国家自然科学基金(30470797)
- 作品数：3 被引量：24H指数：2
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- 负载hTERT复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定被引量：8
- 2006年
- 目的:构建负载人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的复制缺陷型腺病毒.方法:将克隆有正义hTERTcDNA的腺病毒穿梭质粒pDC315-hTERT与腺病毒包装质粒pBHGlox-DeltaE1,3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装负载hTERT基因的复制缺陷型腺病毒表达载体(Ad-hTERT).对Ad-hTERT扩增、纯化并浓缩后,进一步行感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定.结果:纯化浓缩后的Ad-hTERT滴度可达5×1012pfu/L.电镜下可见在HEK293细胞中形成的病毒颗粒,PCR双引物鉴定Ad-hTERT可扩增出Ad及hTERT特异片段,而对照则不能扩出hTERT片段.结论:成功构建了负载hTERT基因的复制缺陷型腺病毒.
- 陈陵向国春李向红蔡永国李晶晶房殿春罗元辉李志宏杨仕明
- 关键词：人端粒酶逆转录酶
- 人端粒酶催化亚单位基因正反义腺病毒表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的:构建hTERT正义和反义腺病毒表达载体.方法:用EcoRⅠ从pGRN145质粒上切下约3.5 kb的人端粒酶全长cDNA片段,然后连入pDC315质粒的EcoRⅠ酶切位点上,经BamHⅠ酶切鉴定出正义和反义表达载体,并对正反义重组质粒进一步测序鉴定其方向.结果:经BamHⅠ酶切后,正义质粒形成1.0+6.4 kb两条带.反义重组质粒为1.0+2.5+3.9 kb三条带,与理论计算值完全一致,测序结果进一步确认了方向的正确性.结论:成功构建了hTERT的正、反义腺病毒表达载体.
- 陈陵杨仕明蔡永国房殿春罗元辉
- 关键词：人端粒酶催化亚单位腺病毒
- 胃黏膜癌变过程中hTERT和相关基因表达的变化及其临床意义被引量：16
- 2006年
- 目的探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)、c-myc、bcl-2、NF-κB蛋白在正常胃黏膜(normalmucosa,NM)、肠化(intestinalmeta-plasia,IM)、异型增生(dysplasia,DYS)、早期胃癌(earlygastriccancer,EGC)和进展期胃癌(advancedgastriccancer,AGC)中的表达水平、相互联系及其临床意义。方法经手术或胃镜病理证实的不同病变胃黏膜组织132例为研究对象(其中NM20例、IM30例、DYS15例、EGC24例、AGC43例),采用免疫组化SP法分别检测其hTERT、c-myc、bcl-2、NF-κB的表达水平,并对各指标阳性表达率、相关性及临床病理联系进行比较分析。结果在胃黏膜癌变过程中,除bcl-2外,hTERT、c-myc、NF-κB的表达随着胃黏膜病变程度的加重而逐渐增加,各组间比较差异显著;进一步分析表明hTERT与c-myc在IM、DYS、AGC等3组中具有显著的相关性(P<0·05),而hTERT与bcl-2、NF-κB在IM、DYS、EGC、AGC等各组中均无显著的相关性(P>0·05);临床病理分析表明,hTERT在低分化及未分化中的表达显著高于高、中等程度分化(P<0·05),而与性别、年龄、肿瘤大小等无关。结论hTERT随着胃黏膜病变程度的加重,其阳性表达率逐渐增高,提示hTERT可能在胃黏膜癌变过程中具有重要意义,是胃黏膜癌变的早期事件;c-myc过表达可能是激活hTERT过表达的重要调节因素;hTERT不仅可以作为胃黏膜癌变的早期诊断指标,而且有可能成为胃癌或其他肿瘤基因治疗或免疫治疗的良好靶位。
- 陈陵陈婷蔡永国汤旭东李晶晶房殿春罗元辉余松涛杨仕明
- 关键词：人端粒酶逆转录酶胃癌C-MYC
