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教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET11-1059): 作品数：23 被引量：132H指数：7; 相关作者：朱玲徐志文周远成郭万柱吴云飞更多>>; 相关机构：四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川省动物疫病预防控制中心更多>>; 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”四川省科技支撑计划长江学者和创新团队发展计划更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生更多>>

伪狂犬病毒表达载体的研究进展被引量：4: 2016年; 随着生物工程技术的逐步发展和完善,利用伪狂犬病毒作为载体的相关研究也取得了一定突破,为后续的伪狂犬基因工程疫苗研制奠定了基础。文中以缺失处理相关基因的伪狂犬病毒作为载体,与构建的携带外源基因的质粒在细胞内同源重组的研究现状进行了综述。; 赵军黄剑波朱玲徐志文; 关键词：伪狂犬病毒

猪细小病毒四川株的分离鉴定及其一步生长曲线: 2013年; 为了研究猪细小病毒(PPV)的增殖规律,利用PK-15细胞从流产胎儿的肝、肠系膜淋巴结和肾样品中分离到1株病毒,经PCR检测、蚀斑纯化、病毒理化试验、微量中和试验和血凝试验证实该分离株为猪细小病毒,命名为SC-L。针对PPV的VP1和NS1基因设计特异性引物,建立PPV的荧光定量PCR方法。以SC-L分离株感染PK-15细胞,感染后每隔4h分别收集感染细胞与上清液,利用荧光定量PCR方法对不同样品中的病毒DNA进行定量分析,绘制PPV SC-L的一步生长曲线。PPV SC-L株感染PK-15细胞,细胞外病毒含量在第4～20小时缓慢增加,20h后呈对数增长,第56小时达到最大值,随后病毒含量迅速下降,在第68小时时趋于稳定;在细胞内感染4h检测到微量的病毒粒子,第4～24小时细胞内病毒缓慢增长,24h细胞内病毒粒子呈对数增长,第44小时达到最大量,随后胞内病毒粒子逐渐降低。表明PPV在细胞内增殖到一定数量后逐步释放到细胞外,且细胞外病毒最大量高于细胞内。; 江一帆吴云飞朱玲徐志文阳爱国廖珊陈蕾黄仆郭万柱; 关键词：猪细小病毒实时荧光定量PCR

猪细小病毒PK-15细胞适应株的培育及增殖特性被引量：8: 2013年; 为了研究猪细小病毒不同接毒方式的增殖规律及在不同细胞的病毒含量差异。本实验利用PK-15细胞对猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)分离株进行适应性培养。针对PPV的NS1基因设计特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法。利用该方法检测PPV分离株同步和分步接毒的病毒含量,绘制一步生长曲线;同时检测PPV在HeLa、MDBK、PK-15、ST、F81、BHK-21和Marc-145细胞上的增殖特性。结果显示,PPV分离株盲传至12代产生CPE,继续传代培养10代仍能产生稳定的细胞病变,成功培育出PK-15细胞适应株。一步生长曲线显示,分步接毒的病毒含量高于同步接毒,而增殖周期短于同步接毒;PPV在不同细胞的增殖结果显示,各细胞开始出现CPE的时间依次为PK-15、ST、HeLa和MDBK,病毒含量高低依次是ST、PK-15、MDBK和HeLa,而不能在F81、BHK-21和Marc-145细胞上增殖。本实验首次利用荧光定量PCR方法成功分析PPV不同接毒方式的增殖规律及不同细胞的增殖特性,为PPV基础研究和疫苗生产提供资料。; 吴云飞朱玲徐志文付梦瑾陈蕾阳爱国郭万柱; 关键词：猪细小病毒实时荧光定量PCR

猪A群轮状病毒和C群轮状病毒以及猪星状病毒多重RT-PCR同时检测方法的建立及应用被引量：11: 2014年; 为建立同时快速检测猪A群轮状病毒(GARV)、猪C群轮状病毒(GCRV)和猪星状病毒(AstV)的三重RT-PCR检测方法,根据GenBank中公布的序列进行病毒基因区同源性分析,然后使用Primer Premier 5.0软件分别设计了GARV、GCRV的VP6基因和AstV的ORF2基因特异性引物,预期扩增片段的大小分别为229、166和410bp。在这3种病毒单项RT-PCR技术的基础上,建立了GARV、GCRV和AstV的多重RT-PCR检测方法,并用该方法检测30份四川省仔猪腹泻粪样。结果显示,GARV、GCRV、AstV的阳性检出率分别为26.7%、13.3%、16.7%,本方法与这3种病毒的单项RT-PCR检测结果的符合率分别为100%、100%、83%,整体符合率达94.3%,特异性为100%。结果表明,本试验建立的多重RTPCR检测方法具有特异、快速、准确的特点,可用于GARV、GCRV和AstV的同时检测。; 杨文宇周远成韩燕陈蕾廖春燕付梦瑾季洪伟蔡雨涵朱玲徐志文郭万柱; 关键词：多重RT-PCR

四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查被引量：6: 2015年; 为了解2012-2013年四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异背景和分子流行病学情况,对PRRSV阳性病料中的Nsp2、ORF5基因进行RT-PCR扩增和序列测定,所获得的序列分别与美洲型代表株(VR2332)、欧洲型代表株(LV)、标准毒株和变异毒株进行相似性分析。结果本研究成功获得8条Nsp2基因序列和17条ORF5基因序列,序列分析表明所有PRRSV流行毒株均属于美洲型,其中8株Nsp2基因序列与标准毒株和变异毒株的核苷酸相似性分别为75.2%~88.6%和94.8%~97.1%,推导的氨基酸相似性分别为58.7%~79.2%和92.8%~94.8%;17株ORF5基因序列与标准毒株和变异毒株的核苷酸相似性分别为90.1%~96.6%和95.6%~99.4%,推导的氨基酸相似性为77.2%~93.0%和88.0%~96.8%;与标准毒株相比,8株Nsp2基因有30个不连续氨基酸缺失,17株ORF5基因序列有点突变。从遗传进化分析看,所有流行毒株均属于PRRSV亚群Ⅲ。; 蔡雨函杨雪徐志文郭万柱周远成吴云飞杨文宇朱玲; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2基因 ORF5基因

猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及增殖规律被引量：18: 2013年; 为了研究猪流行性腹泻病毒（PEDV）的生长规律，利用Vero细胞从四川腹泻仔猪小肠内容物中分离得到1株病毒，经RT—PCR检测、序列比对、病毒理化试验与微量中和试验证实该分离株为猪流行性腹泻病毒，命名为SC—P，以该毒株经口接种28日龄仔猪，5d后出现明显临床症状。以SC—P分离株感染Vero细胞，收集不同时间的细胞上清，利用建立的PEDV荧光定量检测方法对不同时间点样品中病毒RNA进行定量分析，绘制PEDV的一步生长曲线。结果显示，细胞外的病毒RNA含量呈S形曲线增长，感染后第2～6小时，病毒RNA含量的增长较慢，第6～24小时呈对数增长，第24～72小时增长速度减缓，维持在较高水平，进入稳定期。表明PEDV感染Vero细胞，病毒在细胞内增殖到达一定数量以后，便逐步向胞外释出。; 付梦瑾朱玲吴云飞唐蕊涵徐志文郭万柱; 关键词：猪流行性腹泻病毒

猪流行性腹泻病毒感染PK-15细胞miRNA的差异表达分析被引量：1: 2016年; 为研究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diahorrea virus,PEDV)对猪肾传代细胞PK-15miRNA表达谱的影响,将PEDV感染PK-15细胞后,提取总RNA,进行高通量测序,构建感染与未感染PEDV的PK-15细胞的miRNA表达谱,并进行差异性分析,对表达差异显著的miRNA进行heatmap聚类分析及GO(Gene ontology,GO)分子功能(Molecular function,MF)分析,选取10个显著性差异表达的miRNA通过RT-qPCR进行了验证。结果发现,显著性差异表达的miRNA有214个,其中175个miRNA表达上调,39个miRNA表达下调。Heatmap聚类分析表明,病毒组绝大部分差异表达的miRNA较对照组表达量上调,少部分下调。GO分析表明,miRNA广泛参与结合、蛋白结合、蛋白激酶活性、转移酶活性、含磷基团转移、磷酸转移酶活性等生物作用。RT-qPCR验证的各miRNA的表达趋势与高通量测序结果一致。结果表明,猪流行性腹泻病毒感染对PK-15细胞编码的miRNA表达水平有显著影响,从而对进一步研究治疗PEDV的miRNA制剂提供新思路。; 黄剑波郎巧利李新琼徐志文朱玲周远成; 关键词：猪流行性腹泻病毒 PK-15细胞

犬细小病毒四川株的分离鉴定与一步生长曲线的测定被引量：6: 2014年; 为研究犬细小病毒（CPV）生长规律，利用F81细胞从四川地区疑似CPV感染的病犬血样粪便中分离得到1株CPV，对该株病毒进行理化试验、微量中和试验、PCR鉴定以及分子生物学系统鉴定后，证实该分离株是CPV，命名为SC—C。以SC—C分离株感染F81细胞，感染后不同时间收取上清，利用CPV荧光定量PCR检测方法对不同样品中病毒DNA进行定量分析，绘制CPV一步生长曲线。结果显示，感染后，0～8h细胞内病毒DNA含量较低，感染8h后，细胞内病毒DNA含量逐渐增长，12～60h细胞内病毒DNA含量迅速增长，60h后细胞内病毒DNA含量变化不大。CPV感染F81细胞，感染后O～12h为潜伏期，病毒DNA含量维持在较低水平；12～60h为突破期，病毒DNA含量呈对数增长；感染60h后增长速度减缓，病毒含量维持在较高水平逐步进入稳定期，病毒DNA含量呈“S型”曲线增长。; 韩燕朱玲周远成廖春燕徐志文郭万柱; 关键词：犬细小病毒荧光定量PCR

猪嵴病毒和猪星状病毒及猪环曲病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用被引量：7: 2015年; 根据猪嵴病毒(PKV)3D基因、猪星状病毒(PAstV)ORF2基因和猪环曲病毒(PToV)M基因的序列,设计了3对引物,通过反应体系和条件的优化,首次建立了检测猪嵴病毒、猪星状病毒和猪环曲病毒的多重RT-PCR。本研究建立的多重RT-PCR对PKV、PAstV和PToV的最低检出限分别为1.51×104、1.19×103、1.26×104 copies/μL,同时也具有较强的特异性和良好的重复性。用该方法检测了40份来自四川省部分猪场的仔猪腹泻病样。结果显示,PKV、PAstV、PToV的阳性检出率分别为75.0%、30.0%和22.5%。与单一RT-PCR检测结果一致。本方法的建立对PKV、PAstV、PToV的鉴别诊断和混合感染检测具有重要的应用价值。; 顾凡周远成黄剑波樊毅赵洲乔小改朱玲刘书亮徐志文; 关键词：多重RT-PCR

猪乙型脑炎病毒SC-YA株部分生物学性状的研究被引量：1: 2013年; 为猪乙型脑炎疫苗的生产和保存提供指导和依据,本试验对乙型脑炎病毒(JEV)SC-YA株的理化特性、细胞培养特性进行了研究。理化鉴定结果表明,JEV SC-YA株是具有囊膜的RNA病毒;胰蛋白酶、酸性、高温等均可使其失去活性。该株病毒的最佳培养条件为培养液用量为6mL,接种剂量为10-4TCID50/0.1mL时,接种后第48小时病毒滴度达到最大值。结果表明,JEV SC-YA株能被用于疫苗生产。; 廖珊刘骁朱玲郭万柱; 关键词：乙型脑炎病毒理化性质

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