脾细胞特异性CTL细胞针对APL细胞株NB4的杀伤率;用间接免疫荧光法检测血清中抗PML-RARα抗体。结果免疫后第7周时,小鼠血清中INF-γ含量、抗PML-RARα抗体及脾脏CTL细胞针对NB4的杀伤率均高于对照组。结论所构建的pIRES-PML-RARα-hIL-2重组质粒可诱导小鼠产生了特异性体液和细胞免疫应答。 杨力建 岑东芝 周羽竝 胡刚 陈少华 李扬秋关键词:PML-RARΑ HIL-2 DNA疫苗 细胞毒活性 PML-RARα-hIL-2 DNA疫苗免疫BALB/c小鼠后胸腺初始T细胞水平变化 被引量:1 2008年 目的了解PML-RARα-hIL-2基因疫苗免疫小鼠后胸腺初始(na(?)ve)T细胞变化情况。方法利用实时定量PCR检测小鼠胸腺组织DNA中T细胞受体删除DNA环(TRECs)的水平,从而评价小鼠胸腺中na(?)ve T细胞含量。结果利用PML- RARα-hIL-2 DNA疫苗免疫小鼠后胸腺中所含的TRECs拷贝数明显高于单个基因疫苗PML-RARα或hIL-2组及对照组。结论所构建的PML-RARα-hIL-2双表达质粒可诱导小鼠胸腺产生na(?)ve T细胞数量增加,可能与产生更强的细胞免疫应答有关。 周羽竝 岑东芝 杨力建 陈少华 胡刚 李扬秋关键词:PML-RARΑ HIL-2 TRECS PML-RARα/pIRES和PML-RARα/pSecTag重组载体的构建和鉴定 被引量:1 2006年 目的构建PML-RARα基因重组表达质粒,为发展PML-RARα基因疫苗提供实验依据。方法利用RT-PCR方法从急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞中扩增出465bp的位于PML-RARα融合基因的框内结构的片段,克隆至真核表达载体pIRES和分泌载体pSecTag后,经酶切和序列分析鉴定重组质粒的构建情况。结果经酶切鉴定和序列测定表明,PML-RARα目的基因已正确插入真核表达载体中,构成了目的重组载体。结论成功构建了PML-RARα/pIRES和PML-RARα/pSecTag重组真核表达质粒,可进一步用于PML-RARα基因疫苗的实验研究。 汤冀 李扬秋 周羽竝 杨力建 陈少华 胡刚 罗更新关键词:克隆 急性早幼粒细胞白血病 PML-RARα多肽和NB4细胞体外诱导CTL细胞杀伤活性分析 被引量:5 2005年 目的了解PML-RARα多肽和NB4细胞体外诱导体外诱导增殖的T细胞的特异性细胞毒作用.方法采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养(MLTC)方法,经丝裂霉素C处理的NB4细胞或PML-RARα多肽(LSSCITQGKAI-ETQSSSSEE)作为刺激原体外诱导脐血单个核细胞增殖.利用LDH方法检测诱导后T细胞的细胞毒性.结果PML-RARα多肽诱导组第10d和第15d T细胞对NB4细胞的杀伤活性为:49.65±6.7%(p<0.01)和73.13±8.42%(p<0.01),NB4细胞诱导组第10d和第15d T细胞对NB4细胞的杀伤活性为:53.33±8.82%(p<0.01)和74.46±9.57%(p<0.01),而无诱导组的第10d和第15d T细胞对NB4细胞的杀伤活性为:15.93±9.25%和38.19±10.54%,前两组T细胞对NB4细胞的杀伤作用均明显高于对照组.结论PML-RARα多肽和NB4细胞体外可诱导出特异性T细胞,他们对表达PML-RARα的NB4细胞具有选择性杀伤作用. 杨力建 李扬秋 陈少华 汤冀关键词:NB4细胞 细胞毒活性 PML-RARα融合基因及其诱导特异性免疫应答 被引量:2 2005年 PML-RARα融合基因通过其转录抑制作用而诱发APL已基本得到认可,但其引发APL的机制是错综复杂的,在PML-RARα融合基因的致病过程中,必须有其他因素的共同参与才能导致APL.同时PML-RARα融合蛋白上存在着抗原性,PML-RARα多肽可诱导特异性免疫应答,为免疫治疗的研究提供了可能性. 汤冀 李扬秋关键词:PML-RARΑ 急性早幼粒细胞白血病 基因疫苗 克隆性 SEA对PML-RARα多肽体外诱导外周血单个核细胞TCRζ链表达的作用 被引量:1 2008年 目的:了解金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)联合PML-RARα融合多肽体外诱导正常人外周血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:利用T细胞液体培养法分别与正常人外周血淋巴细胞加入PML-RARα融合多肽、SEA和SEA联合PML-RARα多肽诱导培养T细胞,其中SEA刺激包括培养初始或培养第5天加入SEA两组(PS、PSI),并设空白对照组(不加多肽及SEA)。分别收集各组培养20 d后细胞提取mRNA并合成cDNA,采用SYBR G reenⅠ荧光定量PCR和相对定量检测TCRζ链在不同组别T淋巴细胞中的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-△△C t分析TCRζ链表达差异。结果:与空白组相比,联合诱导组在培养初始加入SEA及第5天加入SEA的培养T细胞中TCRζ链表达上升,而单独SEA诱导组的TCRζ链表达下降。结论:超抗原SEA联合PML-RARα多肽体外诱导T细胞可使TCRζ链基因表达水平升高,有望为研制急性早幼粒细胞白血病疫苗提供新的切入点。 高珂 林晨 白雪 陈少华 杨力建 陈思 B.N.Selvakumar 李扬秋关键词:实时定量PCR 金黄色葡萄球菌肠毒素A T细胞受体 APL患者外周血TCR Vα亚家族T细胞分布和增殖特点 被引量:7 2007年 目的:了解急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周血TCRVα亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法:利用RT-PCR扩增9例APL患者和10例正常人外周血单个核细胞中29个TCRVα亚家族基因的互补决定区3(CDR3),了解TCRV理亚家族T细胞的分布;阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性。结果:9例患者外周血T细胞所能检测到的Vα亚家族T细胞分别为1~9个亚家族,以Vet3和Vα19出现频率较高;克隆性增殖T细胞可在8例患者中检测到,以Vα3、Vα26和Vα27出现克隆性T细胞频率较高(3/8)。正常人外周血T细胞中表达绝大多数Vα亚家族,呈多克隆性增殖特点。结论:APL患者外周血Vα亚家族T细胞存在明显的倾斜性分布和克隆性增殖特点,后者可能是对APL细胞抗原的反应性增殖,是否具有特异性杀伤作用,有待进一步检测。 岑东芝 李扬秋 陈少华 杨力建 郁志关键词:急性早幼粒细胞白血病 T细胞受体基因 克隆性 超抗原SEA增强PML-RARα多肽体外诱导特异性CTL杀伤活性的机制 被引量:6 2008年 目的探讨超抗原SEA体外增强PML-RARα多肽诱导特异性CTL杀伤活性的机制。方法分别将SEA、PML-RARα多肽以及SEA联合PML-RARα多肽与正常人外周血单个核细胞共同培养,利用CCK-8比色法检测诱导后T细胞对NB4和K562细胞株杀伤活性,同时利用流式细胞术测定诱导T细胞表面CD4与CD8表达情况。结果诱导后第20天,SEA能明显增强PML-RARα多肽特异性杀伤NB4细胞株的作用。诱导后第5、10、20天动态检测表明,多肽及SEA联合多肽组CD4+/CD8+比值逐渐降低,其中SEA联合PML-RARα多肽诱导组降低最显著。结论超抗原SEA能明显增强PML-RARα多肽体外诱导特异性CD8+T细胞的增殖与特异性的杀伤作用。 林晨 白雪 高珂 杨力建 陈少华 李扬秋关键词:超抗原 NB4细胞 T细胞