国家重点基础研究发展计划(2007CB914603)
- 作品数：9 被引量：21H指数：3
- 相关作者：周平坤王豫张士猛徐勤枝汪黎更多>>
- 相关机构：军事医学科学院安徽医科大学中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- Tat蛋白与Plk1相互作用位点的鉴定
- 2011年
- 目的确定Tat蛋白与Plk1的相互作用及作用位点。方法构建tat和plk1基因的不同表达载体,通过GST-pull down、免疫共沉淀检测它们表达产物的相互作用位点,激光共聚焦确定其在细胞内的定位。结果 GST-pull down和免疫共沉淀实验发现Tat蛋白能结合在Plk1 N端的激酶区域,激光共聚焦发现Tat蛋白和Plk1在细胞核内有相同的亚细胞定位。结论 Tat蛋白能结合在Plk1 N端的激酶区域引起Plk1 T210的磷酸化水平提高,从而激活Plk1的活性,导致细胞周期的紊乱。
- 杨天一张士猛尚增甫刘晓丹周平坤
- 关键词：PLK1
- 香兰素衍生物VND3207对不同LET辐射致质粒DNA损伤的防护作用被引量：2
- 2011年
- 目的评价不同LET辐射致DNA损伤以及药物的防护作用。方法分别以^60Coγ射线、质子束、^7Li重离子束照射溶液状态超螺旋构象质粒DNA，通过琼脂糖凝胶电泳分析DNA分子构象变化，检测DNA损伤程度及VND3207的防护作用。结果质子和^7Li重离子体外所致质粒DNA损伤明显比γ射线严重。药物VND3207能够有效减轻所观察的3种不同LET辐射对质粒DNA的损伤，加药组与不加药组相比，质粒DNA开环构象显著减少，保护效果随着药物浓度的增加更加明显。200μmol／L浓度对50Gyγ射线、质粒和^7Li重离子辐照质粒DNA损伤的保护效果（质粒超螺旋构象百分比）分别为85．3％（t=3．70，P=0．033）、73．3％（t=10．58，P=0．017）和80．4％（t=8．57，P=0．008）。可见VND3207对重离子辐射损伤的保护效应尤为显著，明显优于质子辐照损伤。结论药物VND3207对辐射DNA损伤具有较好的保护作用，特别是对．y射线和重离子辐射损伤的保护作用更为明显。
- 徐辉辉汪黎隋丽关华王豫刘晓丹张士猛徐勤枝王潇周平坤
- 关键词：DNA损伤辐射防护Γ射线重离子质子
- DNA-PKcs缺陷导致细胞周期反应机制紊乱及有丝分裂灾变死亡
- DNA-PKcs是DNA依赖蛋白激酶的催化亚单位(DNA Dependent Protein Kinase Catalytic Subunit),与另外两个亚单位Ku70和Ku80共同构成DNA-PK复合物。与ATM、A...
- 尚增甫徐勤枝涨士猛刘晓丹王豫周平坤
- 病毒蛋白与宿主相互作用及其对细胞放射敏感性的影响
- 2009年
- 为了解病毒感染对电离辐射生物效应的可能影响和作用机理,本文着重评述了病毒编码蛋白与宿主细胞蛋白的相互作用,特别是干扰宿主DNA损伤修复、影响辐射致细胞凋亡、干扰DNA损伤后的细胞周期检查点,以及其对哺乳动物细胞的放射敏感性的影响。病毒蛋白与宿主细胞的相互作用,不仅在病毒感染及相应致病作用中扮演着重要角色,而且也影响到被感染组织对辐射或某些化学物质的反应。业已证实,一系列的病毒蛋白与宿主蛋白发生作用,这种作用与包括DNA修复、凋亡、细胞周期检查点在内的DNA双链断裂的细胞反应有关,造成宿主蛋白的细胞定位改变、降解、失活或激活等;另外一些蛋白直接或间接调节多种宿主基因的转录水平,或诱发辐射损伤反应相关蛋白的转录后修饰的变化,使得这些基因产物上调或下调、活性改变。病毒蛋白与宿主的相互作用,在一定程度上改变了细胞的放射敏感性。充分、准确地了解病毒感染的辐射生物学意义,将促进我们关于人体对辐射健康效应的个体敏感性的理解和对未来辐射防护思路的拓展。
- 周平坤
- 关键词：DNA细胞周期检查点病毒蛋白
- 香兰素衍生物BVAN08对人脑胶质瘤细胞的放射增敏作用及机制研究
- 2010年
- 目的 研究香兰素衍生物6-溴异香兰素（BVAN08）对人脑胶质瘤细胞的增殖影响、放射增敏作用和相关机制,为开发新的放射增敏抗癌药物提供实验依据.方法 采用MTT法、克隆形成率法检测BVAN08对U-251细胞增殖活性和60Co γ射线敏感性的影响（照射剂量率为2.3 Gy/min）;光学显微镜观察BVAN08作用后细胞形态学变化;透射电镜检测细胞自吞噬死亡;流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化;Western blot检测DNA修复蛋白DNA-PKcs的表达变化.结果 6-溴异香兰素BVAN08对U-251细胞增殖有显著抑制作用（t=1.83～3.07,P＜0.05）,在10～100 μmol/L浓度范围内呈剂量和作用时间依赖性,药物作用48和72 h的IC50分别为55.3和52.7 μmol/L.60 μmol/L BVAN08作用4 h后,U-251细胞产生明显的G2/M期阻滞,12 h达到峰值,G2/M阻滞达到63.3%,并开始同时出现细胞凋亡和自吞噬死亡.BVAN08对U-251细胞有明显的放射增敏作用,而且在照射前12 h给药的增敏效果最好,20 μmol/L浓度对2 Gy照射杀伤U-251细胞的增强比为3.14.Western blot检测表明BVAN08能显著抑制DNA-PKcs的表达.结论 香兰素衍生物BVAN08具有明显抑制人脑胶质瘤U-251细胞增殖和辐射增敏作用、并同时诱发凋亡和自吞噬死亡.BVAN08对U-251细胞的辐射增敏作用可能与G2/M期阻滞和DNA双链断裂修复关键蛋白DNA-PKcs表达的抑制敏感性有关.
- 王树彬张博孙伟建王豫刘晓丹徐勤枝周平坤
- 关键词：人脑胶质瘤细胞DNA-PKCSG2/M期阻滞放射增敏
- 凸性颗粒构成的粘连区域的三类自动分离方法的对比分析被引量：1
- 2011年
- 数字图像中粘连目标区域的自动、准确分离是图像分析的难点和热点,直接影响着各类图像自动分析系统的整体性能。本文对凹点分析、椭圆拟合和流域变换三类粘连目标分离方法的主要步骤、优缺点和适用性进行了比较分析。分析结果表明:凹点分析法适用于分离轮廓凹陷明显的少数凸性颗粒构成的简单区域;椭圆拟合法往往适用于有粘连的特定颗粒的自动计数;而流域变换对较多数目颗粒构成区域具有较强的自动分离能力,具有可并行处理、分离彻底等优点。这对有涉及粘连颗粒自动分离的图像自动分析系统的设计具有一定的参考意义。
- 闫学昆陈英张燕袁宝吉曹珍山周平坤
- Proteomic analysis reveals the radiosensitization of vanillin derivative bromovanin by targeting G2/M checkpoint and mitotic catastrophe
- AIM To study the radiosensitizing effect and the related mechanism of the novel vanillin derivative bromovanin...
- Bo ZhangShu-Bing WangQin-Zhi XuXiao-Dan LiuPing-Kun Zhou
- 香兰素衍生物VND3207对α粒子辐射诱发人成纤维细胞基因组DNA损伤的防护研究被引量：7
- 2010年
- 高能α粒子辐射所致基因组DNA损伤形式为复杂的簇集损伤。修复难度大，生物效应严重，目前尚缺乏有效防护药物。前期发现香兰素衍生物VND3207具有抗氧化损伤、促进DNA双链断裂损伤修复的作用．能有效防护低传能线密度（LET）γ射线诱发细胞凋亡和基因组损伤。本研究旨在探讨VND3207对高能α粒子辐射诱发人成纤维细胞基因组DNA损伤的防护效应。细胞克隆形成实验表明，VND3207无论是照射前加药还是照射后加药作用均能增强人成纤维HFS细胞对α粒子的辐射损伤抗性。通过中性单细胞凝胶电泳（彗星电泳）、γ-H2AX免疫荧光簇集点、γ—H2AX蛋白表达水平、细胞微核等多个基因组DNA损伤指标分析，表明了VND3207对α粒子辐射诱发细胞基因组DNA损伤的有效防护作用，其在5～10μmol／L浓度下。就可产生显著辐射防护效果，既能减轻α粒子辐射诱发细胞DNA的原初损伤水平。又能提高细胞的DNA修复能力。因此。VND3207具有维护高能粒子辐照细胞的基因组稳定性的作用。有开发成为抗高LET辐射损伤新药的价值。
- 陈倩倩汪黎尚增甫刘晓丹王豫郑红汪思应周平坤
- 关键词：Α粒子辐射防护剂DNA损伤微核
- 从大容量噬菌体抗体库中筛选抗DNA-PKcs人源单链抗体被引量：6
- 2008年
- 目的:从单链大容量噬菌体抗体库中筛选特异性的抗DNA-PKcs的人源抗体,用于肿瘤治疗或诊断目的。方法:经抗原性分析及BLAST比对,选定人DNA-PKcs蛋白中抗原性高且与其他蛋白没有同源性的片段,进行原核表达及纯化后将其固定在抗原管上,通过4轮"吸附-洗脱-扩增"过程从大容量抗体库中筛选特异性抗体,转化HB2151菌,制备抗DNA-PKcs的可溶性单链抗体;ELISA检测抗原-抗体结合活性。结果:经生物信息学分析,确定抗原性高且与其他蛋白没有同源性的DNA-PKcs片段DPK3(250个AA)、DPK4(257个AA)。经过4轮筛选,获得26个特异性结合DPK3及31个特异结合DPK4的克隆,指纹分析分别有5种和21种不同的可变区片段;成功制备了可溶性抗体。并做了抗原结合活性鉴定。结论:利用单链大容量抗体库获得抗DNA-PKcs的噬菌体抗体基因并且成功制备成可溶性抗体,为今后的研究和应用奠定了基础。
- 杜丽周丽君潘秀颉王豫王欲晓杨陟华徐勤枝张士猛朱茂祥周平坤
- 关键词：单链抗体
- 低剂量与大剂量γ射线辐照人淋巴母细胞的独特和交迭基因转录谱的比较研究(英文)
- 毒性物质如电离辐射诱发生物学效应的表型变化和严重程度与暴露剂量与时间密切相关,早期诱导基因表达变化是哺乳动物细胞对电离辐射损伤的基本反应,其在多样性细胞辐射反应中发挥重要作用。为了研究比较低到大剂量γ射线照射细胞诱导基因...
- 周平坤丁库克贺性鹏龙贤辉王豫徐勤芝陈英
- 关键词：DNA损伤细胞周期检测点低剂量辐射
- 文献传递
